己酮可可碱高渗盐溶液对抗休克大鼠肺损伤

[摘要]目的：通过建立大鼠失血性休克肺损伤模型来研究高渗盐己酮可可碱溶液(HSPTX)、高渗盐溶液(HS)和乳酸钠林格液(RL)对失血性休克大鼠早期肺组织炎症的影响。方法：40只成年SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、RL组、HS组、HSPTX组4组各10只。SD雄性大鼠在失血性休克1h后即分别用RL、HS、HSPTX行液体复苏治疗。休克期间检测平均动脉压(MAP)。休克复苏后24h处死动物，立即经左心室取1ml新鲜血用放射免疫分析法(RIA)检测血清TNF-a和IL-6水平，取肺组织行HE染色评估肺脏的损伤程度。结果：HS和HSPTX复苏早期MAP上升速率低于用RL复苏，但4h后血压差别不大。HSPTX组较HS组、RL组大鼠肺组织结构破坏小，炎症反应明显减轻，中性粒细胞浸润数量明显减少。HSPTX组与HS和RL组比较，血清TNF-a和IL-6水平明显降低。结论：HSPTX复苏较HS和RL复苏可以明显减轻失血性休克大鼠早期肺组织炎症反应。

[关键词]失血性休克；己酮可可碱；肺损伤；高渗盐溶液；大鼠

[中图分类号]R563　[文献标识码]A　[文章编号]1671-7562(2010)06-0585-04

失血性休克后液体复苏是治疗的重要手段之一。研究发现，晶体复苏液确实能够加重休克引起的细胞损伤。越来越多的证据显示当前临床上应用的复苏液体乳酸钠林格液(RL)能增强中性粒细胞的激活并且增加器官损伤，尤其表现在肺脏。高渗盐溶液(HS)最近十几年来重新吸引了众多学者的关注，不仅因为它可以恢复血管内容量，减少组织水肿尤其是肺水肿发生的几率，更重要的是发现了与RL相比它可以有效地减少失血性休克后中性粒细胞的激活，但其缺点是在激活后使用并不能抑制炎症的发展。己酮可可碱(PTX)是从可可豆中提取的生物碱，以前常被用作血管扩张药用于末梢血管疾病的治疗，现在发现其具有抑制中性粒细胞的黏附与激活、改善白细胞的流变学特性、抑制炎症反应的作用。我们通过研究失血性休克大鼠用高渗盐己酮可可碱溶液(HSPTX)复苏来探索其与传统复苏液RL和HS相比的优势及其可能的抗炎机制。

1.　材料与方法

1.1　主要仪器及试剂

Ohmeda-Datex监护仪(美国奥美达公司)；22号套管针(美国碧迪公司)；PTX(美国ALEXIS公司)，使用前用7.5％氯化钠溶液稀释；HE染色试剂盒(南京建成生物工程有限公司)；防脱载玻片(北京中杉生物技术有限公司)；RL(浙江济民药业有限公司)；10％氯化钠溶液(广州华南医疗用品有限公司)；TNF-a检测试剂盒、IL-6检测试剂盒(武汉博士德公司)。

1.2　动物及分组

健康清洁级SD大鼠40只，雌雄不拘，体重250～300g，由徐州医学院动物中心提供。随机分为假手术组(Sham组)、RL组、HS组和HSPTX组等4组，每组10只。12h日照，12h黑夜，静养1周，术前12h禁食，自由饮水。

1.3　失血性休克模型的制作及复苏

将SD大鼠腹腔内注射戊巴比妥钠40mg・kg-1，待麻醉平稳后将大鼠固定于手术台，行右侧腹股沟切口，分离股动脉、股静脉。取22号穿刺套管针行动、静脉穿刺，动脉端连接于监护仪用以术中监测平均动脉压(MAP)，静脉端用于复苏期补液。在10min内放血(0.5ml・min-1)至MAP为35～40mmHg(1mmHg=0.133kPa)，休克期通过回输血液和放血维持MAP在35～40mmHg，休克期时间维持60min即可视为模型制作成功。休克结束后分别用以下方案行液体复苏治疗：(1)Sham组，仅行手术操作及插管，不行放血休克和复苏；(2)RL组，将RL以32ml・kg-1输入；(3)HS组，将7.5％HS以4ml・kg-1输入；(4)HSPTX组，以7.5％HS4ml・kg-1+PTX25ml・kg-1输入。复苏结束后将各组放出的血液分别回输，之后将大鼠放回笼内自然苏醒，维持室温在20℃。

1.4　标本的制备

复苏24h后断颈椎法处死大鼠，立即打开大鼠胸腔，用5ml肝素化注射器抽取左心室血液1ml，离心提取血清，将血清冰冻保存。取大鼠肺脏放入4％多聚甲醛中固定，用于作HE染色。

1.5　肺组织HE染色

切片用二甲苯脱蜡，放人二甲苯Ⅰ5min，再放入二甲苯Ⅱ5min，将脱完蜡的切片依次放入100％、95％、80％、75％乙醇和蒸馏水中各2min复水。脱完水的片子放入苏木精染液5min，自来水冲洗，再放入盐酸乙醇分化30s，自来水冲洗，将片子放入伊红染液2min，自来水冲洗，再常规脱水、透明、封片。

1.6　血清TNF-a和IL-6的检测

采用放射免疫分析法(RIA)测定血清TNF-a和IL-6含量，操作按试剂盒说明书。

1.7　统计学处理

数据用均数±标准差表示，采用SPSS13.0统计软件处理，a=0.05。

2.　结果

2.1　MAP

休克后RL、HS和HSFTX组的MAP明显下降，在复苏后2hRL组的MAP较HS组和HSPTX组上升快，复苏4h时HS组和HSPTX组的MAP回升明显，和RL组相比无明显差异(P>0.05)，在复苏6h后，RL、HS组和HSPTX组相比无明显差异(P>0.05)，见图1。

2.2　肺组织病理

Sham组：肺组织间隔无增宽，无中性粒细胞的浸润，肺泡壁结构完整，肺泡腔未见炎性渗出物和炎症细胞(图2A)。RL组：肺组织可见弥漫性炎性改变，可见大量中性粒细胞的浸润，肺泡腔变窄，肺泡中可见大量炎性渗出物(图2B)。HS组：肺组织水肿，肺泡腔可见少量渗出物，肺泡间隔较Sham组增宽，肺组织中可见有中性粒细胞的浸润(图2C)。HSPTX组：肺组织有炎性改变，但较RL和HS组明显减轻，肺组织稍见水肿，肺泡间隔稍见增宽，肺组织中可见少量中性粒细胞的浸润，肺泡间隔未见大量炎性渗出物和水肿液(图2D)。

2.3　大鼠血清中TNF-a和IL-6水平

各休克组大鼠血清中TNF-a和IL-6水平较Sham组明显升高，差异具有统计学意义(p

3.　讨论

失血性休克常见于外伤、上消化道出血、妇产科疾病等，肺由于它的特殊解剖特点，在大量失血后特别容易受到损伤，如果得不到有效治疗会导致ARDS，增加病人的死亡率。失血性休克后肺损伤的机制还不是非

常明确，但中性粒细胞和巨噬细胞的激活并分泌TNF-a和IL-6等炎症介质，在肺损伤的发生发展中起着重要的作用。炎症介质TNF-a是炎症级联反应中的关键因子，IL-6与器官衰竭有着密切的联系，高水平的IL-6往往预示着病人预后不良。研究表明：RL复苏可以增强中性粒细胞的激活加剧肺损伤；HS是一种有效的复苏液，但是HS在中性粒细胞激活前使用效果良好，在激活后不能抑制炎症反应的发展；PFX可以抑制中性粒细胞的激活，减少白细胞的黏附。本研究通过观察炎症介质的变化水平和肺组织病理来阐明HSPTX复苏较传统复苏液的优势。

本研究显示，大鼠在失血性休克后血压急剧下降，复苏后2h各组大鼠MAP都有所回升，而RL组的MAP较HS组和HSPTX组上升明显，在复苏4h后HS组和HSPTX组MAP达到RL组的水平；病理切片也显示，HSPTX组的炎性渗出、炎症细胞的浸润和组织水肿明显比HS组和RL组轻；HSPTX组的血清TNF-a、lL-6水平较HS组和RL组也明显下降。在此之前已经有几位学者提出把HS和PTX结合起来应用于失血性休克复苏的实验研究，并且取得了初步成果。他们的实验表明HSPTX复苏较RL复苏可以明显抑制炎症的发展，抑制中性粒细胞的进一步激活，阻断炎症级联反应，减少炎症介质的产生，本实验的结果和Coimbra等的研究结果是一致的，但他们的实验并未探讨HSPTX复苏和HS复苏的优劣，因此通过本实验我们可以清楚地看到，PIX与HS合用其抗炎效果显著强于单独使用HS复苏。

综上所述，通过动态血流动力学的观察，在失血性休克肺保护中用HSPTX复苏与用RL或HS复苏相比在抑制炎症的发展方面有明显的优势。

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