抱茎獐牙菜体外抗氧化作用研究

自由基是指可以单独存在的一个或几个不配对电子的分子和原子。自由基对生物膜和其他组织都有损伤作用，也会引起一系列的病理过程。现代医学研究证明，衰老、癌症、炎症等疾病与体内脂质过氧化反应和自由基有着直接关系。抗氧化剂能抑制各种物质的氧化性变质，能降低自由基连锁反应的效率，降低活泼自由基的浓度，如何通过抗氧化剂减少自由基的产生已成为研究热点。有报道表明，某些天然植物具有明显的抗氧化活性，因此，寻找天然抗氧化剂变成了研究重点。

抱茎獐牙菜（Swertia franchetiana H.Smith）系龙胆科（Gentianaceae）獐牙菜属（Swertia.L）植物，主要分布于青藏高原和云贵高原，是一种一年生草本植物，为常用藏药，藏名“蒂达”，俗称“藏茵陈”，全草入药，具有清热解毒，舒肝利胆之功效，主治各种肝胆疾病[3]。獐牙菜属的植物主要含有环烯醚萜类、三萜类、黄酮类等成分，而黄酮类化合物具有消炎，改善微循环、抑菌、抗肝炎病毒、抗肿瘤等生理功能，该物质具有一定的开发利用价值。本文通过测定抱茎獐牙菜的总黄酮含量，测定其体外对DPPH自由基清除作用，为进一步开发利用抱茎獐牙菜提供一定的理论依据。

材料

原料。抱茎獐牙菜，采于西宁市西山。

仪器。分光光度计（UV-9100）：北京瑞利分析仪器公司；电子天平：上海方瑞仪器有限公司；恒温水浴锅：北京医疗设备总厂。

试剂。①芦丁标准液。用电子天平精确称取芦丁标准品5mg置于10ml容量瓶中，用70%乙醇溶解并定容，摇匀，得到0.5mg/ml的标准溶液。②DPPH母液。准确称取50mgDPPH，用无水乙醇溶解并定容于250ml容量瓶中，DPPH浓度为0.5mmol/l，避光保存。0.2mmol/lDPPH溶液：取0.5mmol/lDPPH母液40ml，用无水乙醇定容至100ml容量瓶。③其它试剂。70%的乙醇，5%亚硝酸钠溶液，10%硝酸铝溶液，5%氢氧化钠溶液，双蒸水，无水乙醇（天津市富宇精细化工有限公司，分析纯）。

方法

芦丁标准曲线的制作。精确吸取芦丁标准溶液0.00ml，0.40ml，0.80ml，1.20ml，1.60ml，2.00ml分别置于10ml容量瓶中，加水至2.4ml，加入5%亚硝酸钠溶液0.4ml，摇匀，放置6分钟；加入10%硝酸铝溶液0.4ml摇匀，放置6分钟；加入5%氢氧化钠溶液4.0ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟。以试剂空白作为参比溶液。用1cm比色皿，在500nm波长处测定吸光度，得到横坐标浓度Y与纵坐标吸光度X的标准曲线。线性回归方程：Y=0.8277X-0.0242（相关系数r=0.9921）

提取物的制备。①醇提物的制备。将干燥的样品在研钵中研碎，精确称取样品5.0g，置于100ml容量瓶中，加入70%乙醇30ml，浸泡24h，封口水浴加热30分钟，用纱布过滤，在70℃下将其浓缩至10ml，浓度为500mg/ml。将浓度为500mg/ml的黄酮提取液稀释10倍，待用。②水提物的制备。称取粉碎后的样品5g加入50ml蒸馏水，沸水浴煎煮1h，用纱布过滤，倾出滤液后重复提取一次，合并2次煎煮的过滤清液，将其浓缩至10ml，得到黄酮提取液浓度为500mg/ml。将浓度为500mg/ml的黄酮提取液稀释10倍，待用。

总黄酮含量的测定。吸取稀释后的黄酮提取液5份各1.00ml置于10ml容量瓶中，加水至2.4ml，加入5%亚硝酸钠溶液0.4ml，摇匀，放置6分钟；加入10%硝酸铝溶液0.4ml摇匀，放置6分钟；加入5%氢氧化钠溶液4.0ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟。测吸光度值，用回归方程计算样品中总黄酮含量。

对DPPH自由基清除率的测定。取植物提取液1ml，0.5mmol/l的DPPH溶液0.25ml先后加入同一具塞试管中，摇匀，在黑暗中37℃放置20分钟，以甲醇为空白在517nm测定其吸光度Ai。取0.25ml0.5mmol/l的DPPH溶液与1ml甲醇混合摇匀，在黑暗中37℃放置20分钟，以甲醇为空白在517nm测定其吸光度Ao。取植物提取液1ml与0.25ml甲醇混合，摇匀，在黑暗中37℃放置20分钟，以甲醇为空白在517nm测定其吸光度Aj。根据下列公式计算出提取液对DPPH的抑制率，即DPPH自由基清除率：K%=[1-（Ai-Aj）/A0]×100%。

数据处理。所得数据用Excel进行数据处理。

结果

总黄酮含量的测定。抱茎獐牙菜不同提取物总黄酮含量测定结果见表1

由表1结果可知，抱茎獐牙菜水提和醇提取物中均有大量黄酮类化合物的存在，而水提取物总黄酮含量显著高于与醇提取物。

对DPPH清除率的测定结果。抱茎獐牙菜不同提取物对DPPH清除率测定结果见表1

由表2可知，抱茎獐牙菜不同提取物对DPPH自由基有明显的清除作用，而水提物比醇提物抗氧化作用好，和表1说明，抱茎獐牙菜中黄酮类化合物含量越高，抗氧化作用越明显。

结论

通过测定抱茎獐牙菜中总黄酮的含量，水提的和醇提的总黄酮含量具有明显的差异。而且水提和醇提的总黄酮的抗氧化活性也有明显的差异。抱茎獐牙菜的药理作用很多，总黄酮含量也较高，其抗氧化作用较好，这种抗氧化作用可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻止癌症的发生。黄酮类化合物具有消炎，改善微循环、抑菌、抗肝炎病毒、抗肿瘤等生理功能，还可以抑制炎性生物酶的渗出，可以增进伤口愈合和止痛，该物质具有一定的开发利用价值，从这些可知，对抱茎獐牙菜的抗氧化作用的研究具有广阔的开发前景。

（作者单位：青海省食品检验检测院）