黄芩柴胡分煎合煎色谱组分的对比研究

摘 要：目的：通过比较和分析中药药对黄芩柴胡的合煎、分煎以及配方免煎颗粒剂的HPLC紫外图谱信息，探求不同调配方法对药物组分的溶出度及组分改变的影响。方法：逆相色谱柱：RPC18 (Cadenza CD-C18#ZB0703C 4.6mm×150mm，4μm)。流动相：A=0.1% TFA H2O,B=0.1% TFA H2O/CAN=1/9。梯度：A/B=100/0～90/10 in 5min A/B=90/10～60/40 in next 55min。流速：1.0mL/min；检测波长：215nm；进样量20μL。结果：各组合煎时，药对定组分的溶出度增加，部分主要组分高于分煎组2倍以上。免煎颗粒的溶出度与分煎接近。各组合煎与分煎或颗粒剂之间相比，出现了少量低丰度峰的增减改变。 结论：合煎能使药物的成分溶出度增加, 但组分改变不显著。 免煎颗粒有推广的可能性，但在量的等效性方面。还有必要加以进一步考察。

关键词：HPLC；药对；合煎；分煎；中药；免煎颗粒

中图分类号：R285.5文献标识码：A

文章编号：1673-7717(2008)11-2427-04

Comparison of Components on Mixed Decoction and Separated Decoction of Redix Scutellariae and Redix Bupleuri by Chromatography

WEI Fei1,2，SHI Wei1,2，WEI Muxin1

(1.The First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University，Nanjing 210029，Jiangsu，China；

2.Pharmaceutical College ofNanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210046，Jiangsu，China)

Abstract:Objective：

Through the ultraviolet spectrum of the mixed decoction (mix the traditional Chinese herbs together,and then boil them in water),the separated decoction (boil the single traditional Chinese herb in water separately,and then mix them together),and extracted granule of couple of Redix Scutellariae and Redix Bupleuri,we analysis the overall ingredients,compare the differences,in order to investigate the influence of different decoct methods,on component and solute quantity.Methods:Column: RPC18 4.6mm×150mm(Cadenza CD-C18 #ZB0703C). Dilute every decoction with A (0.1% TFA H2O)HPLC.method:Solvent of Mobile Phase:A=0.1% TFA H20,B=0.1% TFA H2O/CAN=1/9.Gradient:A/B=100/0～90/10 in 5min A/B=90/10～60/40 in next 55min. Flow rate was 1.0mL/min and the detection wavelength was 215 nm.Results:The dissolution rate of mixed decoctions is larger than others in total and some special ingredients also increased. The dissolution rate of herb extract is close to that of separated decoctions.Conclusion:Mixed decoction can make the dissolved matter of herbs medicine increase partially,but the change of components is not obviously. Despite extracted granule has the value to be popularized,there also being a necessity to conduct a further investigation in the equivalence of quantity.The ingredients and the dissolution rate of the ingredients of the mixed decoctions can be different from that of the separated decoctions. While,the difference of dissolution rate between herbs extracts and separated decoctions is not notice.

Key words:HPLC;couple of herbs;mixed decoctions;separated decoctions;Extracted Granule

传统中药汤剂都是配伍合并煎煮，随着人们生活节奏的加快，中药免煎颗粒应运而生[1-2]。但是对于这种单味药先煎制剂、混合溶解再服用的剂型与传统的混煎能否保持基本相同的组分和疗效，长期以来一直遭到质疑，成分分析和功效研究是解决问题的根本渠道。但是面临中医临床无数的组合，研究变得无从下手。为了执简驭繁，本文从源自经方《伤寒论》的小柴胡汤中的黄芩柴胡药对入手，并以非药对组合黄芩甘草为对照，观察合煎、分煎以及免煎颗粒剂的HPLC分离的紫外图谱[3]，通过对谱图的整体信息进行比较和分析，探求各组的整体成分变化，为颗粒剂的运用探索科学依据。

1材料与方法

1.1 实验药物

中药饮片柴胡（批号：20080101）、黄芩（批号：20080101）和甘草（批号：20080301）均由安徽井泉中药饮片公司供应，经鉴定符合药典标准；中药免煎颗粒柴胡（批号：070931）、黄芩（批号：070931）和甘草（批号：070611）由深圳三九医药股份有限公司赞助。混煎药对组取等量柴胡、黄芩饮片，混合煎煮30min、过滤离心取全部上清液调节浓度至0.5g/mL浓度备用。混煎非药对组取等量柴胡、甘草饮片，加工方法及调制浓度同上。分煎则把柴胡、黄芩和甘草分别煎煮30min并调配成0.5g/mL浓度备用。以上3种中药的免煎颗粒也分别用温水超声震荡溶解，配成0.5g/mL浓度备用。

1.2 实验仪器与器材

LC-10AS双泵高效液相色谱系统和SPD-6A紫外检测器（日本岛津公司），20μL定量环，柱温箱（CTO-10ASvp，日本岛津）， 数据采集用浙江大学N2000工作站；ER-180A电子分析天平（日本AND公司）； Master-S plus UVF实验室超纯水系统（上海和泰仪器有限公司）；150mm×4.6mm,RPC18逆向色谱柱（Cadenza CD-C18#ZB0703C，日本)。

1.3 实验试剂色谱条件与方法

流动相ACN（Lot 711910）和TFA （Lot S4295-013）均为美国TEDIA公司产品（HPLC纯）。流动相A液（0.1％TFA水溶液），B液为ACN-水- TFA (450:50:0.5)；A、B液均经过He（纯度99.99%）脱气10min后使用；流速为1.0mL/min梯度洗脱（A 100%～90%，B 0%～10% in 0～5min；A 90%～60%，B 10%～40% in 5～60min）；柱温控制在25℃；UV检测波长215nm[4]。进样量：20μL。将各待测样品离心（10000r/min,2min），0.22μm滤器过滤，分别精密吸取待测药物20μL注入进样器，进行梯度分离，得到6幅HPLC图谱，将各图谱进行比较，以分煎中药饮片组为基准，计算其他两组组分的差异和峰高的比较。

2结 果

2．1 3种提取法组分的差异比较

2．1．1 黄芩柴胡药对组 各组紫外吸收峰按顺序描记，相同时间的峰被定义为同一组分，用相同标号表示。结果如图1所示：以分煎饮片样品为基准，合煎样品新增P1，P3~P5产生一个高丰量的融合峰，丢失了P7；免煎颗粒样品丢失P3、P6和P7峰。

2．1．2 黄芩甘草非药对组 以分煎样品为基准，混煎样品与分煎样品各峰完全吻合，免煎颗粒新增P1、P4和P5峰；丢失P8、P9和P10峰（见图2）。

2．2 各组分的溶出度变化

选择所有3组均出现的共同峰的峰高来比较各组分的溶出度变化。为了避免实验误差等的影响，数据均以各组组内主峰（黄芩柴胡组为P10；黄芩甘草为P12）为100%，进行标准化处理，以相对数表达。

黄芩柴胡药对合煎组P4、P5、P8、P9、P12和P13 共6个峰的峰高大于其余两组，且均为含量较高的主要组分。其中合煎组P4，P5两峰的峰高是其余两组的2倍余。分煎与免煎相比，总体差异不太显著，5个组分分煎峰高大于免煎，其余4个小于免煎（见图3）。

黄芩甘草非药对合煎组合煎组P7、P14、P15 的峰高均超过其余两组的2倍，加上P6、P11、P13和P17共7个峰的峰高大于其余两组，且均为紫外吸收较高的主要组分。分煎与免煎相比，总体差异不太显著，全部组分分煎峰均略大于免煎组（见图4）。

图4黄芩甘草合煎分煎与免煎颗粒各组分的溶出度对比（峰高的标准化处理数据，数据均以各组P12为100%，进行标准化处理）

3讨 论

随着生活节奏的加快和制剂技术的发展,诞生了中药免煎颗粒, 这是中药汤剂改革和中药现代化的趋势之一。，近年来中药配方颗粒这方面的研究越来越受重视[5]。从历史来看，汤剂复方是从单味药基础上发展起来的，是中医药实践经验的结晶。几千年来,汤剂一直是群药合煎。中药复方复杂的配伍关系，药与药之间的各种影响关系，以及庞杂的药物成分决定了复方研究一直是中药现代化研究的难点。因此，传统中药饮片与免煎颗粒孰优孰劣,依然是人们思索的重大课题。

以“药对”为切入点研究复方，近年来已经引起人们关注[6-7]。一般认为：“药对”是方剂配伍的一种特殊形式，为方剂的最小配伍单位。药对中两种药物在配伍煎煮过程中是否发生一些独特的成分变化[8]，如各种成分的溶出度是否互相影响、不同成分在汤液中是否发生化学反应产生新物质[9]，对药对的最终效会产生影响[3]。

为了探索免煎颗粒剂推广的可行性，笔者以颗粒剂非药对组为对照，观察了药对中各组分合煎与分煎溶出物峰的增加减定性变化和相同峰的含量改变。 合煎与分煎这组实验所有药物饮片为相同来源，其差异可以理解为仅仅来自于煎煮方法。结果合煎与分煎的差异主要体现在溶出度上。不管药对组还是非药对组，合煎的溶出度较分煎更大，部分主要组分高于分煎组2倍以上。推测可能通过助溶、吸附、沉淀等影响溶出率。免煎颗粒的组分的溶出度与分煎相当接近。推测合煎可能通过助溶、吸附、沉淀等提高溶出率。

溶出物峰的改变非药对组合黄芩甘草，合煎、分煎两组出峰几乎完全一致；药对组黄芩柴胡有少量低丰量的峰改变，合煎样品新增P1峰，P3~P5产生一个高丰量的融合峰，丢失了P7。但是总体来看，合煎与分煎峰的增减改变，多发生在低丰量的峰上，且仅仅发生在药对组，新峰是否仅仅为原组分的络合物，还是通过络合、水解、聚合、解离、氧化还原反应产生新物质还很难下结论，有待于用LC-MS等技术加以进一步研究。有研究报道认为，复方合煎过程中的反应大部分只是影响溶出率,改变物质结构的反应很少,产生新物质的概率极少,因为产生新物质有着极其严格的条件要求[10]。

作为对照，本文还加了一组免煎颗粒组。分煎饮片与免煎颗粒都是先煎后混合，其差异应该理解为药材来源不同所致。这两组的各组分溶出度相当接近。就增减组分而言：与分煎饮片比较，药对黄芩柴胡组免煎颗粒样品丢失P3、P6和P7峰，未出现新峰：非药对黄芩甘草组，免煎颗粒新增P1、P4和P5峰；丢失P8、P9和P10峰。推测这些改变是由于免煎颗粒的原药材与本实验用的饮片药材的批次或产地不同所导致。

以上结果提示：免煎颗粒中药的先煎后混的调配方法，从HPLC紫外吸收组分峰角度考虑，因为对组分改变的定性影响不大，有推广的可行性。但先煎后混法的溶出度的降低提示，标称剂量免煎颗粒与常规中药混合煎法在量的等效性方面，还有必要加以进一步考察。如果能针对中医长期经验总结的药对也生产混合免煎颗粒，将更有意义。

限于研究的例数和实验条件的不足，本文只比较了药物组分UV吸收谱的差异，这些组分的质和量的变化在生物活性方面是否有意义，尚有待于通过药理以及临床加以进一步探索。

参考文献

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