HPLC法测定小叶榕叶中异牡荆苷含量

【摘要】目的建立小叶榕叶中异牡荆苷的含量测定方法，并比较不同采收期小叶榕叶的异牡荆苷的含量差异。方法用HPLC法进行测定，流动相为甲醇水（38∶62），检测波长为270nm。结果不同采收期药材异牡荆苷最高含量达0.69％，最低为0.18％，7～12月份含量明显高于其他月份。结论该方法简便，准确，重复性好，适于小叶榕叶中异牡荆苷的含量测定。

【关键词】高效液相色谱法；小叶榕叶；异牡荆苷；采收期

Abstract:ObjectiveTodevelopaquantitativemethodtodetermineisovitexininFoliumFiciMicrocarpae,andtocomparethecontentofisovitexininFoliumFiciMicrocarpaeofdifferentgrowthstages.MethodsHPLCmethodwasusedbyusingMeOHH2O(38∶62)asmobilephase.Thedetectionwavelengthwasat270nm.ResultThehighestcontentofisovitexinfromdifferentgrowthstageswas0.69%,andthelowestwas0.18%.Thecontentsin7-12mothsweresignificantlyhigherthanothermonths.ConclusionThismethodwassimple,quickandaccuratefordeterminationofisovitexininFoliumFiciMicrocarpae.

Keywords:HPLC;FoliumFiciMicrocarpae;isovitexin

小叶榕叶FoliumFiciMicrocarpae，又名小榕叶、落地金钱，来源于桑科榕属植物榕树（FicusmicrocarpaL.f.）的叶。小叶榕叶为民间常用中草药，其味淡，性凉，具有清热发表、解毒消肿、祛湿止痛的功效［1］。用于治疗哮喘和慢性支气管炎，在治疗心血管疾病、抗炎、抑菌等方面也都有显著的效果［2］。其中主要含黄酮、三萜类和甾体化合物等化学成分［3］。小叶榕叶中的黄酮类成分主要为异牡荆苷（另文报道）。本实验采用HPLC法，建立了小叶榕叶中异牡荆苷的含量测定方法。该方法操作简便、快速、重现性好，适用于本品的质量控制。

1仪器与试药

美国Waters高效液相色谱仪：Waters600型泵，2487型紫外检测器，Empower工作站。赛多利斯电子天平。

小叶榕药材采自广州，在一年中各月份分别采集，所有样品由广东药学院房志坚副教授鉴定为桑科榕属植物小叶榕FicusmicrocarpaL.f.的叶。对照品异牡荆苷为自制，经UV、氢谱、碳谱鉴定（另文报道），并利用HPLC归一化法分析其纯度达99.48%。甲醇（色谱纯，天津科密欧公司），其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2．1色谱条件

GracesmartC18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇水（体积比38∶62）；柱温：25℃；流速：1.0mL/min；检测波长：270nm；进样量：20μL。

2．2对照品溶液的制备

取异牡荆苷对照品适量，精密称定，以体积分数50％甲醇溶解，配制成每1mL含异牡荆苷21.6μg的溶液，以此作为对照品溶液。

2．3供试品溶液的制备

取本品粉末（过20目筛）约1g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入体积分数50％甲醇50mL，称定重量，加热回流40min，放冷，再称定重量，以体积分数50％甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取续滤液10mL，通过聚酰胺柱（60～80目聚酰胺约2g，装于内径1.5cm的小柱），以体积分数50％甲醇洗脱，洗脱液收集于100mL量瓶，并以洗脱液定容至刻度，摇匀，即得。

2．4线性关系考察

分别精密量取“2．2”项下对照品溶液0.25，0.5，1.0，2.0，3.5，5.0和10.0mL置10mL量瓶，加体积分数50%甲醇稀释至刻度，按上述色谱条件进样，测定峰面积，分别为11565、21718、44185、88508、153526、221861、458014，依峰面积（A）与质量浓度（ρ）绘制标准曲线，所得回归方程为A=21171ρ-2585.1，r=0.9996，表明异牡荆苷质量浓度在0.54～21.6μg·mL-1范围内线性关系良好。

．5精密度试验

精密吸取对照品溶液，重复进样5次，测定峰面积，求得RSD值为0.73％，表明精密度良好，结果见表1。

2．6稳定性试验

对同一供试品溶液，分别于0，2，4，12，24h进样，测定异牡荆苷峰面积，求得RSD值为1.84％，表明样品在24h内稳定，结果见表1。

2．7重复性试验

取同一批号样品5份，按供试品溶液制备方法平行处理，依法测定，求得RSD值为0.42％，表明重复性良好，结果见表1。表1精密度、稳定性、重复性试验测定结果（略）

2．8回收率试验

精密称取已知含量的样品数份，精密加入一定量的对照品溶液，依法测定，计算平均回收率为100.51％，RSD值为4.50％，结果见表2。表2回收率试验测定结果（略）

2．9样品含量测定

分别取不同采收期的样品按供试品溶液制备方法处理，依法测定，计算含量。结果见图1及表3。表3不同月份小叶榕叶中异牡荆苷的含量（略）

3讨论

3．1异牡荆苷为小叶榕叶中含量较高的黄酮类药效组分之一，故将其作为小叶榕叶质量评价的指标成分。异牡荆苷在270nm处有最大吸收［4］，故选择该波长为测定的波长。实验曾比较不同比例的甲醇作为提取液，以体积分数50％甲醇的提取液峰面积较高，杂质较少，确定选用体积分数50％甲醇回流提取。提取液通过聚酰胺柱能有效去除杂质，减少对色谱柱的损害。

3．2本试验考察了不同采收月份药材的情况，结果表明，小叶榕叶中异牡荆苷成分的含量在1～6月份较低，在7～12月份较高。该结果为小叶榕叶的合理采收和利用提供了理论依据。对于不同采收年限，不同产地的药材还有待于进一步考察。

3．3本研究建立了小叶榕叶中异牡荆苷含量的测定方法。线性关系及重现性良好，方法稳定准确，可作为小叶榕叶的质量控制方法，为进一步研究其物质基础和作用机理打下了基础。

【参考文献】

［1］赵守训.中药辞海：第三卷［M］.北京：中国医药科技出版社,1997：1334.

［2］国家中医药局《中华本草》编委会.中华本草：第三册［M］.上海：上海科技出版社,1999：495-497.

［3］江苏新医学院.中药大辞典：下册［M］.上海：上海科技出版社,1977：2529.

［4］中国科学院上海药物研究所植物化学研究室.黄酮体化合物鉴定手册［M］.北京:科学出版社,1981：437-439.