HPLC法测定复方穿心莲片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量

摘 要 目的：建立测定复方穿心莲片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量的方法。方法：采用HPLC法，色谱柱Phenomenex Gemini 5u 250mm×4.6mm C18柱，甲醇-水(52:48)为流动相，流速1.0ml/分，检测波长：穿心莲内酯为225nm，脱水穿心莲内酯250nm。结果：穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯分别在0.236～2.360μg和0.1528～1.5280μg与峰面积线性关系良好；平均回收率分别为101.57%和98.37%，RSD分别为0.12%和1.02%。结论：本法操作简便、准确，能有效地控制该制剂的质量。

关键词 复方穿心莲片 穿心莲内酯 脱水穿心莲内酯 高效液相色谱

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.07.024

复方穿心莲片由穿心莲、路边青两味中药组成，收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第19册，具有清热解毒、利湿之功效。用于治疗风热感冒、咽喉疼痛、湿热泄泻［1］。穿心莲的高效液相测定方法报道很多［2］，复方穿心莲片的高效液相单测定穿心莲内酯含量或脱水穿心莲内酯含量亦有报道［3］，但关于复方穿心莲片用高效液相测定方法同时测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量尚无报道［4］。本实验采用HPLC法对复方穿心莲片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量进行测定。结果表明，本法准确、精密、重现性好。

仪器与试剂

LC-10A高效液相色谱仪及SPD-10A紫外检测器，HL-3000色谱工作站。

穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品由中国药品生物制品检定所提供。复方穿心莲片由贵港市冠峰制药有限公司提供。甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂为分析纯。

方法与结果

色谱条件：色谱柱：C18(Phenomenex Gemini 5u 250mm×4.6mm)；流动相：甲醇-水(52:48)；检测波长：穿心莲内酯为225nm，脱水穿心莲内酯250nm；体积流量1ml/分；柱温30℃；进样体积20μl。

系统适用性试验：理论塔板数按穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯分别计算，均应不低于2000，该峰与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5，对称因子分别小于1.15和0.95。同条件下分析阴性供试液，其他药味成分不干扰测定。色谱图，见图1。

对照品溶液的制备：精密称取穿心莲内酯对照品29.5mg、脱水穿心莲内酯对照品19.1mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液(穿心莲内酯0.295mg/ml、脱水穿心莲内酯0.191mg/ml)。

供试品溶液的制备：取复方穿心莲片20片，除去糖衣，精密称定，研细，取细粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理40分钟(功率120W，频率40kHz)，放至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，加在中性氧化铝柱(200～300目，5g，内径1.5cm)上，用甲醇20ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。

阴性对照溶液的制备：按处方自制不含穿心莲的复方穿心莲片200g，按供试品溶液的制备项下方法制备阴性对照溶液。

标准曲线的绘制：分别精密吸取穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯储备液1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml、10.0ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进样20μl进行测定，以峰面积(Y)对质量浓度(X)作回归计算，分别得回归方程为Y=2112180，X+29046.3，(r=1.0000)和Y=1678601，X-8382.0，(r=1.0000)。穿心莲内酯线性范围：0.236～2.360μg，脱水穿心莲内酯线性范围：0.1528～1.5280μg。

精密度试验：精密吸取同一份供试品溶液20μl，重复进样6次，分别测定峰面积，计算，结果穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰面积RSD分别为0.09%和0.21%。

重现性试验：精密称取样品6份，按供试品溶液的制备项下方法平行制备，进样分析，测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量，计算得RSD分别为0.12%、1.02%。

稳定性试验：取同一批供试品溶液，室温放置，分别在0、12、24、36及48小时、60小时测定峰面积。结果表明供试品溶液在60h内稳定，RSD分别为0.11%和0.23%(n=6)。

回收率试验：采用加样回收法。精密称取已知含量的复方穿心莲片粉约0.5g，精密加入对照品(穿心莲内酯0.07375mg/ml、脱水穿心莲内酯0.04775mg/ml)25ml，同法提取测定，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的平均回收率分别为101.57%、98.37%(n=6)。

样品测定：精密吸取供试品溶液20μl，按上述色谱条件测定。结果复方穿心莲片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量，见表1。

讨 论

本实验曾参照中国药典2005年版穿心莲、穿心莲片的提取方法直接用乙醇、甲醇浸泡并超声提取样品，但杂质过多，污染色谱柱，且穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯与其他物质无法分离。参照并改进文献提取方法［5］。本法分离效果好、灵敏、准确，可作为该制剂质量检测的方法，提高药品质量可控性，确保临床用药的有效性。

参考文献

1 《卫生部药品标准》中药成方制剂第19册,1998.

2 中国药典.2000年版一部.

3 郭世明,吴泽君.高效液相色谱法测定复方穿心莲片中穿心莲内酯的含量.药物分析杂志,2002,2(24).

4 黄乃展.高效液相色谱法测定复方穿心莲片中脱水穿心莲内酯含量.中国药业,2006,9:36-37.

5 董海荣,鲁静,等.穿心莲及消炎利胆片中内酯类成分的含量测定［J］.中成药,1999,21(1):11.