HPLC法测定复方鼻咽洗剂中绿原酸的含量

[摘要] 目的：建立复方鼻咽洗剂中绿原酸含量的测定方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为DIKMA Diamonsil C18（150 mm×4.6 mm，5 μm），柱温40℃，流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)，流速为1.0 ml/min，检测波长为327 nm。结果： 绿原酸的回归方程为Y=2 468 778.008 2X+2 128.139 3，相关系数r=0.999 6，线性范围0.04~0.40 μg，平均回收率为99.75%，RSD=1.82％(n=9)。结论：本法简便、准确、重现性好、适用性强，可作为复方鼻咽洗剂的质量控制方法。

[关键词] 高效液相色谱法；复方鼻咽洗剂；绿原酸；含量测定

[中图分类号]R917[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2007）08（b）-088-03

Content determination of chlorogenic acid in compound nasopharyngeal lotion by HPLC

HUANG Xiao-ling1, PENG Jie-ren2, LIANG Xiang-feng2, LU Ri-ming 3

(1.Shenzhen Chronic Disease Prevention and Treatment Hospital, Shenzhen 518019,China; 2.The Second Affiliated Hospital of sun Yet-sen university, Guangzhou 510120,China; 3.Shenzhen Hospital of Chinese Medicing, Shenzhen 518033,China)

[Abstract] Objective：To establish a method for the determination of chlorogenic acid in compound nasopharyngeal lotion. Methods: HPLC was used with chromatographic conditions including DIKMA Diamonsil Cl8(150 mm×4.6 mm,5 μm).The column temperature was 40℃，the mobile phase was acetonitrile-phosphoric acid (13∶87),the flow rate was 1.0 ml/min, and the detection wavelength was 327 nm. Results: The linear calibration curve (Y=2 468 778.008 2X+2 128.139 3，r=0.999 6) was obtained in the concentration range of 0.04~0.40 μg/ml，and the average recovery was 99.75% with RSD of 1.82％( n=9 ). Conclusion: The method is simple and accurate with good reproducibility，suitable for quality control of compound nasopharyngeal lotion.

[Key words] HPLC; Chlorogenic acid; Compound nasopharyngeal lotion；Assay

复方鼻咽洗剂由白花蛇舌草、野、银花、薄荷、天花粉等十二味中草药组成，具有清热解毒、排脓生肌、活血祛瘀、养阴血、扶正祛邪之功效，临床用于鼻咽癌放疗的辅治疗和护理作用，经医院临床应用具有良好的效果。为了加强该制剂的质量控制，完善其质量标准，本文采用HPLC法对该制剂中野、银花药材所含的绿原酸进行了含量测定研究[1]。结果表明，本文实验方法成熟、可行，可为该制剂的质量控制提供定量依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

SPD-10AVP型色谱仪（日本岛津）；DIKMA Diamonsil C18色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）。

1.2 试剂

绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号0773-0508，供含量测定用）；水为纯水；乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯；供试品（本院自制样品10批）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

C18色谱柱（DIKMA Diamonsil，150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.4%磷酸（13∶87）；流速：1.0 ml/min；柱温40℃；检测波长为327 nm[取绿原酸对照品溶液置紫外分光光度仪中进行全波长扫描，结果表明，对照品溶液在波长327 nm处有最大吸收(图1)，并参照有关文献报道[2，3]，故选择327 nm为绿原酸的测定波长]。

2.2 供试品溶液的制备

精密量取样品2 ml，置25 ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液2 ml，置25 ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.3 对照品溶液的制备

取绿原酸对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成每1 ml 含20 μg的溶液，即得。

2.4 阴性对照品溶液的制备

取除野、银花以外按本品处方比例的原药材，按样品制备工艺制成阴性对照样品，再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液，即得。

2.5 线性关系考察

精密吸取绿原酸对照品溶液（浓度为0.201 2 mg/ml，配制方法：精密称取绿原酸对照品10.06 mg，加甲醇溶解并定容至50 ml）1、3、5、7、10 ml，分别置50 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；然后分别精密吸取10 μl(绿原酸量分别为：0.040 24、0.120 72、0.201 20、0.281 68、0.402 40 μg)，注入液相色谱仪，测定其峰面积，以绿原酸浓度为横坐标，峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=2 468 778.008 2X+2 128.139 3，相关系数r=0.999 6，结果表明绿原酸在0.04～0.40 μg范围内呈良好线性关系，见表1和图2。

2.6 专属性试验

在选定的色谱条件下，参照高效液相色谱法进行试验，结果表明绿原酸对照品及复方鼻咽洗剂样品在相同的保留时间处（tR=8.571 min）有色谱峰，而缺野、银花的复方鼻咽洗剂阴性样品溶液无相应的色谱峰，不干扰样品测定，见图3~5。

2.7 稳定性试验

精密吸取绿原酸对照品溶液10 μl，每隔一定时间进样1次，共6次，RSD=2.14%(n=6)，表明绿原酸在24 h内基本稳定，结果见表2。

2.8 精密度试验

精密吸取绿原酸对照品溶液10 μl，重复进样6次，测定其峰面积，RSD=1.22%(n=6)，表明仪器进样精密度良好，结果见表3。

2.9 重复性试验

取供试品（批号050127）6份，按样品测定方法测定，RSD=表4重复性试验

1.89%(n=6)，说明该含量测定方法可行，结果见表4。

2.10 加样回收试验

采用加样回收法，精密吸取已知含量的内容物（批号：050127，含量为2.698 3 mg/ml）1 ml共9份，分别精密加入浓度为1.356 4 mg/ml的绿原酸对照品的甲醇溶液1、1、1、2、2、2、3、3、3 ml(配制方法：称取绿原酸对照品33.91 mg，加甲醇溶解并定容至25 ml)。照供试品溶液制备方法处理并测定，计算得平均回收率为99.75%，RSD=1.82%(n=9)。结果表明，本法回收率良好，见表5。

2.11 样品的含量测定取10批复方鼻咽洗剂产品照含量测定方法测定，结果见表6。

3 讨论

我们曾试验过多种流动相，如甲醇-1%磷酸（24∶76）、甲醇-0.5％醋酸（35∶65）、乙腈-0.016 mol/L磷酸二氢钾（1∶4），甲醇-水-甲酸(40∶80∶1)，甲醇-水溶液（磷酸调pH至2.7），甲醇－磷酸缓冲液（23∶77）等，分离效果均不理想。最终确定流动相为乙腈-0.4％磷酸（13∶87）。

本文测定方法经各项试验考察，结果表明方法简便、快速、准确、重现性好、稳定性高，可用于测定复方鼻咽洗剂中野、银花药材所含绿原酸的含量，以利于产品质量控制。

[参考文献]

[1]中华人民共和国国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2000.附录ⅥD.

[2]熊慧敏. HPLC法测定金银花口服液中绿原酸含量[J].微量元素与健康研究, 2003, 20 (4):41-42.

[3]张华年,杨少芳. HPLC同时测定双黄连注射剂中氯原酸和黄芩苷2种指标成份含量[J].中国现代应用药学杂志,1999,16(6):47-49.

（收稿日期：2007-06-06）

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