HPLC法同时测定保健食品中黄豆黄苷以及黄豆黄素的含量

【摘要】为了建立同时测定保健食品中黄豆黄苷、黄豆黄素两种成分的方法。我们将色谱柱设定为Agilent zorbax SB-C18（4.6mm×150mm，5μm），流动相通过乙腈-0.1%甲酸对其梯度洗脱，并将检测波长设定成255nm，流速为1mL·min-1。通过实验我们测出黄豆黄苷、黄豆黄素的线性范围以及加样回收率，并且使用此方法进行实检测操作起来较为简单，测定结果也较为精确，可将此方法在保健食品中黄豆黄苷、黄豆黄素两种成分的含量测定以及产品质量控制中多加应用。

【关键词】HPLC；黄豆黄苷；黄豆黄素；含量测定

黄豆黄苷、黄豆黄素是大豆异黄酮类保健食品的重要组成部分，也是它其中一个成效部分。大豆异黄酮作为主要的植物雌激素，它有着以及雌激素一样的功效，它不仅可以降低乳腺癌、前列腺癌的发病率，减轻更年期因雌激素缺乏而导致的停经期综合症以及骨质疏松症，而且它还可以延缓衰老、预防心血管等多种疾病。大豆异黄酮引起国内外越来越多的注意以及研讨，在我国，市场上出现很多含大豆异黄酮类成分的提取物、这些保健食品有的进口有的国产名目不一，质量也良莠不齐。除了我们较为熟悉的大豆苷元、染料木素等成分外，大豆异黄酮类还包括黄豆黄苷、黄豆黄素两种较少常见的成分，其作用效果十分接近。现在大豆异黄酮类产品的质量掌控一般通过紫外分光光度、薄层扫描、高效液相色谱这几种方法对它异黄酮的含量进行测量，已经有很多方法向我们展示如何测大豆异黄酮类产品中的大豆苷元、染料木素等成分的含量，而关于黄豆黄苷、黄豆黄素的含量测量方法不多，所以，我们无法彻底的了解这些产品的质量[1-7]。我们为了更好地对一个产品进行评价以及更好的把握好质量关，故对保健食品中黄豆黄苷以及黄豆黄素的含量测定方法进行更深入的实验，得到了令人满意的结果。

1仪器与试剂的选取

在这次实验中我们选取了Waters Alliance 2690高效液相色谱仪以及DAD紫外检测器。黄豆黄苷、黄豆黄素参照品是上海同田生物有限公司供给的，其纯度在98%以上。除了乙腈为色谱纯，实验中采用的其他溶剂均为分析纯，使用纯净水，过Millipore 0.22μm的滤膜。五种实验样品都是市场在售的产品。

2色谱条件色谱柱

色谱柱Agilent zorbax SB-C18（4.6 mm×150mm，5μm），柱温设定 25 ℃；流速为1mL·min-1；流动相通过流动相A（0.1%甲酸）及流动相B（乙腈）按以下梯度实施洗脱：初状态为10%B相，0-10min内流动相B增至25%，10-35min内流动相B增长到35%，35-45min内流动相B下降为10%；检测的波长255nm；理论塔板数以染料木素算高于2100。色谱图见图1。

3溶液的制备

3.1取一定量的黄豆黄苷、黄豆黄素参照品，称取过程要保证精准度，然后将甲醇依次加入制备成黄豆黄苷0.11mg·mL-1、黄豆黄素0.06mg·mL-1的溶液，这就是我们实验中要用到的参照品溶液。

3.2依次精密称取样品细粉0.5g，将甲醇25ml加入，称重后进行三十分钟的超声处理，将其置于室温，再称重，缺失的重量用甲醇给予补足，使其充分均匀混合，再用0.45μm的微孔滤膜进行过滤，这就是我们实验中要用到的供试品溶液。

4方法与结果的分析

4.1依次将2.0，4.0，8.0，10.0，15.0μL的参照品溶液依次注入到液相色谱仪中，然后测量峰面积。峰面积作为纵坐标，浓度作为横坐标，计算出的回归方程为Y=6.437×106 X-1.621×105，r=0.9993。这就说明大豆苷元在2.06-20.6μg范围内具备良好的线性关系。

4.2取供试品溶液10μL，吸取过程保证精准，每2小时.进样1次，6次之后测量峰面积，数据显示黄豆黄苷以及黄豆黄素的RSD依次为1.06%以及0.98%，这也就说明12h内测定有稳定的结果。

4.3取参照品溶液10μL，吸取过程保证精准，注入液相色谱仪然后测量峰面积，数据显示黄豆黄苷以及黄豆黄素的RSD依次为（n=5）0.77%以及1.03%，这也就说明仪器十分精密。

4.4将信噪比3：1作为标准测得黄豆黄苷以及黄豆黄素的最低检测限依次为0.12μg以及0.26μg。以信噪比10：1时的进样量作为定量限，测得黄豆黄苷以及黄豆黄素的定量限依次为0.38μg以及0.84μg。

4.5将同一样品取出5份，用样品处理法依次测定6种成分的含量。结果黄豆黄苷以及黄豆黄素的RSD依次为0.97%以及0.83%，实验数据说明该方法有良好的重复性。

4.6此试验我们用的是加样回收率的方法。现有明确含量的样品，我们依次精确地取出共9份，平均分为三组，按高、中、低3个水平依次精确地加入一定量参照品，然后进行供试品溶液制备的操作，数据显示回收率依次为黄豆黄苷97.86%（RSD 1.83%），黄豆黄素96.43%（RSD 0.95%）。这也就说明通过这种方法对异黄酮类成分进行测量，有良好的回收率。

4.7按上文中提到的方法进行样品溶液的制备并测定，5种大豆异黄酮类保健食品（样品都是市售含大豆异黄酮同类产品，依次编号1，2，3，4，5）样品的测定结果，见表1。

5讨论

5.1研究发现，2种大豆异黄酮参照品溶液的最大吸收波长处于（255±1）nm，故我们选取255nm为检测波长。

5.2提取方法的选择根据相关的文献提出再与黄豆黄苷以及黄豆黄素自身的性质特点相结合，对超声提取以及回流提取进行了对比，结果显示二者提取效率并无大的差异，而且超声提取方法更为简易，所以将其作为我们最终的选取。在考量了甲醇、乙醇、70%甲醇、50%甲醇以及70%乙醇之后，我们发现甲醇提取效率最为突出，因此将甲醇作为提取溶剂的最终选择。

5.3这次的实验主要是为了探究大豆异黄酮成分的保健食品中黄豆黄苷以及黄豆黄素二者功效成分含量的测量方法，为该类产品的质量掌控划定统一标准。由实验结果看来，由不同商家生产的同类产品二者的含量有着极大的差距，这也就反映出现在市场上此类产品的质量参差不齐的情况。此外，含量测定方法学实验结果显示，采用这种方法进行实验操作起来简单且测定结果精确，重复性较好，可将此方法在含大豆异黄酮类成分保健食品的质量掌控上多多加以应用。

参考文献

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