4株不同来源嗜水气单胞菌药敏试验研究

【前言】4株不同来源嗜水气单胞菌药敏试验研究由文秘帮小编整理而成，但愿对你的学习工作带来帮助。本试验主要针对的是从甲鱼腐皮病、黄鳝出血病、斑点叉尾鮰败血症、大鲵腹水病这4种患病生物体内分离、纯化、鉴定后保存的嗜水气单胞菌，进行药物敏感试验，根据对29种不同的药物敏感度对比，从而探究出治疗这4种疾病合适的药物，也为探究菌体耐药性提供部分参考。 1 ...

摘要 对4株分离自湖南省的甲鱼败血病、湖北省的黄鳝出血病、湖北省的大鲵腹水病、湖南省的斑点叉尾鮰败血症的致病菌嗜水气单胞菌，利用纸片扩散法进行体外药物敏感性试验。结果表明：不同地域、不同宿主的4株嗜水气单胞菌对同一种药物的敏感性不尽相同，但对哌啦西林、米诺环素、氨曲南、呋喃妥因、头孢吡肟、头孢哌酮6种药均有高度敏感性，对氨苄西林、头孢噻吩、苯唑西林、克拉霉素有一定的耐药性。

关键词 不同来源；嗜水气单胞菌；药敏试验

中图分类号 S943 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2013）15-0281-02

进入21世纪后，水产养殖业也迎来了一次迅猛发展，水产养殖开始向着多品种、高投入、集约式、工厂化的方向高速发展，但同时也导致各类疾病的迅速扩散，细菌感染性疾病是水产养殖业中常见的疾病类型，养殖户常采用抗菌药物防治此类疾病[1]。其中由嗜水气单胞菌引发的多种疾病给淡水养殖业造成的巨大损失，成为制约淡水养殖业发展的重要因素之一[1]。

嗜水气单胞菌对鲢鱼、鳙鱼、团头鲂、鳊、鲮鱼、鳗鱼、银鲫、鲤、金鱼、香鱼、甲鱼、草鱼、黄鳝、斑点叉尾鮰等养殖鱼类均产生细菌性败血症或局部感染[2-7]，其中秦淑美等[8]关于甲鱼腐皮病、何 智等[9]关于黄鳝出血病、戴振炎等[10]关于斑点叉尾鮰败血病、袁兴建等[11]关于大鲵腹水病的研究均确定嗜水气单胞菌是引起这4种养殖生物患病的主要致病菌。多种陆生动物同样感染发病，近年来也有较多的报告，包括猪、鸡、狐、家兔、大熊猫、鸭、等[12-13]。同时，有报道证明其也能引发人类疾病，感染人的主要临床表现为急性胃肠炎，纳入了腹泻病原菌的常规检测范围，其也是食品卫生检验的对象及医院内感染菌[14]。

本试验主要针对的是从甲鱼腐皮病、黄鳝出血病、斑点叉尾鮰败血症、大鲵腹水病这4种患病生物体内分离、纯化、鉴定后保存的嗜水气单胞菌，进行药物敏感试验，根据对29种不同的药物敏感度对比，从而探究出治疗这4种疾病合适的药物，也为探究菌体耐药性提供部分参考。

1 材料与方法

1.1 试验菌种

供试菌种为：湖南省安化县柘溪水库患败血症的斑点叉尾鮰分离出的嗜水气单胞菌；湖南省某养殖场患败血症的甲鱼分离的嗜水气单胞菌；湖北省某养殖场患出血病的黄鳝分离的嗜水气单胞菌（长江所鱼病室）；湖北省患腹水病的大鲵分离出的嗜水气单胞菌（长江所鱼病室）。

1.2 试验方法

从培养24 h的LB平板上挑取单个菌落接种LB液体培养基，37 ℃振荡培养过夜，用麦氏比浊法配制菌液浓度达108 cfu/mL，培养5～6 h，麦氏比浊管的具体配比见表1。移液枪移取菌液300 μL，然后涂布在LB平板上然后将药敏纸片（杭州微生物试剂有限公司，其含具体药量见表2）贴在培养基上，30 ℃培养24 h后，测定抑菌圈直径，敏感度根据杭州微生物试剂有限公司提供的标准进行判定细菌对所用药物的敏感性[15]。

2 结果与分析

4种来源的菌种经药敏试验结果表明：在29种药物中，黄鳝的嗜水气单胞菌对氧氟沙星、头孢呋辛、哌啦西林、诺氟沙星、复方新诺明、阿米卡星、头孢哌酮、头孢噻肟、链霉素、呋喃妥因、氨曲南、氯霉素、头孢吡肟、米诺环素、卡那霉素、头孢曲松等近16种药物高度敏感，而对头孢噻吩、克拉霉素等药物有耐药性；甲鱼的嗜水气单胞菌对米诺环素等药物高度敏感，而对氧氟沙星、克拉霉素、头孢呋辛、诺氟沙星、复方新诺明、庆大霉素、头孢曲松、妥布霉素、氨苄西林、卡那霉素、链霉素、麦迪霉素、头孢唑啉、红霉素、苯唑西林、氯霉素、头孢噻吩等药物有耐药性；大鲵嗜水气单胞对呋喃妥因等药物高度敏感，而对氧氟沙星、克拉霉素、头孢呋辛、头孢噻吩、庆大霉素、头孢噻肟、头孢曲松、诺氟沙星、复方新诺明、阿米卡星等有耐药性；斑点叉尾鮰的嗜水气单胞菌对氧氟沙星、头孢呋辛、诺氟沙星、复方新诺明、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢曲松、氯霉素、米诺环素、四环素、大观霉素、环丙沙星等12种药物有高度敏感性，而对氨苄西林、苯唑西林、头孢噻吩等3种药物有耐药性；同时发现4株嗜水气单胞菌对同一种药物的敏感性不尽相同，但对哌啦西林、米诺环素、氨曲南、呋喃妥因、头孢吡肟、头孢哌酮6种药都较敏感，对氨苄西林、头孢噻吩、苯唑西林、克拉霉素均有一定的抗药性。用游标卡尺测量各药剂的抑菌圈直径，其具体结果见表3。

3 结论与讨论

试验结果表明，4株不同来源的嗜水气单胞菌对同一种药物的敏感不尽相同，但对哌啦西林、米诺环素、氨曲南、呋喃妥因、头孢吡肟、头孢哌酮6种药都有较高的敏感性，可以作为治疗用药的参考；同时其对氨苄西林、头孢噻吩、苯唑西林、克拉霉素均有一定的抗药性，可以为进一步研究获得性耐药性作为参照。

3.1 影响药敏结果的因素

3.1.1 菌种的固有耐药性。菌种的固有耐药性是细菌本身由存在于其染色体上的耐药基因决定的，细菌天生对抗生素就不敏感，具有典型的种属特异性[16]。此种耐药性是细菌细胞所固有的，与细菌的遗传与进化密切相关，其产生并不是因为抗菌药物的使用。固有耐药性是细菌稳定的遗传特性，同属细菌的固有耐药性相同，它受细菌基因组特定DN段上大量抗性基因所控制[17]。试验发现4种菌株均对氨苄西林、头孢噻吩、苯唑西林、克拉霉素4种药物有耐药性，这4种药物是不是嗜水气单胞菌的固有耐药性，还需要日后用大量的试验菌种去证明。

3.1.2 菌种的不同来源与生活环境差异。不同地区和寄主体内分离到的菌株由于地区、气候、水质条件及实验室培养条件等方面的不同从而在药敏试验时表现出不同的耐药性[18]。本试验4株菌种分别来自湖南省安化县柘溪水库患败血症的斑点叉尾鮰分离出的嗜水气单胞菌；湖南省某养殖场患败血症的甲鱼分离的嗜水气单胞菌；武汉市某养殖场患出血病的黄鳝分离的嗜水气单胞菌；武汉长江水科所患腹水病的大鲵分离出的嗜水气单胞菌，其中斑点叉尾鮰中分离出的嗜水气单胞菌为刚分离菌种，其余3种为保存菌种，这在一定上也影响了耐药性；同时从菌种之前的生活环境来看，例如大鲵其要求的生长温度明显低于其他3株菌种寄主。因此，不同的环境一定程度上影响了菌株的耐药性。

3.1.3 菌种的获得性耐药性。菌种的获得性耐药性是由于基因的突变或从其他细菌的质粒或转座子中获得耐药基因，从而细菌与抗菌药物接触后改变了原来的代谢途径而表现出耐药性[19]。在生长过程中细菌通过转化、转导获得抗性基因，或通过质粒接合等耐药因子的转移而获得耐药性，也可在抗菌药物选择性压力存在下经过突变基因、潜伏基因的表达产生耐药性[15]。本试验发现甲鱼对氧氟沙星、克拉霉素、头孢呋辛、诺氟沙星、复方新诺明、庆大霉素、头孢曲松、妥布霉素、氨苄西林、卡那霉素、链霉素、麦迪霉素、头孢唑啉、红霉素、苯唑西林、氯霉素、头孢噻吩等药物有耐药性；大鲵对氧氟沙星、克拉霉素、头孢呋辛、头孢噻吩、庆大霉素、头孢噻肟、头孢曲松、诺氟沙星、复方新诺明、阿米卡星等有耐药性；其中有一些在其他2株菌种中并没有耐药性，这2株菌对大部分药物的敏感性可能来源后期的获得性耐药性。

3.2 防治嗜水气单胞菌疾病的施药技术

水产动物选择药物时应该根据药敏试验结果挑选高度敏感的，同时，要价廉、易得、国家允许的渔药，防止药物的滥用，从而减少耐药菌株的产生。同时也要坚持一些用药原则：一是药敏试验只是用药的参考。因为药敏试验只是体外测试细菌的敏感性，对于养殖品种的机体与水环境等影响，药物敏感试验与实际治疗效果不一定一致。二是通过药敏试验选择的药物不会一直不变。因为长时间使用同一种药物可能使得菌种产生获得性耐药性。三是尽量不用近期使用过的药物或类似药物，以保证药物的敏感性。四是窄谱药物能治疗的疾病不要使用广谱药物。通过本试验发现4株菌种对哌啦西林、米诺环素、氨曲南、呋喃妥因、头孢吡肟、头孢哌酮6种药都较敏感，其在治疗由嗜水气单胞菌引起的疾病时可以作为参考。

4 参考文献

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