反相HPLC法测定小儿退热口服液中栀子苷的含量

摘要：目的研究用HPLC法测定小儿退热口服液中栀子苷的含量。方法采用XTerra C18柱，以乙腈-水（12:88）为流动相，检测波长238 nm，流速1.0 mL・min-1。结果栀子苷在63.12 ~631.2 ng范围内线性关系良好，r=0.999 9，平均加样回收率为98.7%。结论该方法操作简便可靠，结果准确、灵敏度高，重现性好，可作为控制该产品质量的方法。

关键词：小儿退热口服液； 栀子苷；高效液相色谱法

中图分类号：R917文献标识码：A文章编号：1672-979X(2007)11-0050-02

Determination of Geniposide in Xiaoer Tuire Oral Liquid by RP-HPLC

WANG Xia1, HU Bin-Xiang2

（1. Loudi Institute for Drug Control, Loudi 417000, China；2. The Central Hospital, Loudi 417000, China）

Abstract：Objective To establish a HPLC method for the determination of geniposide in Xiaoer Tuire Oral Liquid. Methods A XTerraC18 column was used with the mobile phase containing acetonitrile and water (12:88) at the flow rate of 1.0 mL・min-1. The detection wavelength was 238 nm. Results The linear range of geniposide was 63.12 ng～631.2 ng with r=0.999 9. The average sample recovery was 98.7 %. Conclusion This method has good repeatability, flexibility and high sensitivity, so it can be used for the quality control of Xiaoer Tuire Oral Liquid.

Key words：Xiaoer Tuire Oral Liquid; geniposide; HPLC

小儿退热口服液是由大青叶、黄芩、栀子、连翘、金银花、板蓝根、柴胡等组成的中成药，具有疏风解表、解毒利咽之功效。临床上用于治疗小儿风热感冒， 发热恶风，头痛目赤，咽喉肿痛。栀子为方中臣药，栀子苷是其有效成分，参考有关文献[1-5]，采用反相HPLC法测定方中栀子苷的含量，为进一步提高、完善其质量标准、确保药品质量提供了依据。

1仪器与试药

美国Waters高效液相色谱仪（1525二元泵，2487双通道检测器，717自动进样器，Empower色谱工作站）；SG3300HP超声波清洗器（上海冠特超声仪器有限公司）；AG135电子分析天平（Mettler Toledo）。

栀子苷对照品（批号：110749-200512，购自中国药品生物制品检定所），小儿退热口服液（批号：20040909，20050703，20050907，湖南回春堂药业有限公司）；甲醇（色谱纯），其它试剂均为分析纯，水为分子超纯化Ⅰ级水。

2方法与结果

2.1实验条件

色谱柱：XTerra C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相：乙腈-水（12:88）；流速：1.0 mL・min-1；检测波长：238 nm；温度：28 ℃；进样量：10μL，在此条件下，栀子苷与邻峰基线分离，分离度大于4.6，理论板数按栀子苷峰计不低于6 000。取除栀子外的其它几味药，同法制成缺栀子的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法，制成阴性样品溶液，依法测定；阴性样品液无干扰。色谱图见图1。

2.2对照品溶液的制备

精密称取经五氧化二磷减压干燥至恒重的栀子苷对照品7.89 mg置入50 mL量瓶，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取此溶液5 mL置入25 mL量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3供试品溶液的制备

精密量取小儿退热口服液2 mL，置入50 mL量瓶，加甲醇40 mL，超声处理（功率160 W，频率59 kHz）15 min，放冷至室温，再加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，即得。

A：对照品 B：样品 C：阴性样品

2.4线性关系的考察

精密吸取上述对照品溶液2.0，4.0，8.0，10.0，15.0，20.0μL，分别注入液相色谱仪，测定峰面积。以进样量为横坐标、峰面积为纵坐标进行回归分析，回归方程为A=1 804C－5 567（A为峰面积，C为进样量），相关系数r=0.999 9，结果表明，栀子苷在63.12～631.2 ng范围内呈良好的线性关系。

2.5精密度试验

取对照品溶液在上述色谱条件下，每次进样10 μL，重复进样6次，栀子苷峰面积的RSD值为1.3 %。

2.6重复性试验

取批号20050907的样品，制备6份供试品溶液，依法测定含量，RSD=1.6 %，结果表明该方法的重复性好。

2.7稳定性试验

取批号20050907的供试品溶液，分别于0，3，8，15，20 h分别进样测定，栀子苷峰面积的RSD= 1.7%，结果表明供试品溶液在20 h内稳定。

2.8回收率试验

取已知含量的样品（批号: 20050907，含量：0.753 mg・mL-1），分别精密量取1 mL置入50 mL量瓶，共6份，再分别精密加入栀子苷对照品溶液（0.078 2 mg・mL-1）10 mL，同上法制备并测定含量，结果见表1。

2.9样品的测定

取供试品溶液分别注入高效液相色谱仪，记录峰面积，按外标法计算样品中栀子苷的含量，测定3批样品，结果见表2。

3讨论

分别考察了甲醇-水、乙腈-水的不同配比，经反复实验，乙腈-水（12:88）时，出峰时间适当、峰形好，且栀子苷与邻峰基线分离好，故选定该色谱条件。

经紫外光谱扫描，栀子苷在238 nm处有最大吸收，为保证检测的灵敏度，故选择238 nm为检测波长。

分别考察了超声10，15，20，30 min等多种方案，结果显示超声15 min栀子苷提取完全，且其它成分对测定栀子苷无干扰，故选定超声15 min。

分别以甲醇、50%甲醇、50%乙醇作为提取溶剂，结果表明，甲醇对栀子苷提取效率高，同时可减少其它杂质成分的溶出，故以甲醇作为提取溶媒。

该法操作简便，结果准确，灵敏度高，重现性好，可作为控制该产品质量的方法。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2005年版，一部 [S]. 北京：化学工业出版社，2005：173.

[2]杨慈海，谭忠军，赵海鹰，等. HPLC法测定喜生粒中栀子苷的含量[J]. 中国药师，2005，8（8）：649-650.

[3]陈红英，蒋干，范耀. 八正合剂中栀子苷的含量测定[J]. 中国药师，2006，9（1）：17-18.

[4]李炜，王斌，王海亮，等. HPLC法测定安坤胶囊中栀子苷的含量[J]. 中成药，2006，28（7）：1078-1079.

[5]严国俊，沈爱琴. RP-HPLC测定溃疡清含片中栀子苷的含量[J]. 中成药，2006，28（8）：1233-1234.

注：“本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。”