HPLC法测定止痒胶囊中丹参酮Ⅱa的含量

【摘要】　目的： 建立以高效液相色谱法测定止痒胶囊中丹参酮Ⅱa含量的方法。方法 色谱柱为Hypersil ODS C18 (4.6mm×200mm,25mm),流动相为甲醇-水系统（75 ：25），检测波长为270nm ；流速为1ml/min ；温度为30℃；进样量为10μl 。结果：进样量在1～16μl线性关系良好，平均回收率为100.38%，RSD%小于5%。结论：在选定条件下丹参酮Ⅱa与样品中其他组分色谱峰可基线分离，分离度大于1.5，拖尾因子在0.95~1.05之间，且阴性对照无干扰。方法简便、准确、重现性好，可作为止痒胶囊的含量测定方法。

【关键词】　hplc; 止痒胶囊；丹参酮Ⅱa；含量测定

止痒胶囊是中医治疗瘙痒病症的临床经验方，该处方由丹参、苦参、赤芍、川芎、苍耳子、蒺藜、白鲜皮组成，本方以攻毒疗疮、杀虫止痒为主要疗效。治疗各种病症引起的皮肤瘙痒安全有效。本研究用HPLC法对处方中君药丹参的主要成份丹参酮Ⅱa进行了含量测定，结果方法准确，可靠，重现性好，阴性无干扰，可以作为其质量控制参考。1　仪器与试药

戴安Ultimate3000高效液相色谱仪；Hypersil ODS C18色谱柱（25mm，4.6mm×200mm，VWD-3400紫外检测器，LPG-3x00泵）；KQ-250E型超声波清洗器；电子分析天平。丹参酮Ⅱa对照品购自中国药品生物制品检定所。止痒胶囊为自制，药材均购自哈尔滨世一堂饮片厂。水为重蒸馏水，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。2　方法与结果2.1　色谱条件 色谱柱为ODS C18反相色谱柱 ；理论塔板数以丹参酮Ⅱa计算不低于3000 ； 流动相为甲醇-水系统（75 ：25） ；检测波长为270nm ；流速为1ml/min ；温度为30℃。在选定条件下丹参酮Ⅱa与样品中其他组分色谱峰可基线分离，分离度大于1.5，拖尾因子在0.95～1.05之间，且阴性对照无干扰。2.2　对照品溶液制备 精称在五氧化二磷干燥器中干燥24小时的对照品10mg,置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，超声片刻将其混匀，精密量取2ml,置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，超声混匀，即得（每1ml中含丹参酮Ⅱa 16μg）。2.3　供试品溶液制备 取药品内容物1.5g，置于25ml容量瓶中，加氯仿定容，超声40分钟混匀，氯仿补足缺失，滤纸过滤，滤液挥干后经甲醇溶解，置于2ml容量瓶中定容，0.22μm注射滤头过滤进样。2.4　线性关系考察 精密抽取配置好的丹参酮Ⅱa对照品溶液1、2、4、8、16μl按照上述色谱条件分别进样，记录色谱图，测定峰面积，并以峰面积（A）为纵坐标对进样量（C）为横坐标进行回归，得标准曲线方程Y=0.7467X+0.6917，r=0.9997线性关系良好。2.5　精密度考察

精密吸取对照品溶液10μl连续进样6次，试验结果RSD%=1.91%,表明本法精密度良好。2.6　稳定性考察 精密称取药品内容物粉末，按上述方法配制成供试品溶液后，按照时间分别于0小时，6小时，12小时，24小时，48小时间隔进样，分别每次进样量为10μl（供试品溶液用棕色磨口玻璃容量瓶密封低温保存）。试验表明两天内测得供试品溶液丹参酮Ⅱa的含量稳定。2.7　重现性考察 精密称定药品内容物5份，按照上述所选方法制备供试品。依前述色谱条件分别测其含量，RSD%=3.28%,结果表明重现性好。2.8　加样回收试验 精密称取九份已知含量的供试品1.5g，在供试品中分别加入对照品溶液1ml,2ml,3ml,重复试验三次，按上述液相供试品溶液处理方法处理，制备加样供试品溶液，10μl进样进行高效液相色谱含量测定，结果见表1.2.9 　含量测定 精密称取药品内容物1.5g三份，按照上述选定方法处理，10μl进样，测定含量，结果见表2.

表1 加样回收表格

表2 含量测定表格3　讨论

止痒胶囊为自制，即将处方中的药物按处方比例筛选提取方法，工艺条件，经纯化，制粒，灌装。经过试验数据对比比较之后，按照确定的最终制备方案制备。

丹参酮Ⅱa对照品的储存，丹参酮Ⅱa见光易分解，所以应储存在棕色的玻璃瓶内，由于对照品的配置溶液为甲醇易挥发，所以应低温密封保存。丹参酮为本方君药，丹参酮Ⅱa为丹参酮的中药成份，定性鉴别的效果突出无干扰，所以选此为定性测定的对照物质。参考文献[1]田玉清，王刚，赵才德.高效液相色谱法测定胃康胶囊中橙皮苷的含量[J].现代中药研究与实践，2010，24（3）.[2]束艳，宿树兰等.HPLC测定柔肝胶囊中5种活性成分的含量[J].中国试验方剂学杂志，2010,16（8）.基金项目：中医药管理局ZH04Z11通讯作者：李彦冰