铁皮石斛多糖对S180肉瘤小鼠免疫功能的影响

关键词 铁皮石斛多糖 S180肉瘤 抑瘤率 免疫功能 小鼠

铁皮石斛(Dendrobium Candidum Wall.ex Lindl.)为常用贵重药材，它具有滋阴清热、益胃生津、润肺止咳等功效[1]。其主要有效成分为石斛类多糖及生物碱，另外还有酚类、菲类、芪类、倍半萜类及香豆素等。现代药理研究报导石斛多糖具有抗肿瘤、增强免疫力、降低血糖等作用，但对荷瘤动物免疫功能的作用报导甚少。本文以S180肉瘤小鼠为动物模型，探讨了铁皮石斛多糖对S180肉瘤小鼠的免疫调节作用，现将结果报告如下。

1 实验材料

1.1 动物及瘤株：

ICR小鼠：雌雄兼备，体重18~22g，70只，由浙江省中医药研究院动物房提供，许可证：SYXK(浙2004-0034)；S180肉瘤、YAC-1细胞株均由中国科学院上海药物研究所肿瘤室提供。

1.2 药物：

铁皮石斛多糖：根据文献报道提取[2]，实验提取的粗多糖得率为12.8%；别直参：由杭州临安市医药药材有限公司提供，实验时切片水煎三次，煎液浓缩成1g生药/ml浓度；注射用环磷酰胺(CTX)：200mg/瓶，江苏恒瑞医药股份有限公司生产，批号07070421。

1.3 试剂：

刀豆蛋白素(ConA)：250mg/瓶，由美国Sigma公司产，分装成1mg/ml，-20℃存放；RPMI-1640完全培养液：日本产；氚-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)：中国科学院上海原子核研究所生产，浓度1mCi/ml，比度42Ci/mM。

1.4 主要仪器：

CO2培养箱：美国Forna Scientific公司产；DYQ-OII型多头细胞样品收集器：绍兴坡塘机械厂生产；YJ-875SA医用净化工作台：江苏吴江净化设备总厂生产；液体闪烁计数仪：型号Packard Tricard 300，美国产。

2 方法

2.1 铁皮石斛多糖对S180肉瘤生长抑制作用的影响[3]：

在无菌条件下，取生长良好的S180肉瘤匀浆制作1∶3稀释的细胞悬液，每鼠腋窝皮下注入0.2ml，次日随机分组，每组10只，称重，编号。分组如下：铁皮石斛多糖低剂量组(400mg/kg，以下简称低剂组)、铁皮石斛多糖中剂量组(800mg/kg，以下简称中剂组)、铁皮石斛多糖高剂量组(1600mg/kg，以下简称高剂组)、别直参对照组(2.2g/kg，以下简称对照1组)、环磷酰胺对照组(30mg/kg×3d，以下简称对照2组)与模型对照组(以下简称模型组)。除CTX组在第3、5、7天腹腔注射，各组动物每日灌胃相应药液1次，连续10日。于停药次日称体重，处死小鼠，取瘤块，称瘤重，计算肿瘤抑制率。

2.2 铁皮石斛多糖对S180肉瘤小鼠免疫功能的影响：

分述如下。

2.2.1 对T淋巴细胞转化功能及NK细胞活性的影响：动物肿瘤接种、分组及给药剂量均同前，实验同时设正常组(ICR小鼠10只)。停药次日，脱颈椎法处死小鼠，无菌取脾脏。T淋巴细胞转化功能采用刀豆蛋白(ConA)诱导的3H-TdR掺入法测定，NK细胞活性采用小鼠淋巴瘤细胞(YAC-1)为靶细胞的3H-TdR前标法测定。

2.2.2 对巨噬细胞吞噬功能的影响：动物肿瘤接种、分组及给药剂量均同前。终止给药前3天每鼠腹腔注射0.5%淀粉生理盐水溶液0.5ml，4天后，每鼠腹腔注射5%鸡红细胞悬液0.5 ml，待12小时后，颈椎脱臼处死小鼠，再腹腔注射Hank’s液2ml，轻揉小鼠腹部1min。然后打开腹部吸出腹腔洗液lml，滴于载玻片上，放在垫有湿纱布的塘瓷盆内，37℃孵育30min，以生理盐水漂洗，除去未贴片细胞，晾干，1∶1丙酮-甲醇溶液固定，Giemsa-PBS染色。分别计算吞噬百分率和吞噬指数[4]。

2.2.3 对溶血素值的影响[5]：动物肿瘤接种、分组及给药剂量均同前，给药第8天腹腔注射2%绵羊红细胞，实验第12天小鼠眼眶取血，分离血清，测定溶血素值。结果用半数溶血值(HC50)表示。

2.3 统计学处理：

采用SPSS12.0 for windows方差分析法，所有数据以均数(x)±标准差(SD)表示，各组间采用样本均数t检验。

3 结果

3.1 铁皮石斛多糖对S180肉瘤生长的影响：

结果见表1。铁皮石斛多糖各剂量组对S180实体瘤均有一定的抑制作用，其抑瘤率为9.7%~26.8%。

3.2 铁皮石斛多糖对S180小鼠免疫功能的影响：

结果见表2、表3。由表2、表3可见，铁皮石斛多糖具有明显提高荷瘤小鼠的T淋巴细胞转化功能，其中铁皮石斛多糖中、高剂量组与模型组比较有显著性差异(P

4 讨论

石斛属植物的药理作用广泛，其中多糖类成分是石斛具有免疫增强作用和抗肿瘤作用的活性成分[6-7]。本试验结果显示铁皮石斛多糖对S180实体瘤均有一定的抑制作用，其抑瘤率为9.7%～26.8%。铁皮石斛多糖对S180肉瘤小鼠T淋巴细胞转化功能、NK活性、巨噬细胞吞噬功能及溶血素值均有明显提高作用。表明铁皮石斛多糖具有增强免疫功能的作用。

5 参考文献

[1]江苏新中医学院.中药大药典[M].上海：上海科学技术出版社，1985：586.

[2]陈云龙，何国庆，华允芬，等.细茎石斛多糖的提取分离纯化和性能分析[J].中国药学杂志，2003，38(7)：494-497.

[3]徐叔云主编.药理实验方法学[M].人民卫生出版社，1982：P945-946.

[4]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，1996：779.

[5]杨锋，戴关海，沈翔，等.康得方免疫调节作用的实验研究[J].中国中医药科技杂志，1999，6(5)：323-324.

[6]罗慧玲，蔡体育，陈巧伦，等.石斛多糖增强脐带血和肿瘤患者外周血LAK细胞体外杀伤作用的研究[J].癌症，2000，19(12)：1124-1126.

[7]黄民权.铁皮石斛多糖对小白鼠白细胞数和淋巴细胞移动抑制因子的影响[J].天然产物研究与开发，1996，8(3)：39-41.

收稿日期 2009-01-19