虎杖水提取物对大鼠离体胸主动脉环的舒张作用及机制

【摘 要】目的：探讨虎杖水提取物对大鼠离体胸主动脉环的舒张作用及其机制。方法：建立大鼠离体主动脉环灌流模型，观察虎杖水提取物对1.0?mol/L苯肾上腺素（PE）预收缩的内皮完整血管环和去内皮血管环的舒张作用，并观察左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME）和亚甲蓝（MB）预处理对虎杖水提取物的舒张血管作用的影响。结果：虎杖水提取物（0.1，0.3mg/ml）对大鼠离体内皮完整胸主动脉环具有浓度依赖性的舒张作用；左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME）（0.1mmol/L）和亚甲蓝（MB）（10?mol/L）预处理可抑制虎杖水提取物的舒张作用。结论：虎杖水提取物对大鼠离体胸主动脉环具有内皮依赖性舒张血管作用，其可能机制是主要通过NO-cGMP途径介导

【关键词】血管舒张；虎杖；主动脉，胸；大鼠

【中图分类号】R456.3 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2012）13-0030-02

虎杖（Polygonum cuspidatum Siieb.et Zucc.）为廖科廖属多年生草本植物，药用部位为根及根茎.虎杖始载于《名医别录》，其主要含蒽醌类、二苯乙烯类、黄酮类等多酚性化合物[1].文献报道虎杖具有活血定痛、清热祛湿、解毒消肿、止咳化痰等功效，临床已用于高血压、心绞痛和冠心病等的治疗[2，3].但虎杖本身对血管的舒张作用及机制研究目前尚不多见.本研究拟通过大鼠离体胸主动脉环实验观察虎杖水提取物对血管的作用，并初步探讨其相关的作用机制

1材料

准确称取虎杖（根及根茎）200g，加入蒸馏水2L，在80℃温度煮沸2h，过滤减压浓缩干燥而得14.21g粉末.苯肾上腺素（phenylephrine，PE）、乙酰胆碱（acetylcholine，Ach）、左旋硝基精氨酸甲酯（Nω-nitro-L-arginine methyl ester，L-NAME）和亚甲蓝（methylene blue，MB）均为美国Sigma公司产品（Sigma ChemicalCo.，St.Louis，MO，USA）。其余试剂为市售分析纯.实验实验动物选用SD大鼠，雄性，体重为250-300g，由延边大学医学部实验动物科提供.生理性营养液成分（Kreb’s营养液）为氯化钠115.0mmol/L、氯化钾4.7mmol/L、氯化钙2.5mmol/L、氯化镁1.2mmol/L、碳酸氢钠25.0mmol/L、磷酸二氢钠1.2mmol/L和葡萄糖10.0mmol/L组成。pH值为7.4.SQG-4型四腔器官浴槽系统、HSS-1（B）型恒温浴槽及RM6240BD型多道生理信号采集处理系统均为成都仪器厂产品

2方法与结果

2.1大鼠离体胸主动脉环的制作腹腔注射给予大鼠3g/L戊巴比妥钠50mg/kg，待麻醉后打开胸腔，迅速分离胸主动脉.将取下的胸主动脉置入4℃的Kreb’s营养液中，小心去除血管周围的脂肪及结缔组织，将动脉剪成4mm长的血管环，操作过程中避免过度牵拉，以防损伤内皮.根据实验需要，去除血管内皮时，使用小镊子轻轻地磨擦血管环内表面，以去除内皮细胞.将血管环悬挂于经37℃预热的容量为20mL的盛有Kreb’s营养液的浴槽内，一端固定，另一端通过张力换能器连接至RM6240BD型多道生理信号采集处理系统，持续通以含有95mL/L氧和5mL/L二氧化碳的混合气体，将静息张力逐渐调节至2.0g，在37℃下稳定1h，期间每15min换液1次.用50mmol/L氯化钾刺激达峰值，用Kreb’s营养液冲洗3次，以诱发血管环的最大收缩幅度.待动脉环稳定后，换液1次，向浴槽中加入苯肾上腺素1.0?mol/L，收缩达峰值15min后，加入乙酰胆碱1.0?mol/L，若加入乙酰胆碱后使苯肾上腺素预收缩的血管舒张60～90%，可认为内皮完整，反之则认为去内皮

2.2统计学处理实验数据以均数±标准偏差（X±SD）表示，并采用t检验及ANOVA法进行统计学分析

2.3虎杖水提取物对苯肾上腺素引起的胸主动脉环预收缩的影响取雄性大鼠40只，随机分为5个组，即对照组、内皮完整虎杖水提取物大、小剂量组和去内皮虎杖水提取物大、小剂量组，每组各为8只。剖取各组大鼠胸主动脉制作内皮完整和去内皮胸主动脉环，加入1.0?mol/L苯肾上腺素，待血管环收缩稳定后，分别向内皮完整虎杖水提取物大、小剂量组和去内皮虎杖水提取物大、小剂量组的浴槽内累计加入0.1，0.3mg/ml虎杖水提取物，向对照组内加入20mLKreb’s营养液，观察血管环的舒张反应，计算虎杖水提取物各剂量组血管环的舒张百分比。舒张百分比=（苯肾上腺素作用后血管张力-虎杖水提取物给药后血管张力）/苯肾上腺素作用后血管张力x100%。本实验结果显示，内皮完整虎杖水提取物大、小剂量组血管环舒张百分比为62.21±14.63%和45.14±4.19%；去内皮虎杖水提取物大、小剂量组血管环舒张百分比为5.57±4.92%和0.84±0.54%.虎杖水提取物对内皮完整血管的舒张作用明显强于去内皮血管（p

2.4左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME）和亚甲蓝（MB）预处理对虎杖水提取物舒张血管作用的影响取雄性大鼠24只，随机分为3个组，即对照组、L-NAME组和亚甲蓝组，每组各为8只。剖取各组大鼠胸主动脉环制作内皮完整血管环，对照组用1.0?mol/L苯肾上腺素预处理，L-NAME组和亚甲蓝组分别用0.01mmol/LL-NAME和10?mol.L-1亚甲蓝预处理，观察0.1mg/ml虎杖水提取物的舒张血管环作用.结果表明，对照组、L-NAME组和亚甲蓝组血管环的舒张百分比分别为62.36±12.21%，7.36±10.21%，8.24±10.12%，提示用L-NAME和亚甲蓝预处理对虎杖水提取物的舒张血管作用明显被减弱，与对照组比较均有显著性差异（p