栀子金花汤不同拆方组合方式下黄芩苷、栀子苷的含量变化

摘要：目的 考察栀子金花汤不同拆方组合黄芩苷、栀子苷的含量变化。方法 水煎煮法制备不同配伍样品，超声处理法提取黄芩苷、栀子苷，反相高效液相色谱法测定黄芩苷、栀子苷的含量。结果 黄芩苷含量3.145%～4.067% ，栀子苷含量3.652%～4.626%，原方五药同含的组合，黄芩苷提取率相差可达29%，栀子苷提取率相差可达27%。结论 配伍不同对黄芩苷、栀子苷的溶出当黄连、黄柏与黄芩合煎时会使黄芩苷的溶解起抑制作用，但是当全方合煎时就会提高其溶解性，可能在合煎过程中产生了增溶、助溶作用。在合煎时，只要存在栀子和黄芩，对栀子苷就有增溶作用，当栀子单独与黄连、黄柏合煎时，对栀子苷的溶解有抑制作用。

关键词：栀子金花汤；拆方；黄芩苷；栀子苷

栀子金花汤出自《医综金鉴·杂病心法要决》，由栀子、黄连、黄芩、黄柏、大黄组成，具有泻火解毒之功效，主治实热火毒、三焦热盛之证兼大便秘结者。中药合煎液和分煎液的药效学和临床对比研究已有报道，但其化学组成研究报道较少[1，2]。用分煎法与合煎法制备的中药复方汤剂，其有效成分含量有何变化，一直是中医药理论和临床实践中值得探讨的课题，特别是近年来单味中药配方颗粒逐渐在临床上推广应用，更引起对这一课题研究的兴趣。本文以栀子金花汤中黄芩苷、栀子苷为主要成分，探索中药复方汤剂不同配伍组合对其有效成分溶出量的影响，对单味中药配方颗粒应用于临床提供一些理论依据。

1 仪器与试药

仪器 美国惠普HP1100 型高效液相色谱仪（DAD 检测器，VWD检测器，自动进样器，柱温箱，真空脱气机，四元泵）。HP1100/ WIND3D 化学工作站。

试药 黄芩苷对照品（批号：715-200010）、栀子苷对照品（批号：749-200108）均购于中国药品生物制品检定所。乙腈为色谱纯；甲醇，磷酸，三乙胺，四氢呋喃均为分析纯；水为纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

黄芩苷：色谱柱为Agilent Extend C18 （5?m，4.6×250mm），柱温：28℃，流速：

1mL·min-1 ，乙腈-[H2O-THF-H3PO4（80：10：0.2）][26：74（0-7 min）-----50：50（7-12min走梯度）]为流动相， DAD检测波长：274nm。

栀子苷：色谱柱为Phenomenex Luna C18柱（250 mm ×4.6 mm，5?m ），乙腈-水（15∶

85）为流动相，流速：0.9 mL·min-1，柱温：28℃， VWD检测波长：238nm[3]。

2.2 供试品溶液的制备

2.2.1 合煎液样品溶液的制备 称取药材黄连30g，黄柏20g，黄芩20g， 栀子30g，大黄30g混合，加8.5倍水浸泡1 h，煎煮保持微沸1 h，趁热滤出煎液；药渣再同法加水煎煮1h，趁热滤过，合并两次煎液，减压浓缩，干燥，研细，得合煎粉末。

精密称取合煎粉末0.1g，置100mL容量瓶中，加75%甲醇95mL， 超声处理30 min， 取出，冷却，以75%甲醇定容至刻度，摇匀，过0.45 ?m滤膜，得合煎供试品溶液。

2.2.2 分煎液样品溶液的制备 称取药材黄连90g， 黄柏60g，黄芩60g， 栀子90g，大黄90g分置不同的容器中，按“合煎液样品溶液的制备”项药水比例加水同法浸泡、煎煮并制备，得各单味药分煎干粉。

按各分煎样品出膏率换算并称取相当于处方药材配比量的各分煎干粉混合，分别称取上述干粉黄连2.35g，黄柏1.24g，黄芩4.29g，栀子3.64g，大黄6.49g混匀，得分煎混合粉末。精密称取分煎混合粉末0.1g，按合煎供试品溶液制法同法制备，得分煎供试品溶液。

2.2.3 不同拆方组合样品溶液的制备 按所需拆方比例分别称取鉴定好的药材饮片，加 8.5 倍水浸泡 1 h，煎煮保持微沸 1 h，趁热滤出煎液；药渣再加 8.5 倍水，煎煮保持微沸 1 h，趁热滤过，合并两次煎液， 将煎液减压浓缩，干燥制成干膏，研细，称量，得出干膏率。因为黄连、黄柏中都含有盐酸小檗碱这一主要成分，故把黄连、黄柏共煎当成一味药。

精密称取已制备的15组拆方煎液各若干加入50ml量瓶中，加75%甲醇95ml， 超声处理30 min， 冷却，75%甲醇定容至刻度，摇匀。通过排列组合得到22种组合，每种组合，都按照方剂中的比例，取生药量相当于0.03g黄连、0.02g黄柏、0.03g栀子、0.02g黄芩和0.03g大黄，每种组合平行做2份。

22种组合分别为：A+BCD、B+ACD、C+ABD、D+ABC、A+B+C+D、AB+CD、A+B+CD、AB+C+D、AC+BD、A+C+BD、AC+B+D、AD+BC、A+D+BC、AD+B+C、AB、BC、BD、ABC、ABD、BCD、B和ABCD。ACD作为阴性对照。将它们分别加入25 ml容量瓶中，以75%甲醇定容至刻度，摇匀，过0.45 ?m滤膜，即得。

2.3 标准曲线的绘制

2.3.1 黄芩苷对照品经五氧化二磷减压干燥至恒重，精密称取适量，以75%甲醇分别溶解制成0.126mg·mL-1的黄芩苷对照品溶液，备用。

精密吸取上述黄芩苷对照品溶液各0.5ml、4ml置于5ml容量瓶中，以75%甲醇定容至刻度，摇匀，过0.45 ?m滤膜，精密吸取系列浓度的对照品溶液注入色谱仪，测定相应成分的峰面积，以峰面积积分值为纵坐标（Y）、以含量 （?g）为横坐标（X）， 进行线性回归，得回归方程如下：

Y黄芩苷=5457.10364X黄芩苷+5.17655（γ=0.99996） 线性范围：0.126～0.3024?g

2.3.2 栀子苷对照品经五氧化二磷减压干燥至恒重，精密称取适量，以75%甲醇溶解制成0.1546mg·mL-1的栀子苷对照品溶液，备用。

精密吸取上述栀子苷对照品溶液0.5，1，2ml分别置于5mL容量瓶中，以75%甲醇定容至刻度，摇匀，过0.45 ?m滤膜，精密吸取系列浓度的对照品溶液注入色谱仪，测定相应成分的峰面积，以峰面积积分值为纵坐标（Y）、以含量 （?g）为横坐标（X）， 进行线性回归，得回归方程如下：

Y栀子苷=2206.8688X栀子苷+2.0476562（γ=0.99997） 线性范围：0.154～0.6184?g

2.4 样品含量测定 不同拆方组合方式下黄芩苷、栀子苷的含量测定，由标准曲线Y黄芩苷、Y栀子苷得出：不同拆方组合方式下黄芩苷和栀子苷的含量。见图1、图2

3结果与讨论：

3.1 当黄连、黄柏、黄芩合煎组合（AC）与栀子、大黄合煎组合（BD）相配伍时，或当黄连、黄柏、黄芩合煎组合（AC）与栀子单煎（B）、大黄单煎（D）相配伍时，或黄连、黄柏、黄芩合煎组合（AC）单独测时，对黄芩苷的溶解有抑制作用。当黄连、黄柏合煎组合（A）与栀子单煎（B），黄芩、大黄合煎（CD）相配伍时，对黄芩苷的溶解也有抑制作用。当黄连、黄柏与黄芩合煎时会使黄芩苷的溶解起抑制作用，但是当全方合煎时就会提高其溶解性，可能在合煎过程中产生了增溶、助溶作用。

3.2 当黄连、黄柏合煎组合（A）与栀子、黄芩、大黄合煎组合（BCD）相配伍时，或栀子、黄芩、大黄合煎组合（BCD）单独测时，对栀子苷有增溶作用；全方组合（ABCD）或栀子、黄芩合煎（BC）单独测时，对栀子苷也有增溶作用；在配伍组合中，要是有黄连、黄柏、栀子合煎组合（AB）时，对栀子苷的溶解有抑制作用。在合煎时，只要存在栀子和黄芩，对栀子苷就有增溶作用，当栀子单独与黄连、黄柏合煎时，对栀子苷的溶解有抑制作用。

参考文献：

[ 1 ] 中华人民共和国国家药典委员会. 中国药典[ S]. 北京：化学工业出版社， 2005. 73.

[ 2 ] 邵进明，曹佩雪，梁光义等.清胃散拆方中盐酸小檗碱和阿魏酸的含量研究[ J ]. 时珍国医国药，2007，18（7）： 1546- 1547.

[ 3 ] 任玲玲，张春枝，陈吉平等.黄芩的抗菌活性及HPLC分析[ J ]. 精细化工，2005，22 （8） ：589 - 591.

作者简介：陈庄元（1981.12-），男，硕士，讲师，研究方向：中药内在质量控制与中药新药研发。