保健酒中总黄酮的含量测定

[摘要] 目的 建立测定保健酒中总黄酮含量的方法，并对6个样品进行测定。 方法 将样品进行处理后，用NaNO2、Al（NO3）3、NaOH显色，再采用可见分光光度法（检测波长为505 nm）测出吸光度，以芦丁为标准品绘制的标准曲线求出总黄酮含量。 结果 方法学考察中精密度、重现性、回收率良好，该方法在15～40 min内稳定，线性范围0～1.01 mg。 结论 该方法操作简单，高效稳定，适合本身有颜色的保健酒中总黄酮的含量测定。

[关键词] 保健酒；黄酮；含量测定；分光光度法

[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2012）03（c）-0054-02

黄酮类化合物分子中有游离的3-OH、5-OH或邻二酚羟基时可与Al3+、Zr4+、Pb2+等形成配合物显色，此性质可用于黄酮类化合物的定性、定量分析[1]。本文以亚硝酸钠-硝酸铝显色，采用此法测定保健酒中总黄酮的含量。

1 仪器与试剂

1.1仪器

U-3010可见紫外分光光度计（日立）；比色皿（1 cm）。

1.2 试剂

芦丁标准品（100080-200707，中国药品生物制品检定所），NaNO2（分析纯，天津科盟化工）；Al（NO3）3（分析纯，天津科斯夫化工）；NaOH（分析纯，天津广成）；甲醇（分析纯，山东禹王），保健酒样品（张裕集团提供）。

1.3 试剂配制

1.3.1 5% NaNO2的配制

精密称取NaNO2 2.5 g，蒸馏水溶解并定容至50 mL，临用现配。

1.3.2 10% Al（NO3）3的配制

精密称取Al（NO3）3 5 g，蒸馏水溶解并定容至50 mL，临用现配。

1.3.3 4% NaOH的配制

精密称取NaOH 4 g，蒸馏水溶解并定容至100 mL。

1.3.4 75%甲醇配制

将蒸馏水与甲醇按1∶3的比例混合，即得。

2 方法与结果

2.1标准曲线的制备

精密称取120℃干燥至恒重的芦丁对照品10.1 mg，用75%的甲醇溶解并定容至50 mL。精密吸取0、1、2、3、4、5 mL，分别置于10 mL容量瓶中，各加入甲醇至5 mL，分别加入5%亚硝酸钠0.5 mL，摇匀，放置6 min，加入10%硝酸铝0.5 mL，摇匀，放置6 min，加入4%氢氧化钠4 mL，再加甲醇至10 mL，放置20 min，置比色皿中于400～600 nm之间测定吸收谱，确定最大吸收波长为505 nm，在505 nm处测定吸光度，作标准曲线，得回归方程y = 0.896 5x - 0.002 4，r =0.999 9。表明芦丁含量在0～1.01 mg范围内与吸光度的线性关系良好[2-7]。

2.2 样品的测定

2.2.1 样品处理方法

2.2.1.1 灵芝酒 将灵芝酒样品摇匀精密吸取5 mL置于蒸发皿中，90℃水浴蒸干，75%甲醇溶解，过滤并定容至10 mL，取1 mL显色。

2.2.1.2 特质三鞭酒 将特质三鞭酒样品摇匀精密吸取5 mL置于蒸发皿中，90℃水浴蒸干，75%甲醇溶解，过滤并定容至5 mL，取2 mL显色。

2.2.1.3 金鸡铁树酒 将金鸡铁树酒样品摇匀精密吸取5 mL置于蒸发皿中，90℃水浴蒸干，75%甲醇溶解，过滤并定容至5 mL，取2 mL显色。

每批样品均平行测定3次。

2.2.2 统计学处理

采用SPSS 11.0软件进行处理，计量资料采用t检验，以P ＜ 0.05为差异有统计学意义。

2.2.3 测定结果

测定结果见表1。

2.3 方法学考察与结果

2.3.1 空白的选择

因为样品有很深的颜色，本试验选用样品加碱[8]作空白。

2.3.2 稳定性试验

显色后15～40 min稳定，在15、20、25、30、35、40 min，测定吸光度分别为0.385、0.385、0.384、0.385、0.385、0.386、0.383， RSD为0.27%。

2.3.3 重现性试验

用上述方法对样品平行测定6次，结果分别为0.686、0.678、0.694、0.694、0.688、0.690，RSD为0.87%。

2.3.4 加样回收试验

取1 mL样品5份置于蒸发皿中，加入3 mL标准液（0.22 mg/mL），蒸干，75%甲醇溶解并过滤定容至5 mL。结果见表2。

3 讨论

黄酮类物质是重要的天然保健成分，目前市场上大多数保健酒的主要药效组分是黄酮类成分，因为保健酒都有很深的颜色，使用比色法测定时往往会产生误差。本研究使用可见分光光度法以样品加氢氧化钠作为空白对照，对总黄酮进行测定，经方法学考查验证，具有良好的稳定性和重现性，可以用于深颜色保健酒的总黄酮测定。

[参考文献]

[1] 梁生旺. 中药制剂分析[M]. 北京：中国中医药出版社，2007：126-132.

[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典（一部）[S]. 北京：中国医药科技出版社，2010.

[3] 巩发永. 凉山州苦荞茶总黄酮含量对比及分析[J]. 湖北农业科技，2011， 50（18）：3811-3813.

[4] 李勉，刘广河，王雁，等. 分光光度法测定开封培育中总黄酮含量[J].河南大学学报：医学版，2011，30（3）：174-176.

[5] 王光亚. 保健食品功效成分检测方法[M]. 北京：中国轻工业出版社，2002.

[6] 汪陈平，刘胜华. 大豆异黄酮与原花青素在保健酒中的稳定性研究[J].食品研究与开发，2006，27（3）：146-147.

[7] 王艳，张艳丽. 分光光度法测定新疆昆仑雪菊中总黄酮的含量[J]. 新疆医科大学学报，2011，34（8）：817-819.

[8] 于村，俞莎，沈向红. 中草药总黄酮的提取和含量测定[J]. 浙江预防医学，2002，14（7）：100-101.

（收稿日期：2012-02-09）