改进国际方法蛋白测定凯氏定氮法硼酸溶液的配制及效果

【摘要】在使用一次性加入混合指示剂的方法配制2%硼酸吸收液，将已滴定至终点的吸收重复使用，用于平行验。这样可简化实验操作，尤其是在进行批量样品检测时，对于硼酸吸收液可以不必再逐个滴加混合指示剂，使实验操作中减少了50%的吸收次数，节约了50%试剂的用量。在实际工作中我们不仅提高了工作效率，而且也提高了科里的经济效益。

【关键词】蛋白测定;凯氏定氮法;硼酸溶液配制

【中图分类号】R156.3【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)12-0045-01

在实验室中，人体蛋白测定大多采用国际凯氏定氮法，试验中碱化蒸馏时所用吸收液，是用来吸收游离中的氨，再用盐酸或硫酸标准液滴定，最后根据混合指示剂颜色变化来判断终点，我们在实践工作中将此方法加以改进，今在此介绍如下：

1 硼酸溶液的配制方法

1.1 将2份0.1%甲基红乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液混合。2、将适量上述混合指示剂一次性加入已配置好的2%硼酸溶液中，使溶液呈蓝紫色。

1.2 硼酸溶液的重复使用方法: 按国际方法（GB5009.5―85）操作，在平行试验时，将已滴定至终点的2%硼酸吸收重复使用。

1.3 溶液配制时注意事项:

配制2%硼酸吸收液时，混合指标剂加入量不宜过多，以透过试剂瓶观察紫色刚好透明为宜，如溶液偏蓝，用0.1%甲基红乙醇溶液调制蓝紫色；反之若偏紫红，可用0.1%次甲基蓝乙醇溶液调重紫蓝色。配制后的2%硼酸吸收液可行预实验。即取少量吸收液于试管中，加入1滴氨水（1+2）观察，其颜色变化是否明显与正常。

1.4 实验室反应原理:

待测样品中的蛋白质经H2SO4催化剂消化后，分解的氨与H2SO4反应生成硫酸铵，然后碱化蒸馏使氨游离，用2%硼酸溶液吸收生成硼酸铵，其反应式为：2NH3+4H3BO3 (NH4)2B4O7+5H2O

该反应可使吸收液由酸性变为碱性，混合指示剂由蓝色变为绿色，然后用H CL或H2SO4标准液滴定，使混合指示剂绝色返至蓝紫色即为终点。重复使用时，仍可按上述原理反应。

1.5 实验终点颜色:

在滴定终点观察颜色时，样品消化液终点与空白消化液终点应色调一致。

2 实验结果

将一次性使2%硼酸吸收液的国际方法与重复使用2%硼酸吸收液的新方法进行对照实验，经t检验，t=0.659，P0.51，两种使用方法无明显差异。

对照试验结果1.

3 结果讨论

在使用一次性加入混合指示剂的方法配制2%硼酸吸收液，将已滴定至终点的吸收重复使用，用于平行验。这样可简化实验操作，尤其是在进行批量样品检测时，对于硼酸吸收液可以不必再逐个滴加混合指示剂，使实验操作中减少了50%的吸收次数，节约了50%试剂的用量。在实际工作中我们不仅提高了工作效率，而且也提高了科里的经济效益。