石荠属植物酚性物质组成及抗氧化活性研究

摘 要：目的：研究石荠属植物酚性组成及抗氧化活性。方法：在测定其提取物中酚性物质含量的基础上，采用分光光度法，测定石荠属植物对DPPH、脂质过氧化的消除能力和总还原力，并通过多元线性回归分析，考察了石荠属植物体外抗氧化活性及酚性物质含量的相关性。结果：石荠属植物均具有显著的抗氧化活性，且自由基清除率与各提取物中总黄酮含量呈正相关。结论：黄酮类化合物可能是其抗氧化作用的主要物质基础。

关键词：石荠属；黄酮；抗氧化活性

中图分类号：R285.5

文献标识码：A文章编号：

1673-7717（2008）11-2442-03

Study on Phenolic Components and Antioxidant Activity of Mosla

LU Peihui,YU Chenhuan,YU Bing，WU Qiaofeng

（College of Pharmacy,Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou 310053,Zhejiang,China）

Abstract：Objective:To study the phenolic components and the antioxidant activity in vitro of Mosla.Methods:Using the Spectrophotometry to test phenolic components in the extracts to study the radical scavenging capacity of DPPH,lipid peroxidation and the total reducing power of Mosla.Then it was surveyed the correlation between the phenolic components and the antioxidant activity by the multiple linear regression analysis.Results:The extracts all showed good antioxidant activities and the free radical efficiency had a positive correlation with the flavone contents.Conclusion:The flavone may be the main material of antioxidant activity.

Key words：mosla;flavone;antioxidant activity

石荠属(Mosla)系唇形科植物，为多年生草本。全世界约有22种，我国有12种，1变种，主要集中在长江流域以南各地。全草含挥发油、黄酮等成分，具有清热解毒、理气化湿之功效，主治夏日感冒、腹痛泄泻、扁桃体炎等[1]。经课题组前期研究表明，该属植物具有抗菌、抗流感病毒、抗炎镇痛等作用[2]，而这些作用的发挥亦与自由基的参与有关[3]。但有关其抗氧化方面的研究尚未见报道。为了合理利用该植物资源并确定其主要抗氧化活性成分，本文对该属植物水提物和醇提物进行了体外抗氧化研究。现报道如下。

1 仪器和试药

1．1 仪器

BS224S精密电予天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)，TU-1900双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)，KO-5000超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)。

1．2 试剂和材料

杭州荠、石荠采自浙江杭州，石香薷、苏州荠和小鱼仙草采自浙江浦江，经浙江中医药大学资源鉴定教研室姚振生教授鉴定，分别为唇形科植物杭州荠Moslahangchowensis Matsuda、石荠M.scabra、石香薷Mchinensis Maxim、苏州荠Msoochowensis Matsua、小鱼仙草M.dianthera Maxim．。芦丁、原花色素、没食子酸(中国药品生物制品检定所)；大豆卵磷脂、DPPH(sigma公司)。其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 提取物的制备[4]

石荠属5种植物分别干燥粉碎。①加20倍量水80℃恒温水浴回流提取2次，每次1h，浓缩至干，得水提物，真空备用；②加20倍量75％乙醇80℃恒温水浴回流提取2次，每次1h，浓缩至干，得醇提物，真空备用。

2．2 石荠属植物中酚性物质的含量测定[4-5]

采用香草醛／硫酸比色法，以原花色素为标样制作标准曲线，测定石荠属植物中原花色素含量；采用碱式铝盐比色法，以芦丁为标样制作标准曲线，测定其总黄酮含量；采用FeCl3-K3Fe(CN)6比色法，以没食子酸为标样制作标准曲线，测定其总酚含量。

2．3 抗氧化活性实验[6-7]

2．3．1 清除自由基活力

取提取物适量，加入25μg／mL DPPH甲醇溶液3mL，快速混匀，30min后测定在516nm处的吸光度，按公式计算自由基清除率：清除率(％)=(1-［DPPH］t／［DPPH］t＝0)×100％

其中［DPPH］t＝0表示0时刻体系的吸光度：［DPPH]t表示30min时体系的吸光度。

2．3．2 还原力测定

取提取物适量，加入磷酸缓冲液(0．2M，pH6．6)1．5mL及1％铁氰化钾溶液1mL，50℃保温20min后，加入10％三氯乙酸1mL混匀，加蒸馏水2．5mL及0．1％三氯化铁0．1mL。在700nm处测定反应液吸光度值。吸光度值越大，表示还原力越强。

2.3．3 脂质体氧化法

将大豆卵磷脂分散于去离子水中，20kHz超声波处理30min，周围以冰水冷却，制得大豆磷脂浓度为0．8％的人工脂质体。取20mL脂质体，加入提取物，以10mM乙酸铜20μL催化氧化反应，混匀后放置于回转式恒温水浴振荡器上，于暗处37℃、100r/min进行开口氧化，每隔一定时间测定共轭二烯氢过氧化物及丙二醛生成量。

共轭二烯氢过氧化物(Conjugated diene hydroperoxide,CD)的测定：取1mL氧化液，溶于3mL甲醇，在235nm处测定其吸光度，以摩尔消光系数ε=26000M-1•cm-1计算脂质体体系中共轭二烯氢过氧化物的生成量。

丙二醛(malondialdehyde，MAD)的测定：取1．5mL氧化液，加入1mLMAD溶液，测定在532nm处的吸光度，以摩尔消光系数ε=1．56×105M-1•cm-1计算丙二醛的生成量。

抗氧化效果用抑制率表示：

抑制率(％)=(1-处理组氧化产物生成量／空白组氧化产物生成量)×100％。

以上结果见表1及图1～3。

由表1和图1～3可知，石荠属植物各提取物均具有较强的抗氧化活性，可提高自由基的清除率，促进Fe3+的还原和抑制卵磷脂氧化产物的生成。其中，石荠的抗氧化作用最强。其水提物和醇提物均可显著抑制羟自由基的产生，延长CD生成的峰值时间(较其他各提取物CD生成的峰值时间从24h延长至48h)，减少同期各时段MDA的生成量。

2．4 酚性物质组成与抗氧化活性相关性分析

以原花色素(X1)、总黄酮(X2)和总酚(X3)含量为横坐标，DPPH自由基清除率(Y)为纵坐标，采用SPSS11．5软件对表1结果进行线性关系考察，得方差分析表(表2)和回归标准残差正态P-P图(图4)。

由表2和图4可知，P

由表3可知，石荠属植物酚性物质含量对自由基清除率的总体回归方程为：Y=57．536-13．294X1+0．322X2+2．022X3。

为消除度量单位的影响，进一步采用标准化计算，得标准化回归方程：Y=-0．265X1+0．866X2+0-359X3。

在95％可信区间内，线性相关系数R＝0．9127。证明回归方程真实、可靠，具有统计学意义。可用于替代实验点对实验结果进行分析，并对回归方程各项作显著性检验。

其中，原花色素及总酚含量对自由基清除率的影响P>0．05，无显著性差异。而总黄酮含量P

同法，对石荠属植物提取物与还原力、抗脂质体氧化作用进行相关性研究，结果表明，两者的相关性均较差（R2≤0．6，P>0．10），无统计学意义。

综上所述，石荠属植物体外抗氧化作用可能与其总黄酮含量有关，但水提物与醇提物的清除自由基活力不相一致，可能与各提取物所含具体的黄酮类成分有关，有待进一步研究。

3 讨 论

自由基是生物体生化反应的普遍介质。现代研究表明，许多疾病如心脑血管疾病、肝硬化、癌症以及人体衰老等过程都与自由基的作用有关[8]。目前在医疗和食品领域使用较多的是合成抗氧化剂，如BHT、BHA等，对生物体有潜在的毒副作用。黄酮类化合物是一种天然的抗氧化剂，具有抗衰老、增强机体免疫力的作用。其主要通过酚羟基与自由基进行抽氢反应生成稳定的半醌自由基，从而中断链式反应，达到抗氧化作用，且高效、低毒[9]。因此，越来越受到国内外医药工作者的重视。

本实验研究表明，石荠属植物均具有较强的还原力、抗脂质体氧化和清除自由基等作用，且自由基清除率与各提取物中总黄酮含量呈正相关。黄酮类化合物可能是其抗氧化作用的主要物质基础。可为石荠属植物的开发利用及其药理作用机制的研究提供参考。

参考文献

［1］ 中国科学院《中国植物志》编辑委员会．中国植物志［M］.北京：科学出版社出版，1997：287-293．

［2］ 吴晓宁，吴巧风，陈京.浙江产石荠属植物研究进展［J］.浙江中医学院学报,2005,29(4)：92-94.

［3］ Oda T,Akaike T，Hamamoto T，et al．Oxygen radicals in polymer-conjugated influenza-induced pathogenesis and treatment with pyran SOD［J］.Science,244(10)：974-976．

［4］ 楼小红，吴巧风，何佳奇，等．杭州石荠总黄酮的提取工艺研究［J］．中华中医药杂志，2007，22(7)：486-488．

［5］ 付煜荣，张万明，陈桂敏，等．景天三七中没食子酸和总酚酸含量测定［J］．中成药，2006，28(7)：1016-1018．

［6］ Jayaprakasha GK，singh RP,Sakariah KK．Antioxidant activity of grape seed(Vitis vinifera)extracts on peroXidation models in vitro［J］.Food Chem,2001，73：285-290．

［7］ 樊金玲，丁霄霖．沙棘籽提取物抗氧化活性与酚类组成的研究［J］．天然产物与开发，2006，18(4)：529-534．

［8］ Fang Y Z，Yang S．Free Radicals,Antioxidants，andNutrition［J］．Nutrition，2002，18(10)：872．

［9］ 黄富远，高明，楼云雁．黄酮类化合物的研究概况［J］．中华中医药学刊，2007，25(8)：1730-1732．