HPLC法测定消炎利胆胶囊中脱水穿心莲内酯、穿心莲内酯的含量

【摘要】目的：建立消炎利胆胶囊中脱水穿心莲内酯、穿心莲内酯含量的HPLC测定方法。方法：色谱柱为Agilent C18（4.6mm×150mm，5μm）分析柱；流动相：甲醇一水（55：45）；流速：1.0ml・min-1；检测波长：脱水穿心莲内酯为254nm、穿心莲内酯为225nm；柱温：30℃。结果：线性范围为穿心莲内酯0.3030～2.0200μg（r=0.9998，n=5）；脱水穿心莲内酯0.5521～3.6809μg（r=0.9999，n=5）。两个成分平均回收率均在95%～105%之间。结论：方法可用于控制消炎利胆胶囊的质量。

【关键词】消炎利胆胶囊；穿心莲内酯；脱水穿心莲内酯；HPLC；含量测定

【中图分类号】R749.053【文献标识码】A【文章编号】1004-4949（2013）12-44-02

消炎利胆胶囊由穿心莲、苦木、溪黄草三味中药组成，其主要功能为清热、祛湿，利胆。用于肝胆湿热所致的胁痛、口苦；急性胆囊炎、胆管炎。穿心莲，为方中主药，其所含二萜内酯类成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯是其清热解毒、消肿止痛、抗菌和抗病毒的有效成分，原标准[1]收载的质量标准中只建立了脱水穿心莲内酯的含量测定方法，本论文同时选择穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯为控制该产品质量的定量指标，参考有关文献[2-4]，采用HPLC法建立其含量测定方法，该法简便、灵敏、准确、科学可行。

1仪器与试药

Waterse2695高效液相色谱仪；waters2998检测器；穿心莲内酯对照品（中国药品生物制品检定所，110797-200307）和脱水穿心莲内酯对照品（中国食品药品检定研究院，110854-201007，含量99.7%）；消炎利胆胶囊（哈尔滨一洲制药有限公司，规格：每粒装0.45g，批号：120204、120609、111201）；甲醇为色谱纯试剂，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件： 色谱柱：Agilent C18（4.6×150mm，5μm）分析柱；流动相：甲醇一水（55：45）；流速：1.0ml・min-1；检测波长：脱水穿心莲内酯为254nm、穿心莲内酯为225nm；柱温：30℃。进样量：10μl。理论板数按脱水穿心莲内酯峰计算均应不低于2000。

2.2供试品溶液的制备：

取本品装量差异项下的内容物4.5g，混匀，取约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5ml，置中性氧化铝柱（200～300目，4g，内径为1.5cm）上，用70%乙醇30ml洗脱，收集洗脱液，蒸至近干，加甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。

2.3线性关系考察：

取穿心莲内酯对照品10.10mg及脱水穿心莲内酯对照品18.46mg，置同一100ml量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，进样量3，5，10，15，20μl，依次注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积A对进样量C进行线性回归，结果表明穿心莲内酯进样量在0.3030～2.0200μg范围内与峰面积线性关系良好，回归方程为A=1823645.70C-215390.40，r=0.9998；脱水穿心莲内酯进样量在0.5521～3.6809μg范围内与峰面积线性关系良好，回归方程为A=1443580.51C-234502.75，r=0.9999。

2.4精密度试验：

精密吸取穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯混合对照品溶液10μL注入液相色谱仪，记录峰面积，结果穿心莲内酯RSD为0.5%（n=5），脱水穿心莲内酯RSD为0.75%（n=5）。

2.5稳定性试验：

取供试品溶液，于0、6、12、24小时分别精密吸取10μl注入液相色谱仪，记录色谱峰，结果穿心莲内酯RSD为1.40%；脱水穿心莲内酯RSD为1.35%。表明供试品溶液在24h内稳定。

2.6重复性试验：

取同一批号样品5份，按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，进样10μl测定含量，结果穿心莲内酯平均含量为14.18mg・g-1，RSD为1.05%；脱水穿心莲内酯平均含量为9.58mg・g-1，RSD为1.45%。

2.7回收率试验：

取已知含量的本品内容物（批号：121204），精密称取适量，分别精密加入穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品适量，按2.2项下的方法制成所需溶液，并按上述色谱条件测定含量，计算回收率，结果穿心莲内酯平均回收率为99.02%，RSD为1.28%；脱水穿心莲内酯平均回收率为100.94%，RSD为1.54%。

2.8阴性干扰试验

分别取混合对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μl，按上述色谱条件测定含量。结果在此色谱条件下，供试品中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯与其他组分达到基线分离，阴性组分无干扰。结果见图1。

2.9样品含量测定

取样品3批，依法测定含量，结果见表1。

3讨论

3.1作者曾采用参考文献[3]中254nm为检测波长，分析比较试验结果后选择本文中脱水穿心莲内酯254nm、穿心莲内酯225nm为检测波长，后者峰面积为最大吸收，且分离度较好，结果更准确。

表1 消炎利胆胶囊样品的测定结果（n=3）

3.2作者曾采用waters2489、waters2998检测器分别测定含量。建议采用多波长或二极管阵列检测器，可设定双波长同时检测穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯，操作简便，节省化学试剂，省时且减少仪器损耗。

参考文献

[1]国家食品药品监督管理局国家药品标准[S].WS3-135（Z-135）-2002（Z）2004.45

[2]中国药典[S].2010年版.一部.1031

[3]田桂红.反相高效液相色谱法测定莲芝消炎片中脱水穿心莲内酯、穿心莲内酯的含量[J].江西中医药，2009，40（321）：72-73