自体CIK细胞过继性免疫治疗对晚期恶性肿瘤的临床疗效研究

【摘要】目的：探讨自体CIK细胞过继性免疫治疗对晚期恶性肿瘤的临床疗效。方法：选择42例晚期恶性肿瘤患者作为研究对象，抽取50ml外周静脉血，分离单个核细胞，然后加入抗CD3单抗、IL-2、IFN-γ等细胞因子对其进行12～15d细胞培养，成功诱导扩增CIK细胞后分3次回输患者体内，并对治疗前后临床疗效和毒副反应进行统计学比较，并检测治疗前后患者免疫学指标变化情况。结果：治疗后，患者的癌胚抗原得到下降；失眠、食欲不振、疲倦乏力等临床症状均得到明显缓解（P

【关键词】恶性肿瘤；CIK细胞；过继免疫治疗

近年来，生物治疗在肿瘤的基础研究和临床治疗中发挥了越来越重要的作用，目前已成为治疗恶性肿瘤的第四大手段。自体细胞诱导的杀伤细胞（CIK）是一类增殖能力强、对多重耐药肿瘤细胞有很强杀伤活性的肿瘤生物治疗免疫活性细胞，主要表达T细胞标记的CD3细胞和NK细胞标记的CD56细胞。大量基础研究表明[1-5]，连续回输CIK细胞可以在不损伤机体免疫功能的前提下，对肿瘤细胞进行直接杀伤，并且能够提高机体免疫力。自体CIK细胞过继性免疫治疗是一种从肿瘤患者外周血中分离多种效应细胞，体外诱导培养后回输体内，以提高临床疗效，提高生活质量的生物治疗手段。我院肿瘤科近年来对恶性肿瘤患者给予自体CIK细胞过继性免疫治疗，取得了不错的临床疗效，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料 以我院肿瘤科2010年6月至2012年2月期间收治的42例晚期恶性肿瘤患者为研究对象，均经病理或细胞学检查确诊为恶性肿瘤，根据国际抗癌联盟制定的《恶性肿瘤 INM分类法》肿瘤分期标准，所有病例均为Ⅲ、Ⅳ期，均有可测量的肿瘤病灶，预计生存期均>3个月，Karnofsky评分≥60分。其中男性24例，女性18例，年龄36～82岁，平均年龄（58.3±9.6）岁。肺癌14例，结肠癌8例，原发性肝癌6例，直肠癌5例，乳腺癌4例，其它5例。行CIK细胞治疗前有30例接受过化疗，占71.4%，有12例接受过放疗，占28.6%，放化疗与CIK细胞生物治疗间隔均在1月以上。合并严重肝肾功能不全、急慢性感染、精神障碍、免疫系统疾病等患者均已排除在外。接受治疗前均已签署治疗知情同意书。

1.2方法

1.2.1CIK细胞体外培养 清晨空腹状态下抽取外周静脉血50ml，以淋巴细胞分离液分离出单个核细胞，洗涤3次后用含10%人AB血清的RPMI1640培养基调节密度至1～2×106/ml后进行培养。培养箱内条件设为： 37℃，5%浓度的CO2。培养第1d加入重组人IFN-γ，浓度调至2000U/ml；第2d加入rhIL-2，调节浓度至1000U/ml，并加入浓度为50ng/ml的CD3MaAb。定期更换培养液，1次/3d，记录细胞的生长情况。

1.2.2CIK细胞的鉴定与质量控制 单个核细胞培养1周后进行计数，并检测细胞活度，根据培养量计算出CIK细胞总数。对诱导培养扩增的CIK细胞进行细胞表型分析和细胞杀伤活力测定，同时对安全性进行评价。

1.2.3细胞回输 细胞培养13～15d后，收集合格的CIK细胞，洗涤3次，配成250ml液体（含5%的人血白蛋白、1000U/ml的IL-2）后回输入患者体内，每次回输细胞总量2～5×109，1次/2d， 1疗程/3次。

1.3观察指标 ①分别于治疗前后应用电化学发光免疫分析仪（型号：Elecsys 2010型；生产厂家：罗氏公司）检测患者肿瘤标志物癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）水平变化，同时用流式细胞仪测定外周血T细胞亚群等免疫学指标变化情况。②观察治疗后患者临床症状改善情况，包括睡眠、食欲、精神状态等。评价标准：显著改善（临床症状积分值下降≥2/3）、部分改善（积分下降在1/3～2/3之间）、无改善（积分下降

1.4统计学处理 应用SPSS17.0软件对数据进行统计分析，计量资料应用t检验，计数资料应用c2检验，检验标准以P

2结果

2.1肿瘤标志物测定 经CIK细胞治疗后，36例CEA升高的患者有28例下降，8例稳定，6例AFP升高的患者均下降，4例CA125升高的患者有3例下降，1例稳定。

2.2治疗前后T细胞亚群变化 治疗后，患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及NK细胞（CD16+、CD56+）均较治疗前显著升高，CD8+下降，统计学均有显著性差异（P

2.4临床疗效 经CIK细胞治疗后，19例患者部分缓解，12例轻度缓解，9例稳定，2例进展，临床有效率为73.8%。

2.5毒副反应 出现一过性发热者6例，但其体温均

3讨论

过继性免疫疗法是近年来被广泛应用于肿瘤治疗的重要方法。研究表明[6]，T淋巴细胞如CD3+、CD4+、CD8+及NK细胞对机体免疫调节发挥重要的作用，其中诱导性CD4+T淋巴细胞和杀伤性CD8+T淋巴细胞起主要调节作用，CD4+/ CD8+是反应机体免疫功能的重要指标。恶性肿瘤患者往往机体免疫功能受到重大损伤，CD4+/ CD8+值大幅减小，这就给肿瘤细胞大量增殖提供了机会。免疫疗法可以改变恶性肿瘤患者体内T淋巴细胞亚群及NK细胞的比例，提高患者的免疫力，抑制肿瘤细胞的增值。但是以往的免疫疗法常存在扩增不够、毒副作用大等缺点，因此临床应用受到了很大的限制。

CIK细胞是1991年由Schmidt Wolf等研究发现的肿瘤生物治疗效应细胞，是由单个核细胞在多种细胞因子的刺激下扩增的异质细胞，具有增殖迅速、杀瘤活性强、毒副作用轻微等优势。病理研究发现，CIK细胞主要是通过释放颗粒酶和穿孔素来裂解、杀伤肿瘤细胞的，同时还可以刺激机体分泌TNF、IL-2、IFN-γ等多种细胞因子，不仅能够直接抑制肿瘤细胞的增殖，而且能够通过调节机体免疫系统间接地杀伤肿瘤细胞[5-8]。由于恶性肿瘤患者的外周血CIK细胞水平低，为使其能够更好地发挥抗瘤作用，必须进行体外培养，然后回输于患者体内，以进行生物免疫治疗。

本研究中，我们给予抗CD3单抗、IL-2、IFN-γ等细胞因子对分离单个核细胞进行了12～15d细胞培养，成功诱导扩增CIK细胞，并分3次回输患者体内，结果发现，42例患者治疗后临床症状明显改善，毒副反应轻微，同时患者肿瘤标记物下降，治疗的有效率为73.8%，患者外周血中CD3、CD4 T细胞和NK细胞水平均较治疗前显著升高，差异均有统计学意义（P

总之，自体CIK细胞过继性免疫治疗对晚期恶性肿瘤患者临床疗效确切，能显著提高患者免疫功能，改善临床症状，提高患者生活质量，有效控制肿瘤转移和复发，值得临床推广和普及。

参考文献：

[1] Qin Chai； Dong-jian An.Analysis on Emcacy of CIK Cells in Advanced Malignant Tumors [J]. Practical Preventive Medicine，2011，9（12）：62-63.

[2] Xiu-bao Ren；Jin-pu Yu；Hong Liu，et al. Thl Bias in PBAAC induced by large scale auto - CIK infusion in malignant solid tumor patients in China [J]. Chinese Journal of Clinical Oncology，2004，1（4）：284-294.

[3] Xiao-Dong Li；Bin Xu；Jun Wu，et al.. Review of Chinese clinical trials on CIK cell treatment for malignancies [J]. Clinical and Translational Oncology，2012，14（2）：102-108.

[4] Qun Zhao；Hui Zhang；Yong Li，et al；. Anti-tumor effects of CIK combined with oxaliplatin in human oxaliplatin-resistant gastric cancer cells in vivo and in vitro [J]. Journal of Experimental and Clinical Cancer Research，2010，29（1）：1-13.

[5] Long-bang Chen；Peng-ying， Liu. The anti-tumor effects of CIK cells combined with docetaxel against drug-resistant lung adenocarcinoma cell line SPC-A1/DTX in vitro and in vivo [J]. Biomedicine and Pharmacotherapy，2009，63（5）：323-323.

[6] Giulia Mesiano；Maja Todorovic；Loretta Gammaitoni，et al. Cytokine-induced killer （CIK） cells as feasible and effective adoptive immunotherapy for the treatment of solid tumors [J]. Expert Opinion on Biological Therapy，2012，12（6）：673-684.

基金项目：深圳市南山区科技计划项目，项目编号2012009