不同水飞蓟素制剂的人体药动学研究

[摘要] 目的 制备水飞蓟素固体分散体胶囊剂，考察不同水飞蓟素制剂的体外溶出度和人体药动学特性。 方法 采用溶剂法和熔融法制备水飞蓟素固体分散体 ，并进行不同水飞蓟素制剂体外溶出度和人体药动学研究。 结果 制备的水飞蓟素固体分散体胶囊剂的溶出度和生物利用度均高于市售的国产的益肝灵片和进口的利肝隆胶囊。 结论 水飞蓟素固体分散体胶囊剂能够显著提高水飞蓟素的生物利用度。

[关键词] 水飞蓟素；固体分散体；益肝灵片；利肝隆胶囊；药动学；生物利用度

[中图分类号] R94 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）07（a）-0028-03

水飞蓟素（Silymarin）是在菊科植物水飞蓟中提取的一种黄酮类化合物，具有肝脏靶向性。在体内主要是以与血浆蛋白结合的形式存在[1]。水飞蓟素具有多种药理学活性，如保肝[2]、抗氧化[3]、降血脂、稳定肝细胞膜[4]、清除自由基[5]、抗辐射[6]、抗胃溃疡[7]等作用。水飞蓟素具有低毒，无诱变和无致畸的作用，但是由于水飞蓟素的水溶性差，生物利用度低，影响了其临床应用。固体分散体（SD），是一种新型的分散体系，是将难溶性的药物分散于固体载体中的分散体系，最终以固体的形式存在。目前已经得到了广泛的应用。本研究是制备水飞蓟素的固体分散体胶囊，并与现在上市的国产的益肝灵片和进口的利肝隆胶囊共同进行体外溶出度和人体药动学研究，目的在于提高水飞蓟素的生物利用度。

1 仪器与试药

原料药水飞蓟素（湖北大仝生物化工科技有限公司）；市售益肝灵片（上海朝晖药业有限公司）；市售进口利肝隆胶囊（德国马博士大药厂）；泊洛沙姆188（F68，德国BASF公司）；PVPK15、K30（德国BASF公司）；PEG6000（德国BASF公司）；FODT-601光纤药物溶出度实时测定仪（上海富科思分析仪器有限公司）；752型紫外光分光光度计（南京麒麟分析仪器有限公司）。

2 方法与结果

2.1 固体分散体胶囊剂的制备

2.1.1 体外分析方法的建立 取干燥至恒重的水飞蓟素适量，配置成适当浓度的乙醇溶液，以乙醇作空白，在200～400 nm波长范围内进行紫外扫描，发现在286 nm处有最大吸收，故以286 nm为测定波长。

取水飞蓟素的乙醇溶液适量，分别配制成0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00 μg/mL的水飞蓟素水溶液，以9 mL蒸馏水加1 mL乙醇作为空白，在286 nm波长处测定吸收度，以浓度对吸收度进行线性回归，得到线性回归方程为C=29.416A+0.1587；线性相关系数r=0.9999；线性范围为0.25～8.00 μg/mL。

2.1.2 溶剂法制备水飞蓟素固体分散体 将不同比例的原料药水飞蓟素和泊洛沙姆188等辅料分别用80%无水乙醇溶液溶解、混合、超声后，用旋转蒸发仪干燥，干燥后取出干燥物质放入烘箱内烘干24 h；取出后研磨，过80目筛后保存至干燥器内备用。

2.1.3 熔融法制备水飞蓟素固体分散体 将不同比例的原料药水飞蓟素和泊洛沙姆188等辅料混匀后加热至熔融，后立即转至冰浴内，并不断搅拌，使之迅速冷却成固体，之后放入冰箱内2 h，然后转移至干燥器内，放置24 h，取出后研磨，过80目筛后保存至干燥器内备用。

2.1.4 不同辅料制备的水飞蓟素固体分散体溶解度的测定 配制自制的不同辅料的水飞蓟素固体分散体及原料药水飞蓟素的饱和水溶液，以蒸馏水作空白，在286 nm波长下测定吸光度，得到水飞蓟素原料药、水飞蓟素PEG6000（1∶4）、水飞蓟素-泊洛沙姆188（1∶4）的平衡溶解度分别为0.385、 17.235、19.986 mg/mL。由结果可知，PEG6000和泊洛沙姆188制备的水飞蓟素固体分散体的溶解度均较原料药水飞蓟素有较大的提高，考虑到泊洛沙姆188的毒性较小，故选择泊洛沙姆188作为水飞蓟素固体分散体的辅料。

2.2 不同水飞蓟素制剂的溶出度的测定

溶出度实验中自制的水飞蓟素固体分散体是以胶囊剂的形式进行的，本文是以固体分散体的制备和人体药动学为主，所以胶囊剂的制备将在其他文中做详细的论述。将自制固体分散体胶囊、市售益肝灵片和市售进口利肝隆胶囊各3粒，按照《中国药典》2010年版二部附录X C第二法，分别以0.1 mol/L盐酸、蒸馏水、pH值6.8缓冲盐900 mL作为溶出介质，转速为100 r/min，依法操作，分别在5、10、15、30、45、60 min时，取出溶液，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液按“2.1.1”项下方法测定溶液浓度，计算出累积溶出量。溶出曲线见图1～3。

由图1～3可知，自制固体分散体胶囊中水飞蓟素的溶出不受溶出介质的影响，且在3种不同溶出介质中50 min内的溶出度均超过80%，而市售益肝灵片和市售进口利肝隆胶囊在0.1 mol/L盐酸、蒸馏水、pH 6.8缓冲盐中1 h时溶出度不超过50.0%。由溶出结果可知，自制的固体分散体胶囊的溶出度远远超出两种市售制剂。

2.3 不同水飞蓟素制剂的人体药动学研究

选择20～30岁之间健康志愿者18名，男女比例各半，随机分成3组，每组6名志愿者，空腹后，分别服用市售益肝灵片、市售进口利肝隆胶囊及自制固体分散体胶囊。于用药后0.25、0.50、1.00、1.50、2.00、4.00、8.00、12.00 h取静脉血5 mL。采用高效液相法测定健康志愿者口服不同制剂后不同时间点血浆中水飞蓟宾的浓度，计算出药动学参数。

2.3.1 血浆样品的处理方法 在10 mL具塞离心试管中加入精密量取的血浆样品1.0 mL，0.2 mL 0.1 mol/L磷酸二氢钠，6 mL乙醚，置于涡旋上振荡5 min，5000 r/min离心5 min，取上清液至10 mL离心试管中，常温下氮气吹干，加入0.1 mL流动相复溶，离心，取上清液20 μL，液相测定。

2.3.2 体内分析方法的建立 采用HPLC 法。色谱柱：Dikma Diamonsil C18 ODS柱（200 mm×4.6 mm，0.5 μm），流动相：甲醇-水（体积比55∶45，用冰醋酸pH值至4.2），检测波长：286 nm，流速：1.0 mL/min。精密称定干燥后的水飞蓟素对照品10.02 mg，置于一25 mL棕色容量瓶中，加流动相定容配制浓度为400 mg/L的溶液作为对照品储备液。精密量取不同体积的储备液于10 mL容量瓶中，加流动相稀释，定容，摇匀，配制一系列浓度的溶液，取空白血浆l mL至10 mL离心试管中，加入适量系列标准溶液，配制相当于血浆浓度为0.016、0.032、0.064、0.128、0.256、0.512 mg/mL的溶液，按照“2.3.1”项下方法处理血浆样品，取20 μL进样，测定峰面积。以峰面积（A）对浓度（C）进行线性回归，得水飞蓟素线性回归方程为A=2.25×104C-6.25×104（r=0.9996），线性范围为16.0～512.0 mg/L，平均回收率为99.2%，RSD为0.44%，符合方法学要求。

2.4 结果

分别服用三种制剂后药动学参数见表1。

由表1可知，以市售益肝灵片为参比制剂，市售利肝隆胶囊的相对生物利用度为131.8%，自制的固体分散体胶囊剂的相对生物利用度分别为200.1%，显著高于两种市售制剂，因此所制备的固体分散体胶囊剂显著提高了水飞蓟素的生物利用度。

3 讨论

药物在固体分散体载体中存在的粒径在1～100 μm之间，主要应用于增加水溶性低的药物的溶解度，进而提高其溶出度，最终提高该药物的生物利用度。根据固体分散体释药性能的不同，可以将固体分散体分为靶向型、缓（控）型和速释型三类固体分散体，其中速释型固体分散体的应用更为广泛，本文研究的为速释型固体分散体。固体分散体的载体也包括三类，包括水溶性、肠溶性和水不溶性载体，常用载体主要有聚乙二醇（PEG）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、泊洛沙姆、聚乙烯氧化物（PEO）、混合脂肪酸、甘露醇和修饰的卡拉雅胶（MGK）等。本文以溶解度为指标，兼顾到泊洛沙姆188的毒性较低，最后选择泊洛沙姆188为固体分散体制剂的载体。

水飞蓟素是一种类黄酮，主要存在于菊科植物水飞蓟的种子中，有3种同分异构体，分别为水飞蓟宾（Silybin）、水飞蓟宁（Silidianin）和水飞蓟丁（Silichristin），其中水飞蓟宾还有一种同分异构体为异水飞蓟宾（Isosilybin）。于乐成等[8]对水飞蓟素的药理学效应有过详细的阐述，认为水飞蓟素有清除活性氧，保持细胞膜的流动性，防止脂质过氧化的药理学活性；具有防止产生一氧化氮，并控制期与氧离子发生反应的药理活性；具有抑制氧脂结合酶活性的药理学活性；具有保护肝细胞膜并促进肝细胞的修复和再生的药理学活性。

目前水飞蓟素的剂型主要包括片剂、胶囊剂和注射剂三类。目前对水飞蓟素的研究主要有水飞蓟素磷脂复合物[9]，水飞蓟素环糊精包合物[10]，水飞蓟素注射剂等[11]。综合考虑患者的顺应性，毒性，经济性等因素，水飞蓟素固体分散体胶囊剂值得临床推广。

不同剂型的水飞蓟素的溶出度和人体药动学的研究在国内外尚未见报道，本文以泊洛沙姆188为载体，分别采用溶剂法和熔融法制备的水飞蓟素固体分散体，可以显著提高水飞蓟素的溶出度。水飞蓟素/泊洛沙姆188固体分散体胶囊剂、市售益肝灵片和进口的利肝隆胶囊志愿者口服给药后，水飞蓟素固体分散体的生物利用度有了很大程度的提高，其在体内的吸收过程和吸收机制将在其他文章中做进一步研究。本研究结果为今后水飞蓟素剂型的进一步改进和临床实验创造了条件。水飞蓟素固体分散体胶囊剂制备过程简单，毒性小，成本低，且大幅度地提高了水飞蓟素的生物利用度，因此市场前景广泛。

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（收稿日期：2013-01-21 本文编辑：卫 轲）