黄芩苷提取工艺研究

[摘要] 目的：对现有黄芩苷提取工艺中的水提、酸沉、水洗、醇洗各参数进行优化，为今后黄芩苷的提取和纯化提供参考。方法：以黄芩苷含量为指标，通过正交设计实验，对影响水提、酸沉、水洗、醇洗工艺的因素进行考察，并进行方差分析。结果：确定了提取黄芩苷的最佳工艺条件。结论：该提取工艺合理，黄芩苷收率高，质量易于控制。

[关键词] 黄芩苷；饮片；粗粉；冰乙酸；乙醇；紫外分光光度法；方差分析

[中图分类号]R284.2[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2007）08（b）-091-03

Study on the extraction technology of baicalin

ZHAI Bao-tong1,WANG Ying2

(1. Nan Yang Central Hospital , Nanyang 473004,China;2. Nanyang Institute of Technology , Nanyang 473004, China)

[Abstract] Objective: To define the optimal parameters of extracting with water, depositing with acid, washing with water and ethanol in the extracting of baicalin from scutellaria. And to supply a reference for the extraction and purification of baicalin in future. Methods: Using the content of baicalin as an assessing index，the optimum extracting conditions which were about extracting with water, depositing with acid，washing with water and ethanol were selected by orthogonal design andthe analysis of variance. Results: The optimum extracting conditions of baicalin were selected. Conclusion: The extraction technology is reasonable ,the yield of baicalin is high, and the quality is easily controlled.

[Key words] Baicalin;Decoctionpieces;Coarse powder; Glacial acetic acid; Ethanol; Ultraviolet spectrophotometry; Analysis of variance

黄芩中含多种黄酮类化合物，主要为黄芩苷（baicalin）[1-3]、黄芩苷元（baicalein）、汉黄芩苷（wogonoside），汉黄芩素（wogonin）、黄芩新素（skullcapflavone）I和II[4,5]等, 具有抗菌、抗病毒、抗变态反应、抗炎、抗氧化， 增强机体免疫力，镇静与降压，利胆与解痉等作用[6,7]。

黄芩的主要化学成分黄芩苷在植物体内以镁盐形式存在，所以可用水作提取溶剂。黄芩苷分子结构中C2上羧基常成盐形式存在，加酸后黄芩苷分子就游离出来。利用黄芩苷在酸性溶液中易析出的性质，采用水提取、酸沉淀再用水洗、醇洗的方法进行提取和纯化。

1 仪器与材料

1.1 仪器

紫外分光光度计UV-265（日本岛津）。

1.2 材料

黄芩苷（中国药品生物制品检定所）；黄芩（购自南阳市药材公司）；甲醇为色谱纯；冰醋酸为分析纯。

2 方法与结果

2.1 黄芩水提取工艺的研究

利用正交设计，以黄芩苷含量为指标，选择药材粒度、提取次数、第1次煎煮时间、第2、3次煎煮时间、加水倍数五个因素，每个因素各选二个水平，采用L8(27)正交表进行设计试验（表1）。

称取黄芩饮片200 g，平均分成4份，每份50 g；称取黄芩粗粉200 g，平均分成4份，每份50 g。分别按表1黄芩水提取工艺因素水平和表2黄芩水提取工艺正交设计进行试验，每份提取液用蒸馏水定容至1 000 ml容量瓶中，待测含量。

准确量取每份实验提取液2 ml，置烧杯中，加稀盐酸调pH1~2，移入10 ml离心管中，每次用水0.25 ml洗涤容器，洗涤液并入离心管中，至沉淀全部移入为止。离心，弃去上清液，每次用丙酮0.5 ml洗涤沉淀，离心，弃去丙酮，至丙酮液近无色为止。用95%乙醇将沉淀移至100 ml容量瓶中，加热使溶解，放冷至室温，加乙醇稀释至刻度，摇匀。然后精密吸取5 ml，置50 ml容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀。依照分光光度法，在279 nm波长处测定吸收度，按C21H18O11的吸收系数 (E■■)673计算黄芩苷的含量，结果见表2。

用正交试验的直观分析法进行分析，从R值的大小可知：各因素的主次顺序为B>C>E>D>A。较优组合为：A2B2C2D2E2，即用粗粉、煎煮3次、每次煎煮2 h、每次加12倍量水。

对上述资料进行方差分析，见表3。从方差分析知：B、C达到了极显著水平，虽然E没有达到显著水平，但其F值也较大，应控制在最优水平，而D和A因素可以在任意水平，为了节约工时，同时考虑到实际生产中颗粒粉易焦化、粘结，过滤难的特点。A应取A1，D应取D1。因Ⅱ2>I2，Ⅱ4>I4，Ⅱ7>I7。所以，B取B2，C取C2，E取E2。最佳提取工艺是A1 B2 C2 Dl E2，即用黄芩饮片，煎煮3次，第1次2 h，第2、3次各1 h，每次加12倍量水。

2.2 黄芩酸沉工艺的研究

用正交试验，以黄芩总苷含量(即沉淀量)为指标，选择浓缩液相对密度、加酸后的pH值、保温温度、保温时间、静置时间5个因素，每个因素各选2个水平，采用L8(27)正交表进行设计试验（表4）。

称取黄芩饮片800 g，第1次煎煮2 h，第2、3次各煎煮1 h，每次加12倍量水，合并煎液，滤过，将滤液平均分成8份，按表4酸沉工艺因素水平和表5酸沉工艺正交试验设计及黄芩总苷含量进行试验，以黄芩总苷含量(即沉淀量)为指标（表5）。

用正交试验的直观分析法进行分析，从R值的大小可知：因素的主次顺序为A >B>D>C>E。最优组合为A1B1C1D1E1。对上述资料进行方差分析见表6。

方差分析可见A、B、C、D均达到显著水平，仅E没达到，可以控制在任意水平，即最佳组合为：A1B1C1D1E1。即浓缩至相对密度1.05~1.10(80℃测)，加稀盐酸调节pH1~2，80℃保温１ h，静置24 h。

2.3 水洗、醇洗工艺的研究

黄芩苷在酸性条件下可析出，酸沉后的沉淀物用水洗至pH5.0，水洗的目的是洗出酸处理过程中产生的无机盐及一些水溶性杂质，继用70％乙醇洗至pH7.0，醇洗可以洗去一部分醇溶性的杂质。虽然黄芩苷是黄芩的主要有效成分，但黄芩苷元的作用不可忽视，黄芩苷元的溶解度随着乙醇浓度增高逐渐增大，在95％乙醇中的溶解度最大，所以为了减少黄芩苷元的损失，用70％乙醇进行醇洗比较合适。

2.4 黄芩出膏率及半成品中黄芩苷的含量

取黄芩饮片1 000 g 5份，按照以上黄芩苷优选的条件，进行水提取、酸沉、水洗、醇洗，低温干燥。称量每份粗黄芩苷的得率，结果见表7。

结果表明：1 000 g黄芩药材中提取精制后精黄芩苷含量为46. 8~52.1 g。

3 讨论

本实验采用正交设计考察了水提取、酸沉淀、水洗、醇洗工艺并进行了方差分析，确定了提取黄芩苷的最佳工艺参数。

实验证明，该提取工艺合理，黄芩苷收率高，质量易于控制，可以为工业化生产所采用。

[参考文献]

[1]江苏新医学院. 中药大辞典[M].下册.上海:上海人民出版社, 1977.2019.

[2]郑虎占,董泽宏,佘静. 中药现代研究与应用[M].第4卷.北京:学苑出版社, 1998.

[3]杨克文,张军. 黄芩根中抗流感A(H3N2)和B病毒的黄酮类成分5,7,4＇-三羟基-8-甲氧基黄酮[J].国外医学中医中药分册, 1996, 18(3):46.

[4]Un X,Akatsu H,Dkada. Apoptosis of HIV-infected cells following treatment with sho-sociko-to and its components[J].Jpn J Med Sci Biol,1995,48(2):79-81.

[5]Li BQ, Fu T, Yan YD, et al. Inhibition of HIV-infection by baicalin a flavonoid compound purified from Chinese herbal medicine[J]. Cell Mol Biol Res, 1993, 39 (2):119-123.

[6]Huang HC,Hsieh LM, Chen HW, et al. Effects of baicalein and esculetin on trans-duction signals and growth factors expression in T-lymphoid leukernia cells[J]. Eur J Pharmacol, 1994, 268(1):73-75.

[7]贺海平,秦菁,陈明,等.一种新的黄芩类黄酮3,5,6,7-四羟基-2,8-二甲氧基黄酮的体外免疫作用[J].广西医科大学学报,2000,17(3):353-355.

（收稿日期：2007-04-25）

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