Survivin及P16基因在非小细胞肺癌中的表达及相关性

摘 要 目的：探讨Survivin基因在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其与P16蛋白表达的相互关系。方法：应用免疫组织化学法检测120例非小细胞肺癌组织及20例肺良性病变组织中survivin、P16蛋白的表达情况。结果：Survivin蛋白在61.7%的NSCLC组织中有表达，在肺良性病变组织中不表达，且survivin的表达与肺癌患者的TNM分期有关；P16基因在肺良性病变组织中不表达，其阳性表达率在鳞癌中为17.65%，在腺癌中为53.85%，差异具有显著性（P＜0.05）。结论：Survivin基因在非小细胞肺癌中表达上调，提示其对NSCLC的发生发展起重要作用，提示可作为判断病情及预后的指标。Survivin基因与抑癌基因P16的蛋白表达呈正相关，二者可能在肺癌中起协同作用。

关键词 非小细胞肺癌 Survivin基因 P16基因 免疫组织化学

肺癌是目前在城市对人类健康和生命造成威胁最大的恶性肿瘤，寻找一种新的诊断方法来提高患者的生存率显得尤为重要。癌基因的激活和抑癌基因的失活从而导致肺癌细胞的增殖异常和凋亡障碍是肺癌发生发展的关键。Survivin基因是凋亡抑制蛋白（IAP）家族中的一员，其组织分布具有明显的细胞选择性。本研究采取免疫组织化学法检测120例非小细胞肺癌组织中Survivin、P16蛋白表达，并研究二者之间的相互关系。

资料与方法

一般资料：选择经手术切除和病理证实的非小细胞肺癌患者120例，年龄43～69岁。其中鳞癌68例，腺癌52例。病理分期采用1997年国际抗癌联盟TNM分期标准，Ⅰ期42例，Ⅱ期36例，Ⅲ期42例。另选肺良性病变患者20例作为对照组，年龄22～72岁，其中肺结核7例，支气管扩张9例，肺炎性假瘤4例。取以上患者手术切除的新鲜病变组织标本用10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，制成厚4μm的切片，用链霉素抗生物素过氧化酶免疫组化法（SP法）对标本进行Survivin蛋白、P16蛋白免疫组化和HE染色。

免疫组化染色：实验步骤严格按试剂盒说明书进行，用已知乳腺癌组织做阳性对照，用磷酸盐缓冲液做阴性对照。

结果判定：Survivin蛋白阳性反应为淡黄至棕黄色颗粒，定位于胞浆；P16蛋白阳性反应为棕色颗粒，定位于胞浆。Survivin蛋白阳性细胞的记数按sinicrop的标准做组化记分：HN×I.H≤1为阴性，H＞1为阳性。阳性细胞数百分率分5个等级：＜5.0%，5.0%～25.0%，25.0%～50.0%，50.0%～75.0%，＞75.0%。

统计学方法：数据用阳性率（%）表示，采用X2检验及spearman等级相关方法检验显著性及相关性。

结 果

Survivin蛋白在肺癌和肺良性病变组织中的表达：肺癌组织中的Survivin蛋白阳性表达率为61.7%，而在肺良性病变组织中未见阳性染色，两组相比较差异有显著性（P＜0.05）。结果见表1。

Survivin蛋白表达与肺癌病理特征的关系：Survivin蛋白在Ⅲ期肺癌中阳性表达率为71.4%，显著高于Ⅰ～Ⅱ期肺癌的43.6%（P＜0.05）；与肺癌组织细胞类型无明显关系。结果见表2。

P16蛋白的表达：P16蛋白阳性表达率在鳞癌中为17.65%，在腺癌中为53.85%，两者比较差异有显著性（P＜0.05）；P16蛋白表达在Ⅰ期、Ⅱ期及Ⅲ期肺癌中分别为57.14%、27.78%、14.29%，差异有显著性（P＜0.05）。结果见表3。

肺癌组织中Survivin蛋白与P16蛋白表达的关系：在Survivin蛋白阳性表达的74例标本中，P16蛋白阳性表达56例，其余18例阴性表达；在Survivin蛋白阴性表达的46例标本中，P16蛋白阳性表达10例，阴性表达36例，二者呈正相关（P＜0.05）。

讨 论

P16基因又称为多瘤抑制因子基因或CDKN2基因，其编码产物P16蛋白是CDK4或CDK6的抑制因子，通过与CDK4-cyclinD复合物结合，阻碍细胞从G1期到S期的过渡，抑制细胞生长，对细胞周期的运转进行负调控。P16基因的缺失和突变可促使细胞无限制地进入G1/S期并加快分裂，最终导致细胞癌变。Survivin基因是迄今发现的最强的凋亡抑制基因，通过与CDK4形成CDK4／Survivin复合体，导致P21从P21／CDK4复合体中释放出来并作用于线粒体上的procaspase-3形成复合物，抑制procaspase-3激活成活化的caspase-3，从而阻止caspase-3依赖的细胞凋亡途径；同时P21的解离使CDK4活化，使细胞通过凋亡检查点进入S期，继而带有DNA受损的细胞可以继续分裂，从而促进DNA突变的积累［1～2］。P16基因的突变使Survivin蛋白更容易发挥这种作用。

凋亡在正常情况下可以消灭DNA受损的细胞，凋亡调控失调可以异常延长细胞的生存时间，促进有转化作用的基因突变的积累，从而参与肿瘤的发生［3］。本实验研究发现，肺癌组织的Survivin蛋白阳性表达率为61.7%，但在肺良性病变组织中未见阳性染色。Survivin蛋白在肺癌组织中表达上调，提示该基因可能通过抑制肺癌细胞凋亡而对NSCLC的发生发展起重要作用，有望成为肺癌基因治疗的新靶点；Survivin蛋白在Ⅲ期肺癌中阳性表达率显著高于Ⅰ～Ⅱ期肺癌，可以作为判断病情和评价预后的指标；Survivin蛋白阳性表达病例中，P16蛋白阳性表达率较Survivin蛋白阴性表达病例高，这一结果提示Survivin、P16基因在NSCLC的发生发展中可能起协同作用。

参考文献

1 Suzuki A,Ito T,Kawano H,et al.Survivin in itiates procasepase3/P21 complex formation as a result of interaction with CDK4 to resist Fas-mediated cell death［J］.Oncogene,2000,19（10）:1346-1353.

2 Uzuki A,Hayashida M,Ito T,et al.Survivin in itiates cell cycle entry by the competitive interaction with CDK4/p16 and CDK2/cyclinE complex activation［J］.Oncogene,2000,19（29）:3225.

3 Kukhta VK,Marozkina NK,Sokolchik IG,et al.Molecular mechanisms of apoptosis［J］.Ukr Biokhin Zh,2003,75（6）:5-9.