米诺地尔纳米结构脂质体的体外透皮吸收研究

[摘要]目的：观察0.5%米诺地尔-纳米脂质结构载体(MDX-NLC)作为经皮给药载体的透皮特性。方法：制备0.5% MDX-NLC，以离体大鼠皮肤为透皮屏障，通过体外透皮实验，用高效液相和药物透皮扩散试验仪检测0.5%MDX-NLC经皮之渗透速率及其皮内滞留量，以0.5%的MDX酊剂为对照。结果：体外经皮渗透试验表明，0.5%MDX-NLC与0.5%的MDX酊剂溶液相比，前者透皮速率明显变慢，且皮肤中药物滞留量明显增加。结论：0.5%纳米结构脂质载体可对米诺地尔的经皮吸收起到较好的缓释作用，并能有效提高其在皮肤中蓄积，持续释药。

[关键词]米诺地尔；纳米结构脂质载体；体外透皮

[中图分类号]R965.1[文献标识码]A[文章编号]1008-6455（2011）05-0784-03

Study on vitro transdermal permeation of Minoxidil nanostructured lipid carriers

LIU Wei,SHEN Hong

（Department of Patholagy,School of Basic Medical Sciences,Southern Medical University, Guangzhou 510515,Guangdong,China）

Abstract:ObjectiveTo observe the penetration characteristics as a transdermal vehicle of the 0.5% minoxidil nanostructured lipid carriers (MDX-NLC).Methods0.5% MDX-NLC was prepared for the experiment of in vitro transdermal permeation on the isolated rats skin with diffusion device and HPLC to evaluatethetransdermal permeation ability andthe drug amount left inthe skin when compared with 0.5%MDX-tincture.ResultsCompared with the 0.5％MDX tincture，the 0.5%MDX-NLC hadlower transdermal speed but higher drug content in the skin.ConclusionsNanostructured lipid carriers can make the MDX accumulate in skin which wasexpectedto release steadily and continuously.

Key words：Minoxidil;nanostructured lipid carriers;transdermal

脱发是临床皮肤科常见的疾病。米诺地尔（minoxidil，MDX）是治疗各种类型脱发的外用药物，特别是对于雄激素源性脱发，被推荐为一线外用药[1]。该药最早是用于心血管内科的降压药物，后来人们发现其有引起多毛的副作用并将其用于治疗脱发。长期以来，米诺地尔酊剂是治疗脱发的主要剂型，存在许多不足，譬如：①酊剂易挥发，擦在皮肤外面易析出结晶，影响药物吸收；②酊剂中的丙二醇、酒精可引起皮肤过敏[2]；③药物皮内储留时间短，难以持续发挥疗效，且易透过皮肤，引起其他部位多毛、血压下降等副作用；④酒精有脱脂作用，可致局部皮肤干燥等。

为改进米诺地尔酊剂的诸多不足，开发一种能够代替传统酊剂的新型药物剂型，我们用溶剂扩散-低温固化法，制备了米诺地尔纳米结构脂质载体（Minoxidil nanostructured lipid carriers ）并进行了Wistar大鼠离体皮肤的扩散实验，比较了其与米诺地尔酊剂的体外皮肤渗透特性。

1材料和方法

1.1仪器和实验动物：仪器与剂均 日本岛津LC-20A高校液相色谱仪，SPD-20AT检测器，TK-12B型药物透皮扩散试验仪 (上海锴凯科技贸易有限公司)，恒温磁力搅拌器，电动剃毛刀等。米诺地尔原料药及标准品（武汉远城生化有限公司、Sigma公司），高效液相试剂甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为超纯水。

实验动物SPF级雄性Wistar大鼠，体重(240±10)g，由南方医科大学实验动物中心提供，合格证号为SCXK(粤) 2006-0015。

1.2 米诺地尔纳米结构脂质载体及酊剂制备

1.2.1米诺地尔纳米结构脂质载体：将米诺地尔50mg、硬脂酸70mg、油酸150mg、18烷酰胺30mg溶于10ml二氯甲烷；将50mg卵磷脂溶于10ml乙醇。在将上述两类溶液混合构成油相；用苄泽450mg溶于50ml水，构成水相，在同温（约72℃）下，将油相缓慢加入水相，搅拌蒸发至5ml，然后快速倒入5ml冰水中。超声10min通过0.45μm滤膜即得0.5% Minoxidil-NLC。

1.2.2米诺地尔酊剂：0.5g米诺地尔加酒精60ml，丙二醇20ml，然后加纯水至100ml，得0.5%的米诺地尔酊剂。

1.3 标准品溶液的制备及标准曲线的绘制：精密称取米诺地尔 20mg，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，即得浓度为200μg/L的标准储备液。将标准品储备液用甲醇逐级稀释，得标准系列，浓度分别为100、50、25、10、5、1、0.5和0.1μg/ml。根据预实验结果，色谱条件为： Luna C18柱(150.0mm×4.6mm，5μm)；检测波长281 nm；流动相：甲醇-水(30:70)，流速1.0ml/min；柱温：30 ℃，进样量20μl。以浓度（X）为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程。

1.4 体外透皮实验比较：Wistar大鼠5只，戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉后，放血处死大鼠，并用电剃刀除去腹部鼠毛，取下已去毛的鼠皮。用沾有生理盐水的脱脂棉除去皮下脂肪。取已备好的大鼠腹部皮肤固定在扩散池中。透皮扩散有效扩散面积约2.92cm2，接受室体积约为7ml，接受液为PBS(pH 7.4)。整个实验过程恒温37℃±0.2℃，300 r/min搅拌。分别取米诺地尔NLC及酊剂各3 ml加于供应室中，供应室上用保鲜膜封口，防止水分蒸发。分别于0.5、1、2、3、5、8和12h从接受液中取样0.4ml，同时补充相同体积相同温度的新鲜接受液。样品离心10min(15 000r/min)，取上清液用HPLC法测定药物的含量。

1.5 统计学方法：用（x±s）对资料进行描述，采用两样本t检验进行两组间数据比较，P

2结果

2.1 标准曲线：米诺地尔纳米脂质载体标准曲线见图1，其标准曲线方程为A=121204C+19990(R2=0.9998)，表明米诺地尔纳米脂质载体质量浓度在0.10～100μg/ml 范围内其峰面积与浓度呈良好的线性关系。

2.3 透皮结果分析

2.3.1渗透速率：按下列公式计算单位面积累积透过量(Q)Q=[Cn×V+∑Ci×0.4]/A。式中V为接受池的体积，Cn为第n个取样点测得药物的浓度，A为有效扩散面积(本实验中为2.92cm2)，Ci为第i(i≤n-1)个取样点测得的药物浓度。以单位面积累积透过量（Q）对时间（t）进行线性回归，求得回归方程，其斜率即为药物渗透速率(penetrating rate, PR, μg/h/cm2)，结果表明NLC组与酊剂组比较，米诺地尔药物渗透速率明显减小, 差异有显著性，P

2.3.2 透皮吸收12h后，MDX-NLC药物组皮肤中药物贮留量为(99.73±9.86)μg/g, MDX酊剂组药物贮留量为(56.97±5.81)μg/g，两组比较差异有统计学意义 P

3讨论

米诺地尔是外用治疗多种脱发性疾病的有效药物,其疗效并不依赖于它对血管的扩张作用。研究表明[3],米诺地尔可直接刺激毛囊生长。对毛囊角质形成细胞增生和分化有直接作用,可促进毛细胞增生,同时抑制该细胞的凋亡[4]。Lachger等报告米诺地尔可上调毛血管内皮细胞生长因子(VEGF) mRNA的表达，而VEGF能够刺激毛发的生长[5]。动物实验证实米诺地尔皮下吸收的量大约为5%～36%,而30%～78%又留在皮肤上[6]，其溶液剂对头皮有一定的刺激作用，临床上常见的是头皮轻度炎症，偶会引起刺激性或变应性接触性过敏反应。Mura S, Pirot F等人制备了米诺地尔囊泡脂质体，提出无酒精配方的脂质体是一种很有前途的治疗脱发的方法[7]，Hasanovic A, Hollick C曾考察了阿昔洛韦和米诺地尔两种阳离子脂质体，指出阳离子脂质体有着更好的稳定性和更好的皮肤扩散率[8]。Jain B, Singh B认为中性脂质体能更好地运送药物到达毛囊皮脂腺[9]。薛瑛[10]等曾制备了1.4%的米诺地尔脂质体，并与相同浓度的酊剂对比研究了其对C57BL/6小鼠毛囊VEGF的表达，发现脂质体制剂可明增强VEGF的表达。以上的研究主要是基于SLN（solidlipidnanoparticles ）剂型的研究，该剂型包封率不高，长时间保存后纳米结构会形成规则的晶体结构使药物排出导致包封率进一步降低，故又诞生了另一种纳米结构脂质体---NLC( nanostructured lipid carriers)。

纳米结构脂质载体（NLC）是由固体脂质纳米粒（SLN）发展而来的一种新型载药系统，它用液态脂质替代SLN中的部分固体脂质，通过形成含一定纳米隔室的脂质骨架[11]，使纳米粒以结晶缺陷型或无定形结构[12]存在，避免放置过程中药物外排导致的包封率降低[13-14]。NLC生物相容性强、毒性弱且粒径很小,易粘附在皮肤表面，形成一层膜,对皮肤有闭合作用,使角质层肿胀疏松，使药物易进入表皮；此外它能在表皮中形成贮药库，使药物缓慢释放，持久发挥药力，因而具有缓释控释作用，也避免了药物渗透入血液引起全身的毒副作用。

本实验证明米诺地尔纳米结构脂质载体，其体外透皮特性与传统酊剂相比，能明显增加皮内药物储留量，并降低药物皮肤渗透速率。因此能使米诺地尔更持久地发挥促毛发生长作用，并降低对机体的副作用，是一种很有前景的，有望替代传统酊剂的新剂型。当然NLC也存在一些不足之处，比如载药量仍然偏低，药物不够稳定，储藏不便等。这也为我们今后的研究提供了新的方向。

[参考文献]

[1]中华医学会皮肤性病学分会. 中国雄激素性秃发诊疗共识[J].中华皮肤科杂志,2009,42(10):663

[2]Friedman ES,Friedman PM,Cohen DE,et al.Allergic contact dermatitis to topical minoxidil solution:etiology and treatment[J].J Am Acad Dermatol,2002,46:309-312.

[3]代秀菊,涂平,秦俭,等.米诺地尔对培养人头皮毛囊生长的影响[J].临床皮肤科杂志, 2002,31(1):6-8.

[4]JiHH, Sh SK, JinHC,et al. Effect ofminoxidil on proliferation and apoptosis in dermal papilla cells ofhuman hair follicle[J].J Dermatol Sci,2004,34:91-98.

[5]Lachger S,Charveron M,Call Y,et al.Minoxidil upregulates the expression of vascular endothelial growth factor in human hair dermal papilla cells [J].Br J Dermatol,1998,138: 407-411.

[6]陈声利,孙建方.米诺地尔治疗脱发的药理和临床研究[J]. 国外医学皮肤性病学分册,2004,30(5): 276-278.

[7]Mura S, Pirot F.Liposomes and niosomes as potential carriers for dermal delivery of minoxidil[J].J Drug Target,2007,15(2):101-108.

[8]Hasanovic A, Hollick C Improvement in physicochemical parameters of DPPC liposomes and increase in skin permeation of aciclovir and minoxidil by the addition of cationic polymers[J].Eur J Pharm Biopharm,2010,75(2):148-153.

[9]Jain B,Singh B.Development and characterization of minoxidil-loaded liposomal system for delivery to pilosebaceous units[J].J Liposome Res，2010,20(2):105-114.

[10]薛瑛,屠军波,邢,等.米诺地尔脂质体制剂与普通制剂对C57 BL/6小鼠毛囊VEGF表达影响的对比的研究[J].中国美容医学,2006(15)3:250-252.

[11]Radtken,Miiller RH NLCTM.Nanostructured lipid Carriers the new gene ration of lipid drug carrier[J].New Drugs,2001,2:48-52.

[12]Müller RH, Petersen RD, Hommoss A,et al. Nanostructured lipid carriers (NLC) in cosmetic dermal products[J].Adv Drug Deliv Rev,2007,59(6):522-530.

[13]Müller RH,Radtke M,Wissing SA.Solid lipid nanoparticles (SLN) and nanostructured lipid carriers (NLC) in cosmetic and dermatological preparations[J].Adv Drug Deliv Rev, 2002, 54(Suppl): S131-S155.

[14]Müller RH,Radtke M,Wissing SA. Nanostructured lipid matrices for improved microencapsulation of drugs[J]. Int J Pharm,2002,242(1-2):121-128.

[收稿日期]2011-02-25 [修回日期]2011-04-16

注：“本文中所涉及到的图表、公式、注解等请以PDF格式阅读”