气相色谱法测定活络膏中薄荷脑和水杨酸甲酯的含量

[摘要] 目的:建立活络膏中有效成分薄荷脑和水杨酸甲酯的毛细管气相色谱测定方法。方法:色谱条件以PEG-20M毛细管柱30 m×0.25 mm×0.25 μm,程序升温,起始温度为80℃,保持5 min后每分钟升高15℃,终止温度为190℃,保持8 min,分流比50∶1。结果:各组分在相应的浓度呈良好线性关系,r1=0.999 79、r2=0.999 98,RSD≤2.0%。结论:本方法简便、快速、准确,可用于活络膏的质量控制。

[关键词] 活络膏;薄荷脑;水杨酸甲酯

[中图分类号] R927.2[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2010)06(c)-015-03

Determination of the contents of mentholum and methyl salicylate in Medicated Balm by capillary gas chromatography

MO Huodi, RONG Lingxin, HE Weirong, CHEN Guiping

(The First Hospital of Zhaoqing City, Zhaoqing 526021, China)

[Abstract] Objective: To establish a method for determination of the mentholum and methyl salicylate in Medicated Balm by capillary gas chromatography. Methods: Chromatographic condition was PEG-20M capillary column 30 m×0.25 mm×0.25 μm, initial temperature was 80℃, temperature programmed to raise 15℃ in five minutes, final temperature was 190℃ and kept eight minutes, split ratio was 50:1. Results: There was a favorable linearity relation between peak area and concentration. r1=0.999 79, r2=0.999 98, RSD≤2.0%. Conclusion: The method is sensitive, accurate and can be used for quality control of Medicated Balm.

[Key words] Medicated Balm; Mentholum; Methyl salicylate

活络膏是在已有的国家药品标准品种“活络油”的基础上,保持其原处方、制备工艺及给药途径不变,对其剂型进行进一步的研究试验改进而得,处方由松节油、樟脑、薄荷脑和水杨酸甲酯等挥发性成分组成,具有舒筋活络、祛风散瘀作用。为了控制产品质量,对其中薄荷脑和水杨酸甲酯两个组分进行定量分析,参考活络油质量标准对原方法进行修订,本研究采用毛细管气相色谱内标法,一次进样同时测定薄荷脑和水杨酸甲酯两种成分,回收率、精密度等均能满足分析要求。

1 仪器、试剂与供试品

1.1 仪器

Agilent6890N气相色谱仪,FID检测器,Agilent色谱工作站。电子分析天平AEG-120G(日本岛津)、BD211D(德国赛多利斯)。

1.2 对照品

薄荷脑、水杨酸甲酯对照品均由中国药品生物制品检定所提供。

1.3 试剂及溶剂

萘(内标)、石油醚Ⅲ均为分析纯。

1.4 供试品

活络膏样品(批号:20080501、20080502、20080503)及各原料由香港英吉利制药厂有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

由于供试品溶液所选用的溶媒与原活络油不同,故本研究根据本品的实际实验系统适应情况,选用色谱柱为PEG-20M毛细管柱30 m×0.25 mm×0.25 μm,程序升温,起始温度为80℃,保持5 min后每分钟升高15℃,终止温度为190℃,保持8 min,分流比50∶1。检测器温度为300℃,进样口温度为250℃。在以上色谱条件下,样品中各组分完全分离,见图1。

2.2 溶液的配制

2.2.1 内标溶液和对照品溶液的制备

取萘适量,用石油醚Ⅲ制成20 mg/ml的溶液,摇匀,作为内标溶液。另取薄荷脑对照品30 mg、水杨酸甲酯对照品50 mg,精密称定,置10 ml量瓶中,精密加入内标溶液1 ml,用石油醚Ⅲ溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。

2.2.2 供试品溶液

2.2.2.1 供试品吸收液的选择因本品是含有挥发油成分的软膏剂,故结合本品的实际情况分别试用了甲苯、正己烷、石油醚Ⅱ、石油醚Ⅲ等溶媒作为吸收液进行提取样品中挥发油成分及测试。结果甲苯对本品中α-蒎烯及桉油精组分都有干扰;正己烷及石油醚Ⅱ的沸点较低,在挥发油提取过程中溶媒容易挥发导致被测成分损失较大;石油醚Ⅲ经测试对本品各组分均无干扰,且沸点较高,结果均可满足分析要求,故本研究选用石油醚Ⅲ作为供试品吸收液。

2.2.2.2 供试品溶液的制备取本品约200 mg,精密称定,置圆底烧瓶内,加水200 ml,玻璃珠数粒,烧瓶置电加热套内,连接挥发油测定器,自测定器上端加水至刻度3 ml,用移液管加入石油醚Ⅲ 2 ml,连接回流冷凝管,将烧瓶内溶液加热至微沸,并保持微沸2 h,冷却后弃去水相,将石油醚Ⅲ吸收液通过一个铺有约1 g无水硫酸钠的漏斗,滤至10 ml量瓶中,挥发油测定器内壁用少量石油醚Ⅲ洗涤,洗液与吸收液合并,精密加入内标溶液1 ml,用石油醚Ⅲ稀释至刻度,摇匀[1]。

2.2.2.3 提取条件考察分别称取8份样品(20040501),依法操作,按1、2、3、4 h不同提取时间,保持微沸提取挥发性成分。结果表明,加热微沸后保持2 h即可将样品中待测成分提取完全。结果见表1。

表1提取完全性试验结果(%)

Tab.1Results of extraction rate test (%)

2.3 线性关系考察

取薄荷脑对照品约250 mg与水杨酸甲酯对照品约425 mg,精密称定,置25 ml量瓶中,用石油醚Ⅲ溶解并稀释至刻度,摇匀,精密吸取上述溶液1、2、3、4、5 ml分别置10 ml量瓶中,精密加入内标溶液1 ml,用石油醚Ⅲ稀释至刻度,精密吸取各浓度对照品溶液1 μl,注入气相色谱仪中,依法测定。每份进样3次,取峰面积及浓度的平均值进行计算,以各组分峰面积与内标峰面积之比为纵坐标Y,各组分浓度与内标物浓度之比为横坐标X,绘制标准曲线,进行线性回归计算,回归方程为,薄荷脑:Y=0.800 90X-0.005 81,r=0.999 79;水杨酸甲酯:Y=0.526 83X-0.004 23,r=0.999 98。线性范围分别为1.003~5.016 mg/ml及1.720~8.598 mg/ml,表明各对照品浓度与其峰面积呈良好的线性关系。

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2.4 精密度试验

分别吸取薄荷脑、水杨酸甲酯混合对照品溶液1 μl,重复进样6次,结果薄荷脑RSD为0.63%,水杨酸甲酯RSD为0.45%,表明本法精密度良好。

2.5 阴性对照试验

分别取缺薄荷脑、水杨酸甲酯的阴性对照品及样品各200 mg,按供试品溶液的制备方法制备,摇匀。分别取1 μl注入气相色谱仪测定,各阴性对照品与样品比较在薄荷脑、水杨酸甲酯相应位置上,均无干扰现象。

2.6 稳定性试验

取供试品溶液,室温放置,分别按0、1、2、3、5、8 h时间点依法测定含量,结果薄荷脑含量的RSD为0.11%,水杨酸甲酯含量的RSD为0.17%,表明供试品溶液在8 h内基本稳定。

2.7 重复性试验

取同一批供试品,平行精密称取6份,依法测定含量,结果薄荷脑平均含量为14.1%,RSD为0.16%;水杨酸甲酯平均含量为24.1%,RSD为0.41%,表明本法重复性良好。

2.8 回收率试验

取本品5份(已知含量),每份约100 mg,精密称定,每份精密加入薄荷脑对照品15 mg与水杨酸甲酯对照品25 mg,置圆底烧瓶中,依法测定含量。结果薄荷脑平均回收率为98.4%,RSD为0.69%;水杨酸甲酯平均回收率为97.4%,RSD为0.78%;结果表明本方法具有良好的回收率,可用于活络膏中薄荷脑、水杨酸甲酯的含量测定。见表2、3。

表2活络膏中薄荷脑的加样回收率试验结果 *

Tab.2Results of the recovery of mentholum in Medicated Balm*

* 已知样品(批号:20080501)中薄荷脑的含量为14.0%

*The content of mentholum in the detected preparation (Batch No. 20080501) was 14.0%

2.9 样品测定

分别对三批样品进行测定,结果见表4。

表4样品含量测定结果

Tab.4The results of content determination of preparations

3 讨论

对于薄荷脑、水杨酸甲酯等成分的气相色谱分析,早期多采用填充柱分别测定[2],本文参照文献[3-10]采用毛细管色谱柱,以程序升温方式,一次进样可同时测定上述两种成分,方法简便,结果准确、分析快速。

干扰试验:分别取缺α-蒎烯、桉油精、樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯与麝香草酚的阴性对照品及样品各200 mg,按供试品溶液的制备方法制备,摇匀。分别取1 μl注入气相色谱仪测定,各阴性对照品与样品比较在α-蒎烯、桉油精、樟脑、薄荷脑、水杨酸甲酯与麝香草酚相应位置上,均无干扰现象。

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(收稿日期:2010-03-03)

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