萝卜硫苷对小鼠迟发型变态反应影响的研究

摘要：目的：考察萝卜硫苷对小鼠迟发型变态反应的影响，为萝卜硫苷的开发应用提供参考依据。方法：以二硝基氟苯（DNFB）诱导分组小鼠接触性皮炎以及诱导耳肿胀，测量诱导相和效应相小鼠的耳廓厚度，通过测量数据来评价萝卜硫苷提高机体免疫效应 ；结果：随着萝卜硫苷剂量的增大，能明显促进致敏小鼠耳廓肿胀，实验结果具有统计学意义。结论：萝卜硫苷能一定程度促进T细胞增殖，具有提高机体免疫的作用。

关键词：萝卜硫苷； 迟发型变态反应；影响

【中图分类号】R954 【文献标识码】A 【文章编号】1672-8602（2015）06-0247-02

萝卜硫苷（Glucoraphanin）是硫代葡萄糖苷的一种，其降解产物为异硫代氰酸盐[1]，硫代葡萄糖苷及其降解产物具有广泛的生物活性，可以抑制癌细胞繁殖、保护DNA免收损伤、防止抗癌细胞转移[2][3]，还可以抑制细菌和微生物的生长。为了探讨萝卜硫苷对机体的细胞免疫调节功效，本实验选用不同剂量的萝卜硫苷进行动物实验研究。

1材料

1.1实验动物： KM小鼠，SPF级，雄性，小鼠体质量18―22g，长沙市天勤生物技术有限公司提供，许可证号：SCXK（湘）2014-0011。

1.2 试剂及药品：二硝基氟苯（DNFB） ，CMC，绿元胶囊，萝卜硫苷（九江华汉生物科技有限公司），丙酮，水合氯醛，松香，石蜡

1.3 仪器：电子天平（AL204，梅特勒），青霉素小瓶，250微升注射器，打孔器，净化工作台，培养箱

2试验方法

2. 1 动物分组

KM小鼠，常规饲养，自由采食和饮水，每日光照时间 1 2 h，适应环境1周后，经临床观察健康者进行分组。随机分为4组：模型组、阳性药组、萝卜硫苷高低剂量组，每组小鼠各12只 。

2.2 DNFB溶液配制

DNFB应新鲜配制。如欲配制1% DNFB 5ml，可称取DNFB50 mg，置清洁干燥的青霉素小瓶中，将预先配置好的5ml丙酮-生理盐水溶液（丙酮：生理盐水=1：1），倒入小瓶，盖好并用胶布密封，混匀后，用250微升注射器通过瓶盖取用。

2. 3 给药方法[4][5]

模型组包括致敏（背部涂抹DNFB）和诱发（少量DNFB涂耳）步骤，采用灌胃方式给药，给予药物用CMC溶液替代；阳性药组包括致敏（背部涂抹DNFB）和诱发（少量DNFB涂耳）步骤，采用灌胃方式给予绿元胶囊保健品800mg/kg；萝卜硫苷高低剂量组包括致敏（背部涂抹DNFB）和诱发（少量DNFB涂耳）步骤，采用灌胃方式给予萝卜硫苷（300、600 mg/kg），连续6天给药。

2.4 迟发型变态反应

选用KM小鼠，采用5%水合氯醛（10ml/kg）进行麻醉，采用松香和石蜡对以上各组小鼠背部进行物理除毛，范围约为3cm*3cm，并将1% DNFB丙酮-生理盐水溶液50微升均匀涂抹致敏。

2.5 TH反应的产生与测定

背部致敏第5天后将1%DNFB溶液10微升均匀涂抹于小鼠右耳（两面）进行攻击。攻击24 h，颈椎脱臼处死小鼠，剪下左右耳壳，用打孔器取下9mm的耳片，称重。以左右耳片重量差为肿胀度。

2.6 实验数据统计

采用spss11.0软件对实验数据进行统计分析。

3.试验结果

结果表明，萝卜硫苷各剂量组小鼠右耳经1%DNFB丙酮溶液攻击后明显肿胀，重量高于左耳，其中，高剂量组左右耳重量的差值明显高于对照组，且差异有统计学意义（ 见表1，图1 ） 。

4.结论

本研究通过用萝卜硫苷迟发型变态反应试验对小鼠免疫作用的影响进行了初步探究。结果表明，萝卜硫苷的两个剂量组均能增加小鼠的肿胀程度，且随着剂量的增加，其功能增强，表明萝卜硫苷能在一定程度上促进T细胞增殖，具有提高机体免疫的作用。

参考文献

[1] 修丽丽，钮昆亮.十字花科植物中的硫代葡萄糖苷及其降解产物[J].江科技学院学报，2004，16（3）：118-121

[2] 李志邈，曹家树.蔬菜的抗癌特性[J].北方园艺，2001，4：4-6.

[3] Higdon J V，Delage B，Williams D E，et al.Cruciferous vegetables and human cancerrisk：epidemiologic evidence and mechanistic basis[J].pharmacol Res，2007，55（3）：224-236.

[4] 吕方军 ，许一平 ，叶国华 ，等.莱阳沙参茎叶提取物对小鼠迟发型变态反应的影响[J].时珍国医国药，2012，23（5）：1115-1116

[5] 薛明， 胡建华.两参芪胶囊对小鼠免疫功能影响的实验研究[J].江苏中医药，2011，43（12）：78-79