应用DAD检测器判别液相色谱峰纯度

摘要　本文对应用DAD检测器判别液相色谱峰纯度进行了探讨。

关键词　检测器　判别液　纯度

高效液相色谱法定量的前提是色谱峰由单一组分构成，因此色谱峰的纯度即一个色谱究竟是有一种组分构成，还是包含两种以上的成分，这就是我们大家所要关心的问题。二极管检测器(DAD简称)的开发，是过去20年内高效液相色谱峰的定DAD检测器可以得到各个波长的吸光度值即可以得到样品在各时刻的吸收光谱图。

使用这些方法判别峰纯度时都要求待测组分色谱峰中洗脱杂质的紫外光谱，明显不同于主组分的紫外光谱。光谱间的差异越大对于其洗脱杂质的检测就越低，然而有机物的紫外光谱一般均显示曲线变化不明显的宽带。缺乏能够说明细微差别的精神结构，尤其是对于那些生色团相同而结构上的差异部分，由于生色团不同的化合物间的结构差异不能够予以足够的描述实际上许多情况下，例如同分异构体的杂质和主组分的降解或代谢产物与主组分结构上是非常相似的。这是利用组分的紫外光谱信息判别色谱峰纯度时就会遇到不能检测到分析物的共洗脱杂质的情况，甚至有时候会给出完全错误的峰纯度结果从而给下一步的定性定量分析很大误差。

使用DAD可以获得三维谱图，进而得到等吸收图提取所要检测波长下的色谱图。本文通过选择头孢拉定作为分析对象对DAD用于判别液相色谱峰纯度时的局限性研究。

1　试验部分

仪器和试剂AgilenFechnologiesl200SeriesDAD检测器、甲醇(色谱纯)其它试剂均为分析纯。头孢拉定、头孢氨苄对照品由中国药品生物制品检定所提供。

色谱柱：EXSILCl8柱5μm150*406mid，流动相：水、甲醇、3.86％醋酸钠溶液、4％醋酸溶液(1654：400：30：6)流速为0.7ml／min-0.9ml／min进样量10μl柱温为室温。

对照品溶液制备：①取头孢拉定对照品约35mg精密称定置50ml量瓶中加流动相溶解并稀释至刻度摇匀。②取头孢氨苄对照品约20mg精密称定置50ml量瓶中加流动相溶解并稀释至刻度摇匀。供试品溶液的制备实验用的混合溶液根据要求按不同的配比使用标准对照溶液和流动相来配制。

2　结果与讨论

2.1DAD用于色谱峰纯度判别

头孢拉定和头孢氨苄其二者在合适的条件下可以被分离。通常头孢拉定中含有一定量的头孢氨苄从二者的紫外光谱，可以发现他们的紫外光谱形状几乎完全一致。事实上二者结构上的相似在实际工作中由于柱效下降或者分离条件偶尔变化有时仍然会遇到二者严重重叠或者其洗脱的情况通过一根使用过一段时间的色谱柱对供试品的洗脱得到的头孢氨苄和头孢拉定的洗脱的色谱峰利用归一化光谱对照和吸收比值图法对该假单峰的纯度进行鉴定。结果头孢拉定和头孢氨苄的共洗脱色谱峰前沿峰顶和峰尾提取的紫外光谱柱归一化后重叠，头孢拉定中含有微量的头孢氨苄由于二者结构和性质上的相似使得他们保留的时间也很相近对流动相的配比略作改变后可使头孢氨苄峰被掩盖表现上呈单一峰。使用DAD抽取该色谱图归一化后重叠和利用吸收比值图对该色谱的纯度进行判别的结果，认为该色谱图峰是纯的。幸运的是它们在适当的条件下可以被分离开，从上面选择的有代表性的分析物或者光谱相似杂质组成的体系中可以明显的看出使用DAD判别液相色谱峰纯度有时可能会得出错误的峰纯度信息。文献中也认为任何情况下相同的吸收比或者整个色谱峰归一化光谱的一致只应该被当作是峰纯度的一个相对指示而不是一个绝对的证据，对于可能存在于主组分结构相似的杂质的样品体系的液相色谱分析方法，峰纯度的可靠评价最好是通过收集色谱峰出液，然后更换不同的色谱体系或者是由于对微小结构差异灵敏的质谱等手段来验证。

2，2灵敏度

在对于化合物的痕量分析中检测器的灵敏度起着重要的作用，本研究中还对二极管阵列检测器与常用的可变波长检测器的灵敏度进行了比较，头孢拉定的检测限分别是0.09μg和0.04μg相比通常使用的可变波长检测器要高大约1个数量级这表明DAD在线获得光谱信息的同时灵敏度是有所降低的，因此对于色谱峰中微量的杂质的检测有时DAD就会显得无能为力。