头孢西丁与苯唑西林检测耐甲氧西林金葡菌的比较

【前言】头孢西丁与苯唑西林检测耐甲氧西林金葡菌的比较由文秘帮小编整理而成，但愿对你的学习工作带来帮助。1.2方法 1.2.1纸片扩散法 将临床分离得到的金黄色葡萄球菌取经35℃孵育18～24 h的单个菌落，用无菌生理盐水配制成0.5麦氏单位的菌悬液，分别涂布含有4% NaCl 的M-H 琼脂表面上，将苯唑西林和头孢西丁药敏纸片放在琼脂表面，35℃孵育24 h 后阅读结果，执行NCCLS 2004[1...

摘要：目的 比较头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林金葡菌（ MRSA） 的可靠性。方法 分别采用头孢西丁与苯唑西林纸片扩散法检测临床分离的132种金黄色葡萄菌株，采用mecA 基因方法为检测标准，比较两种方法的准确性。结果 头孢西丁纸片扩散法与mecA基因检测高度一致为100%，苯唑西林检测的敏感性和特异性分别明显低于头孢西丁。结论 头孢西丁纸片扩散法是筛选和确认MRSA 的一种可靠的试验方法。

关键词：耐甲氧西林金葡菌；头孢西丁；纸片扩散法

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ meticillin-resistantStaphylococcus aureus，MRSA） 是医院感染和社区感染的主要病原菌， 其有效的治疗和预防有赖于快速准确的实验诊断，本研究以mecA基因为标准，对头孢西丁和苯唑西林纸片扩散法检测MRSA的结果进行了比较。

1资料与方法

1.1一般资料 129株临床分离金黄色葡萄球菌株，耐甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌ATCC25923，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌ATCC25923，30 μg头孢西丁药敏纸片、1 μg苯唑西林药敏纸片、M-H琼脂，mecA基因扩增引物：引物序列上游F：5-' AAAATCGATGGTAAAGGTTGGC-3'引物序列下游R：5-' AGTTCTGCAGTACCGGATTT GC-3'。

1.2方法

1.2.1纸片扩散法 将临床分离得到的金黄色葡萄球菌取经35℃孵育18～24 h的单个菌落，用无菌生理盐水配制成0.5麦氏单位的菌悬液，分别涂布含有4% NaCl 的M-H 琼脂表面上，将苯唑西林和头孢西丁药敏纸片放在琼脂表面，35℃孵育24 h 后阅读结果，执行NCCLS 2004[1]最新的标准：头孢西丁纸片扩散法抑菌圈直径≤19 mm为耐药、≥20 mm为敏感；苯唑西林纸片扩散法抑菌圈直径≤10 mm为耐药、11～12 mm为中介、≥13 mm为敏感。

1.2.2 PCR反应检测mecA基因 ①制备DNA模板 挑取平板上的的单个菌落，混悬于0.5 mL pH 8.0的T E中煮沸10 min，以7 000 r/min 的速度离心10 min后取上清液。②PCR扩增PCR反应总体积为50 μL其中引物1 μL，PCR 缓冲液5 μL，dNTP（200 μmol/μL） 1 μL，Mg2+0.5 mmol/L，Taq酶2.5 U，DNA 模板2 μL，双蒸水35.5 μL。扩增条件为94℃初变性4 min，然后94℃变性30 s，退火温度为52℃，时间为30 s，72℃延伸45 s，进行30个循环最后延伸10 min，PCR 产物在0.7% 的琼脂糖凝胶中进行电泳后，用凝胶成像系统观察结果[2]。

2结果

129株金黄色葡萄球菌中，mecA基因阳性有85株，阴性有47株。以mecA 基因检测为标准方法，头孢西丁纸片扩散法的敏感性和特异性为100%和100%，苯唑西林纸片扩散法的敏感性和特异性为98.4%和95.7%。头孢西丁纸片扩散法检测MRSA 的敏感性和特异性明显高于苯唑西林纸片扩散法。

3讨论

MRSA产生的一个原因是金黄色葡萄球菌获得了mecA基因，能够编码产生低亲和力的青霉素结合蛋白PBP2a[3]mecA或PBP2a因此被认为是检测MRSA的金标准。

2004年NCCLS增加了一种检测和确认MRSA的新方法即头孢西丁纸片扩散法，根据这一标准，我们对临床分离的132株金黄色葡萄球菌进行了分析发现，有3株mecA阳性的菌株，对苯唑西林表现为敏感，证明苯唑西林纸片法较难检侧出耐药表现不均一的菌株，而使用30 μg头抱西丁纸片法检测甲氧西林金黄色葡萄球菌，其特异性和敏感性均达到100%，且敏感株抑菌圈直径较大，易于判断，研究推侧可能是头孢西丁比苯唑西林能更好诱导mecA 基因的表达。

头孢西丁纸片扩散法操作简便，敏感性和特异性高，结果与mecA 基因检测一致，可作为临床确证MRSA的可靠方法。

参考文献：

[1]National Committee for Clinical Laboratory Standards. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing[S].Fourteenth inform ational supplement. NCCLS documentM100- S14.Wayne，Pennsylvania：NCCLS，2004.1-159.

[2]Louie L， Goodfellow J， Mathieu P， et al. Rapid detection of methicillin-resistant Staphy lococci from blood culture bottles by using a multiplex PCR assay[J].Clin Microbiol，2002，40：2786-2790.

[3]Annie F， Bernadette G， Philippe HL， et al. Evaluation of three techniques for detection of low-level methicillin-resistant Staphy lococcus aureus （MRSA）：a diffusion method with cefox itin and moxalactam，the Vitek2 system，and the MRSA-screen latex agglutinat iontest[J].J Clin Microbiol，2002，40：2766-2771.编辑/肖慧