临床检验ABO血型鉴定的质量控制方法

【摘要】目的：总结探讨血型鉴定的影响因素。方法：对2013年8月至2014年5月期间收集的418份血液标本采用玻片法和试管法进行血型鉴定。结果：玻片法和试管法存在一定结果不符，玻片法准确率低于试管法。结论：血型鉴定存在一定的影响因素，血型鉴定时，需要综合考虑。

【关键词】ABO血型，血型鉴定，玻片法，试管法

血型是人类血液以血型抗原为表现形式的遗传性状，ABO血型系统和Rh血型系统是红细胞的两大血型抗原抗体系统，在临床输血和血液遗传学研究上有重要意义。血型鉴定（blood typing）是临床输血的首要问题，正确的血型鉴定是保证输血安全的前提条件。临床常用的血型鉴定方法有盐水凝集法和凝胶微柱法。盐水凝集法因简单易行在临床上广泛应用，其又分为玻片法和试管法，结果在实际操作中会受到诸多因素的影响。现通过对418份血液标本的玻片法和试管法的血型鉴定结果进行统计分析，探讨ABO血型鉴定中的影响因素。

1 资料和方法对象：418份血液标本，每份标本同时用玻片法和试管法两种方法进行ABO血型鉴定。

标本采集：抽取EDTA抗凝血，在2小时内完成ABO血型鉴定操作。

ABO血型鉴定方法：① 玻片法：正定型法：将抗A试剂、抗B试剂各1滴分别滴于玻片上A、B处。分别取等体积待检血样（5%红细胞悬液或全血）于抗A试剂和抗B试剂。用不同的竹签将分型试剂与待检血样调匀，同时不停的摇动玻片（或瓷盘）并观察血型凝集（或溶血）反应，也可用低倍镜观察结果。反定型法：另取洁净推片1张，标明A细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴，方法同上。②试管法：正定型法：取洁净小试管（内径10mm×60mm）2支，分别标上抗A、B字样，分别加入抗A、抗B标准血清各1滴于相应标记的试管;然后分别加入被检者5%红细胞生理盐水悬液l滴于各试管充分混匀;以1000转/分的速度离心1分钟判定结果。将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。反定型法：首先将待检血离心（2500r/min，3min）分离血清;取小试管3支，分别标记A、B、O，各管加被检者血清1滴，然后按标记分别加入5% 的A、B、O型标准红细胞生理盐水1滴，混匀;以1000r/m离心lmin后取出试管，轻摇管底，观察凝集。

结果判断：凝集判断标准红细胞均匀分布，无凝集颗粒，显微镜下红细胞分散存在，无凝集靠拢现象为阴性，红细胞出现凝集为阳性。

2 结果

玻片法结果A型71例，B型73例，AB型28例，O型246例。A型68例，B型78例，AB型28例，O型244例。玻片法和试管法的血型鉴定结果可见不论是玻片法还是试管法，418份血液标本的血型分布是一致的，即O型最多，之后依次为B、A、AB，即O>B>A>AB。玻片法和试管法的鉴定结果显示AB型人数相同，而A型、B型和O型人数不完全一致，存在一定的差异。

3 讨论

3.1 医务人员的问题

临床医生在填写输血申请时，没有做血型检测，单凭印象或听信患者的自诉血型而造成血型错误;临床护士在抽取血标本时，未校对患者的姓名、床号，仅凭印象;检验科人员没有对报告核对正确，造成血型鉴定错误。

3.2 被检红细胞

①血型测定的错误血型：检测时，因患者红细胞悬液浓度过低，又只用肉眼观察结果，使之在血型抗原较弱的情况下，微弱、细小的凝集未看到，而造成定型报告错误。② 标本不新鲜，严防污染。细菌污染的标本，红细胞上T抗原被激活，与标准血清中的抗T抗体结合，出现全凝集现象，干扰血型鉴定。当疑有血浆成分干扰血型鉴定时，可用生理盐水反复洗涤红细胞以除去干扰。③ 冷凝集素属于冷反应性的自身抗体，4℃ 条件下，正常人血清中的冷凝集素效价低于1：16，冷凝集素效价增高是导致献血者血型正反定型不符的常见原因 。在较低温度条件下，冷凝集素能够与标准红细胞和自身红细胞产生凝集现象，凝集强度随着温度的升高而减弱。低效价的冷凝集素在37℃不能凝集标准RBC和自身RBC，因此不会造成血型误判，但高效价的冷凝集素在37℃仍可产生较强凝集，容易造成血型误判。如果献血者血清中含有高效价的冷凝集素，在血型鉴定试验中应使用37℃生理盐水洗涤红细胞或45%热放散，以排除冷凝集素的干扰。在肺炎、支原体肺炎、肝硬化等疾病患者血清中，冷凝集素很高，严重干扰血型鉴定。④ABO亚型在血型血清学试验中是导致正反定型不符的主要原因之一。亚型属于同一血型抗原，是由基因所决定的抗原结构和位点数改变导致的弱表现型。在A抗原中主要为A1和A2，其他A亚型不多见，而B亚型通常比A亚型更少。

3.3实验器材

① 所用器材必须清洁、干燥，试管、滴管要专用，标记清楚。②用试管法定型时，应同时进行正向和反向定型。每批测定均须设置对照。③红细胞浓度按要求配制，红细胞与相应抗体的比例适当。④反应温度、反应时间、离心时间是血型鉴定的重要影响因素，要按操作规程严格控制。

3.4 其它因素

① 经输血或妊娠等免疫刺激产生，在献血者中常见的不规则抗体是抗一M、抗一N等。在反定型试验中，不规则抗体可以和标准红细胞上相应的抗原发生凝集反应，而这种反定型结果与A或B抗原无关，所以导致ABO血型鉴定时正反定型结果不一致。②类B抗原某些受肠道革兰氏阴性杆菌感染的病人，红细胞获得了类B抗原，A型病人可误定为AB型，O型误定为B型。因此，感染体征病人配血不合时，应考虑类B。

总之，在患者ABO血型鉴定试验中，如果出现正反定型结果不符，不能轻易发报告，否则，可致ABO血型的误判。因此，在具备认真的工作态度的基础上，还需要不断积累丰富的血型鉴定经验，对异常结果进行系统全面地分析，查明原因，以获得ABO血型的准确定型，确保安全输血。

参考文献

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