时间：2023-11-02 10:54:54
杭州东南化工的前身是一个60多年的老国企，在2001年实施转制为民营企业。旗下的C牌透明皂，在浙江有着1个亿的销量，属于一个局域市场的强势品牌，也是企业的拳头产品，但这个“拳头”并不那么硬，所以，日子过得也并不那么滋润。
透明皂利润极低，再加上渠道价格体系混乱，经销商普遍赚不到钱，怨声很大，长此以往，营销链将难以为继。对东南化工而言，要想发展，必须开发和培育一个新品种，形成另一个拳头，至少保持企业产品在浙江市场的优势。
然而，在这个充分竞争的市场，该细分的已经细分，能挖掘的概念也被挖掘得差不多了，开发新品种的路在何方？进入原有品类的做法看起来似乎不太可能，尤其对于东南化工这样的企业来说，产品若没有特色，无论如何营销，都要浪费掉一些营销资源。
能否设计出一种新的产品，尝试进入一个新的品类？对！就是这样，构建一个新的品类。为了进一步降低风险，东南化工展开了深入调研。之前，洗涤业的主角完全是洗衣粉，透明皂的出现对洗衣粉的地位有了威胁。但两者毕竟不同，透明皂以其更环保健康的洗涤，赢得了越来越多人的认可。能否在透明皂产品品类上进行延伸，创建一个新的品类，试图建立新的游戏规则？娃哈哈集团总裁宗庆厚说过：最好的跟进方式，就是改变过去的游戏规则。
经过产品营销后，C牌液态透明皂诞生了。C牌液态皂以其“拒绝化学物质”这一健康理念打入市场后，获得了广大消费者的广泛认同，在短短一个多月的时间里，液态皂的销量攀升了20多倍。
液态皂以其明显的差异品相，独特的卖点，更健康、环保的洗涤方法，得到了消费者的迅速认可，在C牌液态透明皂的引导下，一个新的品类——“液态透明皂”也随之产生。它并非是透明皂品类的细分，从某种意义上来讲，它是一个全新的品类，与传统洗涤行业的主角——洗衣粉进行抗衡！
C牌洗衣粉向洗衣粉行业开炮，在短短时间内，C牌液态皂已初步形成一个完善的销售网。除了全面进军世纪联华、华润万家等大型超市外，各地的中小超市和购物中心的订单也源源不断，产品本身的独特差异，新品类构建的巨大魅力，吸引了许多经销商，纷纷要求加入到C牌液态皂的销售大军之中。
几个月的时间内，C牌液态皂的触角已经伸到全国的各个角落。目前，东南化工的三条生产线均告吃紧，作业班次已由两班增加到三班，但仍无法解决供不应求的局面，厂方正计划引进数条生产线，扩大液态皂的产量，来满足市场的需求。
C牌液态皂为何能在如此短时间内引起市场销售热潮？首先，产品比洗衣粉、透明皂更能满足消费者的需求。独特的品相构建新品类的先天条件，成为消费者更喜欢健康、环保的洗涤产品，C牌液态透明皂刚好迎合了这种需求。
但是，新品类的构建需要构建者持续的营销计划支持，毕竟液态透明皂对消费者来讲还是一个新的产品，想要消费者放弃试用多年的洗衣粉洗涤方式，换用更环保、更健康的液态透明皂，不是一件容易的事情。
产品的价格消费者是否接受？购买的方便性如何？这就涉及成本、渠道等营销因素的基本建设，构建一个品类是一项系统的营销工程。C牌液态皂想要获得更好的销售，必须将产品的特点充分展示出来，传递给消费者，这就需要贴近地面的促销活动支持。
【摘要】 目的 研究乌头碱、人参皂苷rg1与延胡索乙素的透皮吸收及其相互间经皮渗透的影响。方法 采用permcell kh-5p型横式扩散池分别进行全皮和去角质层皮肤的体外透皮实验,用高效液相色谱法测定乌头碱、人参皂苷rg1与延胡索乙素的累积透过量,并计算出它们的经皮渗透动力学参数。测定有效成分的油水分配系数(logp),考察2种及3种有效成分组合的透皮行为及相互影响。结果 乌头碱、人参皂苷rg1与延胡索乙素在全皮中的扩散系数分别为123.95、50.32、96.25(×10-10 cm2/s),在活性表皮中的扩散系数分别为539.00、93.60、354.70(×10-10 cm2/s),logp依次分别为1.66、0.66、0.57。在3种有效成分共存的体系中,三者的累积透过量出现64%～293%不同程度的提高。结论 3种有效成分合用对经皮吸收会产生协同促进作用,其中乌头碱与人参皂苷rg1间的经皮协同促渗作用最明显。
【关键词】 乌头碱；人参皂苷rg1；延胡索乙素；油水分配系数；经皮渗透
abstract：objective to study percutaneous absorption kinetics and synergistic penetration enhancement of tetrahydropalmatine, aconitine and ginsenoside rg1. methods the in vitro intact and stripped skin permeation experiments were carried out by using permcell kh-5p horizontal proliferation system. the percutaneous kinetic parameters of tetrahydropalmatine, aconitine and ginsenoside rg1 were determined by hplc, and the transdermal behaviors of the three active ingredients and interactions of combination were investigated. result the cumulative amounts in 24 h of intact skin of tetrahydropalmatine, aconitine and ginsenoside rg1 were 123.95, 50.32, 96.25 (×10-10 cm2/s). the cumulative amounts in 24 h of stripped skin of them were 539.00, 93.60, 354.70 (×10-10 cm2/s). the logp were 1.66, 0.66 and 0.57 respectively. each component had cumulated amount permeated of improvement by 64%～293% in coexistence system of three active ingredients. conclusion the combination of three active ingredients results in a synergistic enhancement effect on percutaneous absorption of every active ingredient, and it is shown that the maximal enhancement effect appears between aconitine and ginsenoside rg1.
key words：aconitine；ginsenoside rg1；tetrahydropalmatine；logp；transdermal permeation
川乌祛寒湿风痹、血痹,三七和营止血、通脉行瘀,行瘀血而敛新血,是活血止痛外用方剂中常用的两种药材,它们经常配伍使用,以达活血散瘀、理气止痛之协同功效,如云南白药中含有川乌和三七等药材,其活血止血、消肿止痛的功效显著[1]。延胡索活血、利气、止痛,也是止痛方剂中常用的中药材,如冰辛巴布剂由延胡索、三七等多种药材组成,对热刺激引起的疼痛抑制作用明显[2]。
与口服给药不同,中药外治首先有效成分必须能够渗透进入体内,目前对中药经皮促渗的研究多集中在冰片、薄荷等挥发性成分的促渗上[3-4],而对经皮渗透和吸收的相互影响研究不多。本研究采用川乌、三七和延胡索中主要有效成分——乌头碱、人参皂苷rg1与延胡索乙素,通过体外透皮试验,研究3种有效成分经全皮和去角质层皮肤的渗透动力学特征,考察不同组合对经皮吸收的影响,从现代经皮渗透动力学角度探讨并诠释传统外用中药配伍的合理性。
1 材料
1.1 仪器
permcell kh-5p型横式扩散池(日本vidrex)；lc-2010a高效液相色谱仪(日本岛津)；j0100-3电子天平(沈阳龙腾电子有限公司)；syc15超级恒温水浴(巩义英裕予华仪器厂)；ph计(pbh-3,上海三信仪表厂)；lg16-w离心机(北京医用离心机厂)。
1.2 药物与试剂
乌头碱、延胡索乙素(西安山川生物科技有限公司,纯度大于95%)；人参皂苷rg1(南京青泽医药科技开发有限公司,纯度大于95%)。磷酸,三乙胺,磷酸二氢钾,磷酸氢二钾；甲醇、乙腈均为色谱纯。
1.3 动物
昆明种小鼠,雌雄兼用,鼠龄(50±2)d,体重(20±2)g,大连医科大学动物中心。
2 方法
2.1 分析方法的建立
2.1.1 色谱条件
2.1.1.1 乌头碱与延胡索乙素
色谱柱：hypersil c18(150 mm×4.6 mm,5 mm),流动相：a相为0.25%磷酸水溶液,用0.05%三乙胺调ph至3.0,b相为甲醇。梯度洗脱系统b相：0～13 min 30%～34%,13～16 min 34%～55%,16～23 min 55%,23～25 min 55%～30%,保持30%至26 min。检测波长240 nm,流速1.0 ml/min,柱温30 ℃；进样量20 μl。延胡索乙素保留时间10 min,乌头碱保留时间22.5 min。
2.1.1.2 人参皂苷rg1
色谱柱：hypersil c18(250 mm×4.6 mm, 5 mm),流动相体积比：乙腈-水＝23∶77。流速1 ml/min,柱温30 ℃,进样量20 μl,检测波长：203 nm。人参皂苷rg1保留时间11.6 min。
2.1.2 线性关系
乌头碱浓度(c)在0.5～50.0 g/ml范围内与峰面积(a)线性关系良好,线性方程为a＝8 095.6c＋666.7, r2＝0.999 5。延胡索乙素浓度(c)在0.5～50.0 g/ml范围内与峰面积(a)线性关系良好,线性方程为a＝11 419c＋1 889, r2＝0.999 5。人参皂苷rg1浓度(c)在0.92～92 g/ml范围内与峰面积(a)线性关系良好,线性方程为a＝2 126.3c＋502.9, r2＝0.999 9。
2.1.3 精密度
乌头碱：精密度日内rsd＜0.9%(n＝3),日间rsd＜1.2%。延胡索乙素：精密度日内rsd＜0.9%,日间rsd＜1.1%。人参皂苷rg1：精密度日内rsd＜1.0%,日间rsd＜1.5%。
2.1.4 回收率测定
乌头碱平均回收率为100.6%,rsd＝0.85%。延胡索乙素平均回收率为100.3%,rsd＝0.86%。人参皂苷rg1平均回收率为101.2%,rsd＝0.98%。
2.2 有效成分稳定性考察
2.2.1 乌头碱稳定性
将一定量的乌头碱用微量甲醇溶解,分别加入纯净水、按2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录方法配制pbs(ph＝5.0)与0.05 mol/l的naoh溶液,制得乌头碱水溶液(ph＝7.2)、乌头碱酸性缓冲盐溶液(ph＝5,配制方法见“2.5.2”项)与乌头碱碱性溶液(ph＝9.4)。将3种溶液放入恒温水浴锅中[(37±0.5)℃],在配制后10 min及12、24、48 h取样,检测溶液内成分变化,实验结果采用高效液相色谱(hplc)分析。
2.2.2 延胡索乙素与人参皂苷rg1稳定性
将延胡索乙素与人参皂苷rg1分别加入一定浓度的磷酸盐缓冲液pbs(ph＝5.0)和纯净水溶液(ph＝7.2),放入恒温水浴锅中,维持温度为(37±0.5)℃,在配制后1、3、6、9、12、24 h取样,用高效液相色谱分析,考察其在酸性与中性条件下的稳定性。
2.3 油水分配系数的测定
分别测定3种有效成分的油水分配系数(logp),以正辛醇-水为分配体系。将溶有一定量药物的水相装入试管,加入等体积的正辛醇,在一定强度下振荡,然后于2 000 r/min离心10 min,用hplc法检测水相中药物浓度(cw)。设水相中原来的药物浓度为c,分配平衡后油相中的药物浓度为c－cw,logp,用下式计算。
2.4 离体皮肤的制备
取昆明种小鼠,采用脱毛剂(含na2s 7%)脱毛,48 h后断颈处死,取背部皮肤,确保角质层完好无损,除去皮下组织和脂肪,得到完整离体皮肤。将完整皮肤先用带表卡尺测量厚度,再用透明胶带完全粘附于皮肤表面后揭下,重复15～20次,得到活性表皮,也称去角质层皮肤。所得皮肤采用保鲜膜包裹好后置于密封袋,-20 ℃冰箱保存备用(1周之内使用)。
2.5 体外透皮试验
2.5.1 供给液的配制
2.5.1.1 乌头碱与延胡索乙素供给液的配制
称量乌头碱与延胡索乙素原料药2 mg,分别加入40 ml纯净水,配制成乌头碱饱和溶液与延胡索乙素饱和溶液作为供给液。(37±0.5)℃下放置48 h,试验时取出备用。
2.5.1.2 人参皂苷rg1供给液的配制
称量人参皂苷rg1原料药80 mg,加入40 ml纯净水,得到浓度为2 mg/ml的人参皂苷rg1供给液。(37±0.5)℃下放置,实验时取出备用。
2.5.1.3 含有2种有效成分供给液的配制
3种有效成分在供给液中的浓度与其单成分供给液的浓度相同,配制方法同其单成分供给液的配制。故得到3种含有2种有效成分供给液,分别为人参皂苷rg1-乌头碱、人参皂苷rg1-延胡索乙素、延胡索乙素-乌头碱。
2.5.1.4 含有3种有效成分供给液的配制
人参皂苷rg1-延胡索乙素-乌头碱供给液,其各有效成分在供给液中的浓度与其单成分供给液的浓度相同,配制方法同其单成分供给液的配制。
2.5.2 接收液的配制
接收液为磷酸盐缓冲溶液(ph＝5.0)。取磷酸二氢钾0.834 g与磷酸氢二钾0.087 g,加水使溶解成100 ml,用磷酸调节ph值到5.0。
2.5.3 试验步骤
将皮肤室温解冻10 h后,平整置于扩散池的接合部,表皮层面向供给池,真皮层面向接收池,然后将两水平相对的扩散池夹紧密封,扩散面积为0.627 cm2。用移液管向接收池内加入5.0 ml pbs,向供给池内加入5.0 ml供给液,维持整个系统在(37±0.5)℃。搅拌子转速为700 r/min,分别在1、3、6、9、12、24 h从接收池内取0.2 ml,并补充同体积pbs。样品用hplc法测定其浓度,通过下式计算累积透过药量。
q＝(cn×v＋∑cn－1×0.2)a
q：单位面积累积透过药量(μg/cm2)；v：接收液体积(ml)；a：扩散池口面积(cm2)；cn：第n次取样的浓度(μg/ml)；式中0.2为每次取样体积。以药物稳定透过皮肤时的累积透过药量q对时间t进行线性回归所拟合直线的斜率即为经皮稳态渗透速率( )v[μg/(cm2·h)]和( )w[μg/(cm2·h)]；该直线与时间轴的交点为时滞(h)。根据公式(2.2)计算出试验药物在活性表皮和全皮中的扩散系dv和dw,以及角质层的扩散系数ds。
式中：d代表扩散系数；cs代表药物在皮肤表面的浓度；h和h分别是角质层和活性皮肤的厚度·；v和w分别代表活性表皮和全皮,s代表角质层。
3 结果
3.1 有效成分的稳定性
3.1.1 乌头碱稳定性
乌头碱水溶液(a溶液,ph＝7.2)中,随着时间的延长乌头碱的含量逐渐减少,乌头碱主要分解成为另外2种产物,其中之一是经过炮制后的主要成分苯甲酰基乌头原碱。乌头碱酸性缓冲盐溶液(b溶液,ph＝5.0)中,48 h内乌头碱的浓度未变,未见有其他成分出现。乌头碱碱性溶液(c溶液,ph＝9.4)的成分变化与a溶液相似,并且分解程度更为显著,结果见表1。
从表1看出,a溶液中10 min时还未见有分解产物生成,而c溶液在10 min时乌头碱已有35%分解。因此,ph对乌头碱的稳定性有很大影响,乌头碱在酸性条件下可以保持稳定长达48 h,在碱性条件下立即分解。因此,选择体外透皮试验的接收液需要考虑乌头碱在不同溶液环境中的稳定性。表1 溶液ph对乌头碱稳定性的影响(略)
3.1.2 延胡索乙素与人参皂苷rg1稳定性
延胡索乙素与人参皂苷rg1在24 h内,于水溶液(ph＝7.2)与磷酸盐缓冲液pbs(ph＝5.0)中稳定,含量未发生变化,没有分解产物生成。
3.2 油水分配系数测定
3种有效成分的logp由大到小顺序为：延胡索乙素(1.66)＞乌头碱(0.66)＞人参皂苷rg1(0.57)。
3.3 有效成分透皮试验
3种有效成分在去角质层皮肤中的经皮渗透明显高于全皮,延胡索乙素对活性表皮的24 h累积透过量、稳态速率分别是全皮的2.7倍和2.4倍；乌头碱活性表皮的24 h累计透过量、稳态速率分别是全皮的2.7、1.3倍；人参皂苷rg1活性表皮的24 h累计透过量、稳态速率分别是全皮的45、23倍。结果见表2。表2 延胡索乙素、乌头碱和人参皂苷rg1的24 h累积透过量与经皮动力学参数(略)注：qw：24 h全皮累积透过量；qv：24 h活性表皮累积透过量；dw：全皮扩散系数；dv：活性表皮扩散系数；ds：角质层扩散系数；tdw：全皮时滞(下同)
3.4 有效成分组合透皮试验
3.4.1 延胡索乙素在不同组合中体外透皮试验
延胡索乙素分别与人参皂苷rg1、乌头碱合用,对改善延胡索乙素的经皮吸收作用不明显,反而显示了一定的抑制作用,但3种有效成分合用却可提高延胡索乙素的经皮吸收,使延胡索乙素24 h全皮累积透过量增加了64.0%,结果见表3。表3 延胡索乙素在不同组合中的24 h全皮累积透过量(略)
3.4.2 乌头碱在不同组合中体外透皮试验
人参皂苷rg1可以显著促进乌头碱24 h全皮累积透过量,提高量达87.3%,但延胡索乙素对乌头碱经皮渗透没有作用,3种有效成分合用,可显著增加乌头碱的经皮吸收,使其24 h全皮累积透过量增加了2.93倍。结果见表4。表4 乌头碱在不同组合中的24 h全皮累积透过量(略)
3.4.3 人参皂苷rg1在不同组合中体外透皮试验
乌头碱可以显著促进人参皂苷rg1的24 h全皮累积透过量,提高量达109.2%,乌头碱与三七皂苷具有明显的相互协同促进作用。其中再加入延胡索乙素则没有明显的促进作用,三者合用使乌头碱24 h全皮累积透过量比单独使用增加了1.07倍。结果见表5。表5 人参皂苷rg1在不同组合中的24 h全皮累积透过量(略)
4 讨论
乌头碱在中性及碱性条件下均不稳定,有分解产物的生成,因此,如果选用中性溶液作为接收液就会影响乌头碱透皮结果的检测。乌头碱在酸性条件下稳定,24 h内不发生水解反应,因此,选用磷酸盐缓冲溶液(ph＝5.0)作为接收液。除了有效成分稳定性之外,溶解度也影响着接收液的选择。人参皂苷rg1在水中溶解度很好。乌头碱与延胡索乙素在中性水溶液环境中溶解度很小,在酸性环境下溶解度有明显提高,可以使经皮渗透试验达到漏槽条件。
对于亲脂性药物延胡索乙素与乌头碱,其活性表皮的扩散系数比角质层的扩散系数大得多。乌头碱、人参皂苷rg1与延胡索乙素对活性表皮的扩散系数分别为539.00、93.60、354.70(×10-10 cm2/s),分别是它们在角质层的扩散系数的123、25、149倍。这是因为角质层主要由角质细胞组成,细胞间隙含有甾醇、脂肪酸、各种脂质等成分,角质层整体为疏水性,而活性表皮为水性组织,密度和导电性仅比纯水略大,分子在其中的扩散性良好。通过比较发现,乌头碱对活性表皮及角质层的扩散系数相差倍数最小,角质层对乌头碱的阻碍作用相对较小,而对延胡索乙素与人参皂苷rg1的阻碍作用较为明显。影响扩散系数的因素除了药物的亲水/亲脂性外,还有分子量大小、热力学活度等因素。延胡索乙素分子量最小,其在活性表皮及角质层的扩散系数均为三者中最大,同时人参皂苷rg1分子量大于乌头碱,但其在活性表皮的扩散系数比较高,这可能与人参皂苷rg1在活性表皮内优良的水溶性有关。
乌头碱与人参皂苷rg1有显著的互相促进渗透作用(见表4、表5),人参皂苷rg1使乌头碱24 h全皮累积透过量提高了87.3%,乌头碱也促进人参皂苷rg1的经皮吸收。皂苷类成分是一种天然的非离子型表面活性剂,因此具备表面活性和增溶作用[5]。在人参皂苷rg1与乌头碱体系中,人参皂苷rg1对乌头碱有较为明显的促渗作用,可能是人参皂苷rg1发挥了其表面活性剂中增溶的作用,使乌头碱在水环境及皮肤中的浓度均比乌头碱单用时有所提高,增加了乌头碱在介质中的有效浓度,改善基质与角质层之间的分配,从而提高了乌头碱的累积透过量。乌头碱对人参皂苷rg1的促进作用,推测可能是因为双酯型乌头碱在角质层中蓄积(tdw＞8 h),与角质层脂质双分子层中的脂类发生作用,增加了角质细胞间脂质双重层流动性,使人参皂苷rg1的渗透性有所提高。表面活性剂对药物的增溶作用与药物分子结构和分子极性有关,对药物增溶作用不同[6-7]。人参皂苷rg1对乌头碱的促进作用较为明显,但对延胡索乙素并没有发挥出明显的促渗作用,可能与人参皂苷rg1与乌头碱的极性相似(logp相近),而与延胡索乙素极性不同(logp相差较大),导致人参皂苷rg1对延胡索乙素的增溶作用相对较弱有关。
延胡索乙素经皮渗透的时间延迟(tdw＝3.6 h)明显低于乌头碱,没有在角质层产生蓄积,对角质层结构影响也比较小,因此对其他药物经皮促渗作用不明显。乌头碱与延胡索乙素之间的结果显示,延胡索乙素降低了乌头碱的透过量,这可能因为小分子量的延胡索乙素更易于扩散,影响了乌头碱的经皮渗透。
三者合用结果显示,3种有效成分的24 h全皮累积透过量均有提高。延胡索乙素与任意单一成分组合时都没有出现被促进的现象,但在三者共存的情况下累积透过量提高了64%,推测可能是因为人参皂苷rg1与乌头碱的联合作用的结果,具体机理还有待进一步研究。
本实验通过对乌头碱、人参皂苷rg1与延胡索乙素不同配对组合经皮渗透研究,初步阐明了3种中药有效成分在经皮渗透中存在相互影响,在3种有效成分共存的体系中,三者的累积透过量出现64%～293%不同程度的提高；3种有效成分合用对经皮吸收会产生协同促进作用,其中乌头碱与人参皂苷rg1之间的经皮协同促渗作用最为明显。这从药物经皮渗透动力学角度诠释了传统外用中药配伍的合理性,也将为现代经皮给药技术在传统外用中药制剂中的应用研究提供借鉴和帮助。
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[6] 钟静芬.表面活性剂在药学中的应用[m].北京：人民卫生出版社,1996. 206.
我选择做一块七元的香皂，而且还可以再里面刻字。
阿姨给了我们一人一块小皂基，让我们把它切碎。切碎后，再把一块块小皂基放入一个小碗中，把小碗放入烤箱，让它们化成肥皂水。切完了透明的皂基，我又切了一块白色的皂基。
现在开始刻字了！阿姨给了我们一张纸，写上自己想要刻的字。又把那块做好了的心形透明皂递到我跟前，让我比着我写的那个字刻上。可是我却刻坏了，阿姨只好再弄一次让我刻。这会儿我可不敢了，再刻坏怎么办？我就让阿姨帮我刻。对了忘记说了，我刻了一个“乔”子。
刻好了我就开始选香味、颜色和亮点了。我选的是熏衣草味、绿色、金银的亮点儿。
现在，就开始等待了。
啊，做好了！我一看，嘻嘻，还挺漂亮的！
材料：蜜蜡60克，橄榄油370克，棕榈油30克，氢氧化钠60克，冷水1量杯（250毫升）。
做法：
1.备好模型容器。
2.将氢氧化钠以冷水溶解放置一旁，等待溶液冷却至50℃。
3.将蜜蜡、橄榄油、棕榈油加热至50℃。
4.将加热好的材料和氢氧化钠溶液混合，搅拌至溶液呈现浓稠状（约10分钟），再倒入模型容器中。
5.将模型容器放置在不易被移动的地方约24小时，或直到溶液凝固。
6.将香皂脱模、切块，放置在阴凉通风处6周即可使用。
这一份配方15分钟就可以完成。适合洗头发，虽然泡沫不像市售洗发精一样多，起泡速度也没有那么快，但对头皮和头发的健康非常好。
二、果香皂
材料：柑橘类水果如柠檬、柳橙1-2颗，若用葡萄柚则约1/2颗，柑橘类精油约10毫升。
做法：（以柠檬为例）
1.用刮皮刀将柠檬皮刮成细丝。
2.将被刮了皮的柠檬切半挤汁。
3.按照基本皂制作方法，当溶液变浓稠时加入柠檬汁搅拌均匀，这时香皂溶液会开始变色，不用担心，是因为柠檬汁的酸度造成的，变成天然的染料，淡淡的橘黄色很是可爱。
4.加入柠檬精油及柠檬皮搅拌均匀。
5.倒入膜型中静置24-48小时。
6.待香皂凝固后，脱膜，放在阴凉通风处1个月即可使用。
新鲜的柠檬汁含有丰富的维他命C，可以调节香皂的PH值，使香皂更温和。果皮除了有温和去角质的功能，也可以美化香皂。
可以用自己最喜欢的柑橘类水果和精油，也可以混合不同的柑橘类水果和精油来制作。
三、蜂蜜麦片皂
材料：皂丝500克，水150毫升，蜂蜜1大匙，燕麦片1大匙（用磨豆机磨成细粒或粉状）。
做法：
1.将水加热后加入皂丝，隔水加热直到皂丝全部溶化成糊状。
2.再加入蜂蜜及燕麦片搅拌均匀，即可装入模型中，等凝固后再切块。
具有滋润及去角质的功效，不要选择即食或快煮的麦片，因其去角质的效果较差。
链接：
制作香皂的步骤
1.切皂基。取出皂基，目测要做的香皂量，在适当处用刀切下去。之后，将切下来的皂基切小，形状随心所欲，可以切丁、切条、切丝等。切小的目的是加速融化，所以切得越细小，融化速度越快。不管切成什么样子，建议每块的大小一致，加热时才不会有部分皂基已经过热，另一部分却还没融化。
2.加热融化皂基。透明皂基大约在45℃以上就会开始融化。通常用隔水加热或微波炉加热的方式使其融化。隔水加热的目的在预防皂基烧焦，若要直接加热，必须把火调得很小，而且随时谨防烧焦。隔水加热时，只要用小火即可，水温也不用太高，如果看到水开始冒泡甚或沸腾，就表示水温太高，要赶快把火调小或暂时关闭。加热时尽量不要搅拌皂液，否则会产生很多不必要的泡泡。如果你用色块或二氧化钛（钛白粉）调色，这时要与皂基同时加热，至于加的量就要看个人的喜好。皂基融化，同时融化透明皂基与白色皂基。透明皂基融化时产生泡泡的情况与皂基厂商、加热是否过久、加热时是否搅拌有关。泡泡并不影响成品品质，只是影响外观或须要多花时间去修饰。水盆里的水变白了是因为掉了一块皂基在水里，皂基在水里融化后，使水变白白的。若将掉入水里的皂基捞起来放回小钢杯，则整个钢杯里的皂基都混到水，会使透明度降低，掉入水里的皂基就不要捡回来了。
3.调色。使用色液调色，色液的浓度很高，所以一次加一滴就够了，将之搅拌均匀，如果觉得颜色不够深，再加一滴，切忌一次挤很多滴，这样颜色容易太深，一旦颜色太深，只能用很多皂基与之重融才能使颜色变淡。
4.调香味。香皂的味道通常是加入香精或精油而产生的。精油比较贵，味道消失得比较快，有些精油加入皂之后味道会改变，不过精油具有疗效。香精比较便宜，味道较持久，但没有疗效。调香味时如果皂液温度还很高，必须等温度降低一点再滴入精油或香精，尤其用精油者，因为精油在高温下挥发很快，所以在皂液温度很高时滴入精油恐怕就浪费了。有些精油或香精加入皂液后会使皂液颜色产生些微的改变，你可以将上个步骤与这个步骤对调，调完香味之后再调颜色。加入香精或精油的量大约为皂液的0.5％-2％，半杯小钢杯的皂液约有100毫升，所以可以加入10-40滴香精或精油（1毫升约为20滴）。滴入香精或精油的量依照种类与个人喜好而异，喜欢浓一点的就加多一点，喜欢淡香的就加少一点，一般来说，洗完澡后，这些香味都不会留在皮肤上。
5.入模。将调好颜色、味道的色液倒入模子，大约倒八九分满，或想要的高度即可，若倒太满则不容易脱模。模子必须事先洗净、干燥。左边这个模子是吃果冻后留下来的，右边这个是布丁盒。倒好皂液后，就可以将这些皂皂摆在旁边放凉，大约1小时后这些皂皂就会凝固，届时脱模后就可以包装或直接使用。若希望这些香皂赶快凝固，可以将它们放在冰箱冷藏或冷冻，大约15-30分钟就可以凝固。
新晋妈妈和准妈妈既要照顾好小宝宝，还要照顾好自己，在给自己和宝宝选择洁肤护肤用品时，除了功效，还要特别注意产品的安全性和环保性，纯天然冷制手工皂完全符合这些要求，是母婴这一庞大而特殊群体的首选洁肤护肤品。
冷制皂VS工业皂
制作方式
冷制皂(cold process)属于手工皂的一种，手工皂的种类有很多，冷制皂，热制皂，透明皂，液体皂。这种制皂方法源于欧洲，那里的先民把油脂与碱(NAoH)混合，不用高温加热，让油脂和碱自然反应，生成富含天然甘油的皂皂。皂化反应通常需要4周以上的时间，这期间PH值会慢慢下降。冷制皂费时费力，只能小批量制作。
工业制皂主要是为了满足大量的市场需求，一般采用热制法，虽然缩短了生产周期，但也大大地破坏了皂本身的质量，只能是一种满足基本要求的低端洁肤产品。
有效成分
冷制皂由于是非高温操作，所以天然有效成分能够得以最大限度保存，而皂化形成的甘油，是最珍贵的成分。所有的冷制皂都会在皂化的过程中自然产生约20％的天然甘油，是皮肤最佳的天然保湿剂，在皮肤上形成一层天然的保护膜。
植物油中有大量不参与皂化的营养物质，这些珍贵的成分会在使用时透过毛孔渗透到皮肤中去，从而达到清洁、保养同时进行的效果。
冷制的皂中还可以添加精油，植物、水果及其他营养物等，是很好的护肤保养品。而采用纯天然材料制成的冷制手工皂又是冷制皂中的上品，可以让母婴安全清洁皮肤的同时，让肌肤享受皂中保留的天然成分。
工业皂在生产过程中，厂家一般都会把皂皂最宝贵的部分一天然甘油提取，作为高价产品出售，剩下的部分就是皂基。
制皂达人提醒：
纯天然冷制手工皂因其采用的是天然材料，决定了它闻起来不会很香，看上去不会很绚丽。妈妈们在选择手工皂时可以简单地通过皂的味道和外观来判断。
选择适合你的手工皂
所有手工皂的基本成分都是油脂和碱，油脂的一部份会参与皂化反应，非皂化物质则作为营养物质存在于成皂中，所以手工皂的很多特性是由制成它的油脂决定的。
每个人的皮肤都有着自己的特殊需求，尤其是准妈妈由于身处特殊时期，更要根据自己的肤质来选择手工皂。油性肌肤：可以选择以山茶油、葡萄籽油、荷荷芭油等作为主要成分的手工皂，这类型油脂质地轻薄且清爽，清洁力突出兼具补水保湿的性能。
干性肌肤：选择含有乳木果油、芒果脂、可可脂为主要成分的手工皂，这类油脂滋润度高，可以强力覆盖肌肤，保护干燥肌肤。
混合型肌肤：荷荷芭油、榛果油有助于自然调整皮肤的状态，适合混合性肤质。
制皂达人提醒：
怀孕期间，身体荷尔蒙因怀孕发生变化，肤质也变得粗糙。受雌激素的影响，脸颊也容易出现浅褐色的斑点，建议使用没有添加精油的母乳皂。
使用手工皂TIPS
由于纯天然冷制手工皂不含两性界面活性剂，所以会刺激眼睛黏膜，使用时请避开眼周。尤其宝宝使用时特别注意。
需要特别注意的是，怀孕期间不要选择添加精油的手工皂。因为有些精油具有“调经”的功能，对于一般女性，可以缓和月经带来的不适，并让经期更顺利，但是如果孕妇使用，就有引发流产的危险。特别适合准妈妈和宝宝使用的母乳皂
项目优势:投资低､回报率高､操作步骤简单､完成时间简短
适合人群:小额创业者
成功案例:北京星尚创皂馆
市场背景
香皂DIY消费者冲着情趣来
“我的时尚我做主”渐渐成为当代年轻一族追求时尚的新口号。随着DIY风潮的滚滚而来，年轻一族越来越注重塑造自己的特色，追求各种独特与创新，使自己时刻走在流行与时尚的前列。为了迎合这种心理，都市中各种各样的特色小店如雨后春笋般地冒了出来。对小型投资者来说，时髦的DIY小店不失为一种好选择，而对香皂的创意无疑又成为时尚中的时尚。
虽然手工香皂的效用和大家日常所买香皂并无二致，但其不仅具有实用性，还有独特的观赏性和趣味性，因此，很适合喜欢自己动手创作的朋友们参与。瞧，由于它顺应时下正流行的DIY潮流，有人就此发现商机，开办起“创皂馆”。
憨态可掬的小动物､香浓美味的巧克力､鲜艳欲滴的玫瑰花……光顾创皂馆的消费者以色彩缤纷的香皂为原料，亲自动手做出形态各异的香皂作品送给亲人､朋友，表达自己的深情厚谊。据说，创皂馆的原材料是使用进口皂机制作的，酸碱度适中，去污护肤，香料和颜料对皮肤无副作用，因此很受一些时尚女人的喜爱。
在创皂馆里制作一块香皂的流程非常简单:首先把透明的皂基(香皂的原始形状)放进微波炉进行融化，待融化成水后，再根据消费者的喜好，倒入相应的模具，最后再把模具放进冰箱速冻室10分钟左右，一块个性化的香皂即大功告成，整体耗时约15-20分钟。由于自制香皂的甘油含量是普通香皂的5倍，因此在正常储存条件下，其保存时间一般为1-2年。
到创皂馆来消费的客人有99%不是为买香皂，而是要寻找自己动手的乐趣。北京星尚创皂馆老板表示，很多顾客第一次来店里都不能理解:花同样的钱，能在超市里购买到很多块香皂，但当他们亲自体验之后，才会明白很多情趣是花钱买不到的。甚至有的顾客花几元钱，就能在这里找到一天的 乐趣，而做出来的产品也是世界上独一无二的。可以说，创皂馆里卖的不只是香皂，而更是一种情趣。
开业条件:开店首选 年轻男女聚集之处
现在创皂馆这一门生意在市场上还算比较新奇，而且投入也不算多，是值得一些投资者考虑的。不过，创业者要先想好当地的人是否接受这些东西，因为手工香皂终归不太实用，反而装饰性更强一点。现在打着DIY噱头的店很多，如果真的想做的话，创业者首先要从心底里喜欢这些东西才行，不然，自己也不喜欢，更何况教别人呢?
据介绍，开设一家创皂馆主要的设备有皂基､模具､香料､颜料､甘油以及微波炉､冰箱､能切出花边的波浪刀､裁纸刀等。一般连锁加盟的创皂馆会承诺给各个加盟商统一配送开店所需物品，如宣传单､会员卡､样品等，并进行技术培训。如此，店家只需装修门店及自行配备制冷设备(冰箱或冰柜)和微波炉即可开店。
创业者在技术方面不用操太大的心，关键是店面的选址。一般来说，创皂馆的店面以20平方米左右为宜，主要有几种地方适合:第一是商业街或者是商场。商业街最好是靠年轻人聚集的地方，比如说有肯德基､麦当劳的地方，这些地方有大量潜在客户。第二是在大学生聚集的地方。学生们有足够多的时间和足够的消费能力，因此选址在大学城是可行的。
经营策略:创意无限 模具花样常换常新
竞争核心是模具――开创皂馆最基本的是皂基质量一定要好，要透明，不能有杂质，不然，最后做出来的香皂就不透明，而竞争力的最核心内容在于模具的花样翻新上。如果说选址可以决定人气，那么模具种类多少则决定生意好坏。模具种类越多，做出来的香皂形状就越丰富，才能满足不同人群的消费需求，吸引更多的顾客。由于这门生意突出的是自己动手创作，客人来这里消费，就是觉得有创意，能做出一个与众不同的香皂。所以，你提供的模板款式一定要多，而且要不停地更新，因为时尚的东西变得特别快。
创意无限花样多――虽然创皂馆也可以直接进行香皂产品的销售或手工培训，DIY始终是该项目的重头戏，经营者应该提供各种DIY的花样。比如有些小学生非常喜欢橡皮大小的小香皂，经营者可以教他们制作糖纸包着的小香皂;玫瑰香皂､巧克力香皂等仿真香皂通常深受女孩子们的青睐。此外，经营者还可以激发消费者充分发挥自己的想象力，做出各种各样的香皂。比如将自己的大头贴镶嵌在香皂上，将自己的生日日期､祝福语或者图案刻在香皂上，或者将自己喜欢的塑料卡通人物镶在香皂上等等。
开发创新美容皂――手工香皂与我们日常用的香皂最大的不同是，通常把DIY的香皂买回家大家都不舍得用，送给朋友或者作为工艺品摆着，这样更新速度就比较慢，把香皂这一快速消费品的优势给抹杀了。经营者可以尝试用一些护肤的营养成分加到香皂里，开发几款美容皂，相信除学生外，也会受到不少年轻白领女性的欢迎。
老人小孩共关注――别以为创皂馆就只能做年轻人的生意，其实还有一块市场也不应该放弃。经营者可以把香皂DIY作为一个课外活动项目，推荐给学校。因为，随着教育的多元化，社会对学生的要求从动脑转化到动手能力，对学生的操作能力要求日益提高。香皂DIY是一种新颖且环保型的手工制作项目，在学校有很大的发展前景。经营者可以在暑期开办针对学生的特训班;针对学龄前儿童，则可推出一些亲子同乐班。由于手工香皂操作简单，儿童很容易做出漂亮的香皂，而且很多大人现在更重视儿童的动手能力。老年人市场的潜力也是巨大的，中国逐步步入老龄化，老年人的生活和娱乐逐渐引起世人的关注，香皂DIY可以让他们在休闲之余体会到更大的乐趣，也可以在制作的同时陶冶情操，充实生活的分分秒秒。因此，经营者可针对老人们追求实用的特性，推出一些专门为老年人设计的香皂，比如夏天可以制作去角质的丝瓜经络皂。
效益分析:投资2.3万，9成毛利，月盈9千
开间创皂馆其实算是小本经营，一般首期资金只要2万至3万元左右。以20平方米的店面计算:租金最好控制在3000元以下，这样风险比较小;简单装修5000元;购买材料费用1万元(含原材料､工具､专用模具､配方等);另外准备5000元流动资金，总共2.3万元(加盟费另计，一般为1万元)。
目前，手工香皂的价格在每块5元至35元之间，以平均每块20元计算，通常一家20平米的店平均每天可销售25块左右，则日营业额为20元×25=500元，月营业额为500元×30=15000元，销售额的90%是毛利，则月利润为15000元×90%=13500元。创皂馆的日常开销除房租外还包括:人力成本每月1000元，水电煤500元，则实际盈利为13500元-3000元-1000元-500元=9000元/每月。
实例作证:星尚创皂馆 每天访客三四十
开在北京某文化广场内的星尚创皂馆，应该算是同行业内经营得比较红火的。走进店里，与众不同的时尚个性氛围与明快和谐的自然芬芳气息就会扑面而来。生动的造型､洁净的装饰､简单明快的陈列，也会是心灵的一次洗礼，不知不觉都市的烦嚣被摈弃了，清新舒畅､无限创意的灵感油然而生。
小店店主原本有一份体面的工作，几年前他开始关注国内外的DIY市场，发现这样的店几乎是开一个赚一个，经过一番思考，他开起了创皂馆，因为这是一种“结合了欣赏价值和实用价值”的DIY方式。让手工爱好者们在这里融注､造型､修饰､入模､出模，经过一系列工序的精心制作，一件件犹如艺术品的透明皂不断诞生，继而吸引了越来越多的顾客光顾，创皂馆的生意也一天比一天红火起来。
据店主介绍，创皂馆的顾客主要是学生。他们自制香皂原因主要有三:一是觉得稀奇､好玩;二是当作礼品送给亲戚朋友;三是放在家里当作香薰物品，净化空气。目前，店里已有几百种香皂模具可供选择，主要有动物､卡通人物､植物､情侣人物和生肖等，每天光顾小店的客人有三四十位之多。现在每月的营业额可以稳定在2万元左右，月利润有1万多元，生意好，碰到过节､周末的时候，更是人山人海。有顾客表示，虽说家里不缺香皂，但大家乐此不疲自己动手，就是因为制作过程有趣好玩，把香皂的实用价值变成了一种创意活动。不论自用或送人，意义都会变得不一样。
手工皂很多人对于这种用品并不是很清楚，其实就是自己DIY动手做香皂。至少需要油脂、NaOH、水等3种材料。用来做手工香皂的原料是由甘油、植物油等原料制成，对皮肤的养护作用尤为突出，既可用作洗面，卸妆，又可用作沐浴用。里面没有什么化学成分，洗面里那些活化剂、稳定剂什么的都会残留在脸上，不过洗完脸是一定要擦东西的，毕竟是洁肤品，手工皂一定要买冷制皂，透明皂是假的，皂基做的，是干性肌肤的话建议买橄榄皂或者马赛皂，比较滋润。
（来源：文章屋网 http://www.wzu.com）
[关键词]酸枣仁皂苷A；人工抗原；高碘酸钠法；单克隆抗体；基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法
[Abstract]Immunogenic antigen （jujuboside ABSA） and coating antigen （jujuboside AOVA） of jujuboside A were synthesized by sodium periodate oxidation method for the first time Jujuboside A artificial antigen was confirmed by matrixassisted laser desorption ionization/timeofflight mass spectrometry （MALDITOFMS） The titer and specificity of the antibody in serum of immunized mice were detected by enzymelinked immunosorbent assay （ELISA） The corrected relation curve of inhibition rate showed that the antibody against Jujuboside A obtained from immunized mice could bind to jujuboside A and the titer was up to 1∶4 000 The jujuboside A artificial antigen was synthesized， which can be used further to preparation of monoclonal antibody and the pharmacokinetics study of jujuboside A in laboratory animals
[Key words]Jujuboside A； artificial antigen； sodium periodate oxidation method； monoclonal antibody； MALDITOFMS
doi：10.4268/cjcmm20161020
酸枣仁为鼠李科Rhamnaceae植物酸枣Ziziphus jujuba Millvarspinosa的干燥成熟种子，具有补肝、宁心、敛汗、生津之功效[1]。酸枣仁皂苷A（jujuboside A）是酸枣仁的主要药效成分之一，有镇静催眠、抗惊厥、营养神经、降血脂等药理作用，近年来在治疗失眠、缺血性中风等神经系统疾病及心血管疾病方面得到越来越多的关注[25]。
为了研究酸枣仁皂苷A在生物体内的药物代谢过程、药物作用靶点以及药效发挥途径，需要建立一种能够快速、灵敏、定性、定量进行药物检测的生物学方法。而现有的检测酸枣仁皂苷A的方法主要为高效液相色谱蒸发光散射检测法（HPLCELSD）[6]和液相色谱串联质谱法（LCMS/MS）[7]等，这些方法均需经过复杂的预处理，灵敏度较低，特别在进行大样本药物代谢检测时，具有一定的局限性。基于中药活性小分子化合物单克隆抗体技术的中药免疫分析法，具有前处理简单、灵敏度高、特异性强、设备仪器需求少、适合高通量筛选等优势[8]，可以为中药有效成分在体内作用过程研究提供有力的支撑。
建立免疫分析方法的关键是制备特异性的单克隆抗体[9]。为制备酸枣仁皂苷A单克隆抗体，本研究首先合成了酸枣仁皂苷A的人工抗原。
1材料
11动物
SPF级雄性BALB/c小鼠5只，6～8周龄，维通利华实验动物中心提供，动物许可证SCXK（京）20120001，实验动物质量合格证号（No11400700043339）。
12试剂
酸枣仁皂苷A购自上海诗丹德生物技术有限公司，纯度≥95 %（HPLC）；牛血清白蛋白（BSA，批号29180102100），购自美国Roche公司；卵白蛋白（OVA，批号115K0730），购自北京欣经科生物技术有限公司；弗式完全佐剂（F5881，批号SL11432）、弗式不完全佐剂（F5506，批号SL12282），Sigma公司；酶标二抗（HRP标记羊抗鼠IgG，批号RPN4201），GeneScript公司；磷酸盐缓冲液（PBS，pH 74）；碳酸盐缓冲液（CBS，pH 96，005 mmol・L-1）；洗涤缓冲液（PBST，pH 74）；终止液（2 mmol・L-1H2SO4）；底物缓冲液（pH 50 磷酸柠檬酸）。
13仪器
96 孔酶标板（Corning）；酶标仪（Tecan Safire2全波长多功能酶标仪）；841A 磁力搅拌器（上海司乐仪器有限公司）； MALDITOFMS（Shimadzu AximaCFR Plus）。
2方法
21酸枣仁皂苷A人工抗原的合成方法
酸枣仁皂苷A为皂苷类化合物，分子结构中含有葡萄糖基团，采用高碘酸钠法[1011]，将酸枣仁皂苷A分别与BSA偶联制备免疫抗原，与OVA偶联制备包被抗原。具体原理见图1。
准确称取酸枣仁皂苷A 50 mg，充分溶解于20 mL CBS缓冲液中，准确称取NaIO410 mg，充分溶解于50 μL CBS缓冲液中，将以上2种溶液混合后，放入棕瓶密封，外层采用锡箔纸包裹，在避光室温条件下搅拌反应2 h，得到酸枣仁皂苷A氧化产物，称为A液。准确称取BSA/OVA10 mg充分溶于10 mLCBS缓冲液中，称为B液。将A液逐滴匀速加入B液中，密封避光，在室温下搅拌过夜。待上述反应完成后，将反应液转移至用CBS缓冲液预处理的透析袋中，搅拌下透析24 h，后改用双蒸水透析48 h，中间多次换液。将透析后的交联产物分装，于-20 ℃保存待测。
22酸枣仁皂苷A人工抗原的MALDITOFMS鉴定
仪器工作条件：质谱仪在线性模式下进行分析，正离子模式，激光能量125，检测范围m/z 2万～9万 Da。
操作步骤：精确吸取乙腈333 μL到015 %三氟醋酸666 μL中，加入10 mg芥子酸，混合液超声15 min后溶解，制得基质辅助溶液备用[12]。取酸枣仁皂苷A人工抗原适量溶解在80 mol・L-1的尿素溶液中，然后将溶液稀释至浓度为1～10 pmol・L-1；另制备50 g・L-1的BSA水溶液。各取酸枣仁皂苷A人工抗原、BSA和基质辅助溶液10 μL，充分混匀，吸取混合溶液10 μL滴加在镀金样品板上，室温下风干后，送入质谱仪分析。
23动物免疫
选取6～8周龄雄性BALB/c小鼠5只，以酸枣仁皂苷ABSA为免疫抗原进行背部皮下多点注射免疫，免疫剂量为100 μg/只。初次免疫时，采用注射器推拉法将等量弗氏完全佐剂与免疫抗原充分乳化混匀后注射，以后每2周改用等量弗氏不完全佐剂乳化免疫抗原，进行加强免疫1次，方法与剂量不变。从第4次加强免疫起，每次免疫后1周断尾取末端血适量， 3 500 r・min-1离心10 min分离血清。
24间接ELISA方法检测血清中的酸枣仁皂苷A抗体效价
以酸枣仁皂苷AOVA为包被抗原，用CBS稀释至1∶4 000，100 μL/孔加入至96孔板中，37 ℃孵育1 h。以PBST洗板，每次5 min，洗后拍干，共3次。以10 g・L-1明胶为封闭液，200 μL/孔，37 ℃孵育1 h，洗板。血清抗体的初始稀释倍数为1 000倍，以2倍为稀释梯度逐级稀释为3个质量浓度，以未进行免疫的空白小鼠血清作为阴性对照。37 ℃孵育1 h后如前法洗板，再加入HRP羊抗鼠二抗（1∶10 000）100 μL/孔，37 ℃反应05 h，洗板。加入TMB工作液100 μL/孔，37 ℃孵育显色15 min后，加入2 mmol・L-1硫酸50 μL/孔终止反应，测定450 nm处吸光度（A450）。以免疫血清（P）与阴性血清（N）A450比值大于21时定义为阳性，血清抗体的效价以血清抗体为阳性的最大稀释倍数的倒数表示。
25间接竞争ELISA法检测血清中抗酸枣仁皂苷A抗体特异性
以酸枣仁皂苷AOVA作为包被抗原，用CBS缓冲液稀释至1∶4 000，以10 g・L-1明胶为封闭液，用PBS缓冲液稀释血清至1∶4 000，酸枣仁皂苷A水溶液的初始物质浓度为1万 μg・L-1，以10倍为稀释梯度逐级稀释至001 μg・L-1，按常规间接竞争ELISA方法操作，测定吸光度A450。计算酸枣仁皂苷A对血清抗体的半数抑制质量浓度（IC50）、间接接竞争抑制曲线的线性方程和R2。根据酶标仪读取A450计算抑制率，其中空白对照组的A450为A0，加入不同浓度酸枣仁皂苷A的A450为A。
3结果
31MALDITOFMS鉴定酸枣仁皂苷A人工抗原
由MALDITOFMS检测图谱见图2，3，可知酸枣仁皂苷A人工抗原的相对分子质量为71 4016，BSA的相对分子质量为66 4473，表明酸枣仁皂苷A人工抗原偶联成功，根据偶联比的计算公式（酸枣仁皂苷A人工抗原相对分子质量-BSA相对分子质量）/酸枣仁皂苷A相对分子质量，即（71 4016-66 4473）/1 20735=410，偶联比数值经四舍五入为4个，见图2，3。
32动物免疫结果
321抗体效价检测间接ELISA法检测结果见表1。经过多次免疫，酸枣仁皂苷A对小鼠的血清抗体均产生竞争抑制作用，以P/N≥21判定为阳性，可见第1，2，4号小鼠的血清酸枣仁皂苷A抗体效价达到1∶4 000，表明已产生良好的免疫效果。为进一步制备酸枣仁皂苷A的单克隆抗体，本实验选取灵敏度更高的4号小鼠的血清进行特异性检测。
322抗体特异性检测间接竞争ELISA法检测4号小鼠血清抗体特异性。以酸枣仁皂苷A标准品浓度的对数值为X，检测结果A值为Y，绘制竞争抑制曲线，得到方程式Y=-0041 7X+0760 3，R2 =0992 3。小鼠血清抗体IC50为0001 mg・L-1，表明本实验成功制备了具有免疫原性的酸枣仁皂苷A人工抗原。
4讨论
酸枣仁皂苷A是小分子皂苷类化合物，仅具有反应原性而不具有免疫原性，需要与大分子化合物进行偶联，形成结合物后才能成为完全抗原。由于酸枣仁皂苷A分子结构中含有葡萄糖基团，本实验选用高碘酸钠法进行人工抗原的合成。该法条件要求简单，操作方便，是合成含糖基的中药活性成分人工抗原的常用方法[13]。
本实验进行ELISA检测时，需要采用包被抗原对免疫抗原所产生的抗体进行特异性吸附，为了保证包被抗原与免疫抗原具有相同的抗原决定簇，本研究在人工抗原的合成过程中，均使用同一批酸枣仁皂苷A与NaIO4反应所得的氧化产物，分别与BSA和OVA偶联，制备出酸枣仁皂苷ABSA和酸枣仁皂苷AOVA，从源头上避免了部分影响抗体特异性的因素。