HIF-1α和VEGF-C在分化型甲状腺癌中的表达及相关性

(中山大学附属第五医院，甲状腺、乳腺外科 广东 珠海 519000)

(中山大学附属第五医院，急诊科 广东 珠海 519000)

(中山大学附属第五医院，病理科 广东 珠海 519000)

(中山大学附属第五医院，病理科 广东 珠海 519000)

【摘要】 目的 :探讨缺氧诱导因子-1α (hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)和血管内皮生长因子C(vascular endothelium growth factor-C, VEGF-C)在分化型甲状腺癌组织中的表达情况及相关性。 方法 应用免疫组织化学方法检测分化型甲状腺癌组织HIF-1α和VEGF-C表达的情况，分析二者在分化型甲状腺癌组织表达的相关性。 结果 分化型甲状腺癌组织中HIF-1α和VEGF-C的表达比结节性甲状腺肿组织的表达差异明显，显著升高(χ2=20.355和22.057，P均

【关键词】 分化型甲状腺癌；缺氧诱导因子-1α；血管内皮生长因子C

【中国分类号】 R735

【 文献标识码】 A【文章编号】1044-5511(2011)09-0014-02

【Abstract】 Objective To investigate the Expression and correlation of HIF-1α and VEGF-C in differentiated thyroid carcinoma. Methods HIF-1α and VEGF-C in 100 specimens of differentiated thyroid carcinoma were detected by immunohistochemistry. The correlation of HIF-1α expression to VEGF-C expression was analyzed by Spearman’s rank correlation. Results HIF-1α and VEGF-C were dramatically higher in the differentiated thyroid carcinoma than that in the nodular goiter tissues(χ2=20.355 and 22.057，P all

【Key words】 Differentiated thyroid carcinoma；Hypoxia inducible factor-1α；Vascular endothelium growth factor-C

近年来的大量研究证实，HIF-1α在肿瘤的生长、血管生成、转移及凋亡等方面起着十分重要的作用[1]。临床病理研究也证实多种人类原发恶性肿瘤的VEGF-C表达水平与区域淋巴结转移显著相关[2]。本研究通过分析分化型甲状腺癌组织中HIF-1α和VEGF-C表达的相关性，明确HIF-1α参与肿瘤淋巴结的转移，从淋巴管生成的角度探讨分化型甲状腺癌淋巴道转移机制。

1 资料和方法

1.1一般资料 选取中山大学附属第五医院甲状腺外科2008年1月至2010年1月收治，经病理组织学确诊且术后标本蜡块保存完好的分化型甲状腺癌病理标本100例。随机选取同期结节性甲状腺肿标本25例做为对照组。患者年龄为19-72岁，中位年龄48.5岁；病理类型：甲状腺状癌67例，甲状腺滤泡状癌33例。所有病例术前均未接受过新辅助化疗、内分泌治疗及放射治疗，并除外合并其他恶性肿瘤病例。

1.2主要试剂 鼠抗人HIF-1α单克隆抗体、兔抗人VEGF-C多克隆抗体、PV9000检测试剂盒、DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术公司。

1.3方法 分化型甲状腺癌组织中HIF-1α和VEGF-C表达的测定(Envision法)。所有标本经40g/L甲醛溶液固定，常规脱水包埋，Envision免疫组化二步法染色。HIF-1α和VEGF-C阳性照片由中杉金桥公司提供，以PBS代替第一抗体作阴性对照。

1.4结果判断标准 HIF-1α蛋白以细胞核内有棕黄色颗粒为阳性，仅少数胞浆着色的细胞记为阴性，VEGF-C蛋白以细胞膜或细胞质黄色或棕黄色着色为阳性。首先按阳性细胞百分率记分：≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，≥76%为4分。其次按着色强度分为4个等级，无着色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分，最后将两者积分乘积为0表示阴性( - )，1为阳性，其中1～2 表示弱阳性( + )，3～4表示阳性( + + )，≥5为强阳性( + + + )。

1.5统计学处理 使用SPSS12.0统计软件进行数据分析。计数资料采用χ2检验；HIF-1α与VEGF-C表达的相互关系采用Spearman等级相关分析；检测标准均取p＜0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1分化型甲状腺癌组织中HIF-1α和VEGF-C的表达 分化型甲状腺癌和结节性甲状腺肿组织中HIF-1α和VEGF-C的阳性率分别是69.0%、81.0%和24.0%、28.0%，分化型甲状腺癌中HIF-1α和VEGF-C的表达较结节性甲状腺肿明显增多(χ2=20.355和22.057，P均

2.2分化型甲状腺癌组织中HIF-1α和VEGF-C的表达的相关性分析 100例分化型甲状腺癌组织中HIF-1α和VEGF-C阳性共表达的有60例，阴性共表达的有25例。经Spearman等级相关性分析结果显示，分化型甲状腺癌组织中HIF-1α和VEGF-C的表达呈正相关(r＝0.616，P＜0.05)。

表1 分化型甲状腺癌和结节性甲状腺肿组织中HIF-1α和VEGF-C的表达n(%)

3 讨论

HIF-1是在缺氧环境下广泛存在于哺乳动物和人体内的一种转录因子。HIF-1是由α和β两个亚基组成的异源二聚体转录激活因子。HIF-1α的靶基因涉及肿瘤细胞能量代谢、细胞凋亡、血管生成、肿瘤增殖和转移以及放化疗耐受等。HIF-1α具有较好的生物学和临床价值，其过度表达与上调VEGF、刺激血管生成和不良预后有关。研究证实，HIF-1α在肾细胞癌组织中呈高表达，其与VEGF有相关性，有望成为判断肾细胞癌转移和预后等生物学行为的重要参考指标。HIF-1α在大肠癌的浸润和转移中起重要作用，HIF-1α高表达的肿瘤组织具有较强的浸润与转移能力，因此HIF-1α可以作为临床监测大肠癌浸润、转移及预后的一个有价值的指标[3]。

肿瘤淋巴管转移的机制目前仍不十分清楚，其中一个重要的问题就是肿瘤组织中是否除了新生血管外还存在新生淋巴管，后者是否同新生血管一样，也为肿瘤提供了转移通道，虽然淋巴管对肿瘤转移的作用非常明显，但由于长期缺乏适当的淋巴内皮特异性标记物和对淋巴管生成因子的认识，使得我们对肿瘤淋巴管生成的研究相对滞后于血管生成。VEGF最早于1983年由Senger[4]等从Line-10荷瘤豚鼠的癌性腹水和瘤细胞培养液中提纯出某种能增强微血管通透性的物质。VEGF家族的不同成员作为内皮细胞重要的调节子，控制着血管生成、淋巴管生成、血管通透性以及内皮细胞的存活，到目前为止，哺乳动物细胞VEGF家族族成员含有VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D和VEGF-E等。近年研究表明VEGF-C表达与恶性肿瘤淋巴管生成和区域淋巴结转移之间的关系密切[2]。

我们通过免疫组织化学方法对分化型甲状腺癌组织中HIF-1α和VEGF-C表达情况的研究，分析HIF-1α和VEGF-C表达的相关性，明确HIF-1α参与肿瘤淋巴结的转移，从淋巴管生成的角度探讨分化型甲状腺癌淋巴道转移机制，完善和补充了肿瘤浸润转移的理论，为寻求抗肿瘤治疗的可能途径提供实验依据和新思路。我们的结果表明HIF-1α和VEGF-C在分化型甲状腺癌组织中高表达，HIF-1α和VEGF-C在分化型甲状腺癌组织中的表达具有正相关性。说明了分化型甲状腺癌组织中HIF-1α促进了VEGF-C的高表达，提示HIF-1α参与了分化型甲状腺癌淋巴管的形成以及肿瘤细胞的淋巴转移，其具体机制尚待研究。

参考文献

[1] 王湛，黄壮士，苏彦河，等. HIF-1α、Caspase-3及Survivin在胸腺瘤中的表达及意义.中华临床医师杂志（电子版），2009，3(5):13-16.

[2] Dadras SS, Paul T, Bertoneini J, etal. Tumor lymPhangiogenesis: A novel Prognostic indicator for cutaneous melanoma metastasis and survival. Am J Pathol, 2003, 162(6):1951-1960.

[3] Hao J, Song X, Song B, et al. Effects of lentivims-mediated HIF-1 alpha knockdown on hypoxia-elated cisplatin resistance and their dependence on p53 status in fibrosarcoma cells. Cancer Gene Ther, 2008, I5(7):449.

[4] Senger DR, Galli SJ, Dvorak AM, et al. Tumor cells secrete a vascularpermeability factor that promotes accumulation of ascites fluid. Science，1983; 219(4587):983-985.