HPLC法测定清火栀麦丸中脱水穿心莲内酯的含量测定

摘要：建立高效液相色谱法测定清火栀麦丸中脱水穿心莲内酯含量的方法。方法：采用Hy persil ODS C18 （ 250 mm ×4. 6 mm ， 5μm） 色谱柱， 脱水穿心莲内酯的流动相为甲醇：水 （ 55：45 ） ，检测波长为254nm。结果：脱水穿心莲内酯在 0.24 ～ 1.20 μ g 范围内与峰面积呈良好的线性关系， r2 =0.9999， 平均回收率 =97.69 % ， RSD = 1.63 %。结论 ：HPLC法能准、简、快地测定清火栀麦丸中脱水穿心莲内酯的含量。

关键词：清火栀麦丸 脱水穿心莲内酯 高效液相色谱法

1、前言

清火栀麦丸由穿心莲、栀子和麦冬三味中药制成的丸剂， 具有清热解毒、凉血消肿之功效， 主要用于咽喉肿痛、发热、耳痛、目赤。该制剂收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第16册， 但标准中没有定量测定项目。为有效地控制丸剂的质量， 本实验对方中主药穿心莲中的主要成分脱水穿心莲内酯采用反相高效液相色谱法进行测定。本方法操作简便、准确、重现性好， 可作为清火栀麦丸的定量测定方法。

2、实验仪器与设备

2.1 实验仪器：戴安 U3000高效液相色谱仪， UV 检测器，变色龙7.1化学工作站；SB3200 超声波清洗器；分光光度计（乐山欧氏分析仪器有限公司）；DZF-6020型真空干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）。

2.2 实验试剂：脱水穿心莲内酯对照品（ 批号 1354-9002， 中国药品生物制品检定所） ； 甲醇（色谱纯，彭州市泰山商贸有限责任公司）； 水为重蒸水，其余为分析纯； 清火栀麦丸（ 四川子仁制药有限公司） 。

3、方法与结果

3.1色谱条件： Hy persil ODS C18 （ 250 mm ×4. 6 mm ， 5 μm） 色谱柱； 流动相： 甲醇-水（ 55：45） ； 体积流量： 1.0mL/ min； 检测波长：254 nm； 进样量： 10μL； 柱温为室温。理论板数按脱水穿心莲内酯峰计不得低于2000。

3.2 溶液的制备

3. 2. 1 对照品溶液的制备： 精密量取0.4040/ml脱水穿心莲内酯对照品贮备液2.0mL， 置10mL 量瓶中， 加甲醇至刻度， 配成质量浓度为 80.80μg/ml 的溶液， 放置暗处， 作为对照品溶液。

3. 2. 2 供试品溶液的制备： 取本品内容物约1g ， 精密称定， 置具塞锥 形瓶中， 精密加入70%乙醇50mL， 浸泡1h， 超声30min， 滤过， 弃去初滤液， 精密量取续滤液10 mL， 置中性氧化铝柱（ 200～300 目， 5g ， 内径1.5cm） 上， 用甲醇15 mL 洗脱， 收集洗脱液，置50mL量瓶中， 加甲醇稀释至刻度， 摇匀， 用微孔滤膜（ 0. 45 μm ） 滤过， 取续滤液即得。

3.3 空白试验： 按处方比例自制缺穿心莲的阴性对照， 其中麦冬用水煮， 浓缩后与栀子粉混合， 取约2 g依照供试品溶液制备法制得阴性对照溶液。按上述色谱条件吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液， 分别注入色谱仪， 结果阴性对照对脱水穿心莲内酯的测定无干扰（ 图1） 。

* -脱水穿心莲内酯

-deh ydroan drograph olide

图1 脱水穿心莲内酯对照品（A）、清火栀麦胶丸（B）和阴性对照（C）的HPLC色谱图

Fig. 1 HPLC Chromatograms of dehydroandrographo-lide ref erence substance （A） ， Qinghuo ZhimaiCapsules （B） and negative sample （C）

3. 4 线性关系考察： 精密吸取质量浓度为 0.404mg/mL的脱水穿心莲内酯对照品贮备液0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mL， 分别置10mL量瓶中， 加甲醇稀释至刻度， 摇匀， 进样测定。以平均峰面积为纵坐标， 对应的质量浓度为横坐标， 绘制标准曲线图， 并求得线性回归方程为Y=25518X-10.278， r2=0.9999。结果脱水穿心莲内酯质量浓度为0.0101～0.3232 mg/mL时与峰面积呈良好的线性内与峰面积积分值呈良好的线性关系， r2=0.9999，平均回收率=101.09%，RSD为2.66% .结论HPLC法能准确、快速地测定清火栀麦丸中脱水穿心莲内酯的含量。

3.5 精密度实验：取脱水穿心莲内酯对照品溶液连续进样6次，测定峰面积，结果RSD为0.7%。

3.6 稳定性实验：取供试品溶液在24h内每隔4h进样1次，测定峰面积，结果脱水穿心莲内酯峰面积的RSD为0.6%（n=7），表明供试品溶液在暗处室温下24h内稳定。

3.7 重现性实验：取同一批（批号：040403）样品5份，制备供试品溶液，进样测定，脱水穿心莲内酯的平均质量分数为6.529mg/g，RSD为2.1%。

3.8 回收率实验：采用加样回收法。精密称取清火栀麦丸内容物约0.2g（含脱水穿心莲内酯约1.1mg），5份，分别精密加入脱水穿心莲内酯对照品约1.1mg，制备供试品溶液，测定，结果平均回收率为测试液，10ug进样测定，结果见表

4、讨 论

4.1 提取溶剂的选择：根据脱水穿心莲内酯的性质，供试品溶液分别采用50%甲醇、50%乙醇、70%乙醇提取，结果表明，用70%乙醇提取效果最好。

4.2 提取方式的选择：比较了供试品用70%乙醇冷浸1h和冷浸1h后再超过30min两种提取方式对测定结果的影响，结果以后者更佳。

4.3 清火栀麦丸为复方制剂， 方中干扰成分多。

4.4 分离纯化方式的选择：笔者曾尝试本品的70%乙醇提取溶液直接注入液相色谱仪，但发现溶液颜色较深，杂质峰极多，对色谱柱损坏交大，故对样品进行过程中性氧化铝柱处理，效果较好。

4.5 脱水穿心莲内酯在光的作用下易水解，故供试品溶液和对照品溶液宜放置暗处。

参考文献：

郭元吉. 流行性感冒病毒及实验技术[M].北京：中国三峡出版社.1997：100-110.

曾忆，女（1983年出生），主要从事中药制剂的研究，2何秀全，男（1981年出生），主要从事生物制剂的研究