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[摘要] 目的 探讨8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）在早产儿喂养不耐受患者中的表达和意义。 方法 将98例早产儿分为喂养不耐受组（48例）和对照组（50例），收集外周血和尿液，采用ELISA方法检测8-OHdG的表达。 结果 喂养不耐受组早产儿外周血8-OHdG，第1、7、14天尿8-OHdG的表达明显高于对照组，差异有统计学意义（P
[关键词] 早产儿；喂养不耐受；应激；8-羟基脱氧鸟苷
[中图分类号] R722.6[文献标识码] B[文章编号] 1674-4721（2014）06（b）-0179-03
Expression and significance of 8-OHdG in preterm infant with feeding intolerance
HUANG Qi-wen1 HUANG Ming-jian1 XIONG Jia-hua1 LAI Zhao-xin1 LIN Jin-mei2
1.Department of Pediatrics,Maternity and Child Health Care Hospital of Haizhu District in Guangzhou City,Guangzhou 518172,China;2.Rydell Biotechnology Co.,Ltd. in Guangzhou,Guangzhou 510330,China
[Abstract] Objective To explore the expression and significance of 8-Hydroxy-2′-deoxyguanine (8-OHdG) in preterm infant with feeding intolerance. Methods 98 cases of preterm infant were divided into feeding intolerance group (48 cases) and control group (50 cases),expression of 8-OHdG in peripheral blood and urine were measured by ELISA kit between feeding intolerance group and control group. Results 8-OHdG levels in peripheral blood and in urine at day 1,7,14 in feeding intolerance group was higher than that of control group,the difference was significant (P
[Key words] Preterm infant;Feeding intolerance;Stress;8-Hydroxy-2′-deoxyguanine
喂养不耐受是早产儿常见的并发症，易引起坏死性小肠结肠炎等严重后果，其临床特点为腹胀、呕吐和血便等。早产儿从全胃肠外营养向全肠道喂养的转变应该缓慢，而相关早期诊断的循证医学证据尚不完备，如果出现肠道喂养不耐受表现常促使健康护理小组中断喂养，而延长了肠道外营养的维持时间，因此感染等并发症的发生增加[1-3]。
早产儿喂养不耐受病因复杂，其机制仍不清楚。成年人脑-肠道相互作用是重症监护患者肠道喂养不耐受的重要机制，应激激素和细胞因子表达可引起肠道营养效应和降低损伤作用[4-5]。早产儿早期肠道喂养可以营养不成熟的胃肠系统和降低肠道损伤，通过抑制肠道通透性、降低再灌注损伤和阻断绒毛萎缩。有报道提示，应激反应可能是喂养不耐受的重要发病机制，表现为应激激素和DNA氧化损伤增加，8-羟基脱氧鸟苷（8-hydroxy-2′-deoxyguanine，8-OHdG）是活性氧损伤DNA的重要标志[6-7]。因此，本研究以喂养不耐受早产儿为研究对象，观察8-OHdG在喂养不耐受早产儿血液、唾液和尿液的表达变化情况，探讨应激（氧化损伤）在早产儿喂养不耐受发病中的作用及机制。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2012年1～12月广州市海珠区妇幼保健院新生儿科早产儿（妊娠周3 d）；③胃潴留量>前次喂养量的1/3。出现腹胀、腹泻、血便、腹部压痛、肠鸣音减弱或消失等明显消化道症状，及时排除新生儿败血症、新生儿坏死性小肠结肠炎、外科急腹症等，排除入院前合并消化系统疾病、先天畸形患儿。所有病例均经患儿家长签署书面知情同意书。
1.2 方法
早产儿喂养方案参考北京协和医院的新生儿诊疗常规[8]，肠外营养方案参照相关文献[8]，按不同日龄及体重决定液体、葡萄糖、脂肪、氨基酸的摄入量。记录每日奶量、热量、黄疸持续时间、体重增长等临床指标。两组均在积极治疗原发疾病的基础上，依据病情给予禁食、胃肠减压、保暖、维持水电解质和酸碱平衡等支持对症治疗。喂养不耐受组在一般治疗基础上加用小剂量红霉素和潘立酮，喂奶前半小时胃管内注入，两药交替应用，连用5～7 d。
1.3 测定外周血和尿液8-OHdG的表达水平
8-OHdG检测参照生产厂家提供的操作说明书，人8-OHdG ELISA测定试剂盒购自上海凯博生化试剂有限公司，取50 μl稀释好的样品加入8-OHdG抗体包被的酶标板中，轻轻晃动混匀，37℃孵育60 min，弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30 s，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干后，加入每孔先加入显色剂A 50 μl，再加入显色剂B 50 μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 min。取出酶标板，每孔加终止液50 μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。以空白孔调零，在450 nm波长下测量各孔的吸光度值（OD值），测定应在加终止液后15 min以内进行，取3孔标准化处理后的A值平均数。根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。
1.4 统计学处理
采用SPSS 13.0 统计学软件分析数据，计量资料以x±s表示，采用t检验，以P
2 结果
喂养不耐受组早产儿外周血8-OHdG，第1、7、14天尿8-OHdG的表达明显高于对照组，差异有统计学意义（P
表1 两组外周血和尿8-OHdG表达的比较（x±s）
与对照组比较，*P
3 讨论
本研究首次采用应激标志8-OHdG探讨喂养不耐受早产患儿是否存在应激状态（脑肠相互作用参与其中），研究结果显示，两组早产儿（无论有无喂养不耐受）外周血、第1天尿8-OHdG水平相对较低，外周血、第14天尿8-OHdG的表达差异有统计学意义。由于本文局限性之一是样本量相对较小，因此，今后需要进一步深入大样本研究验证这种作用的存在和机制。本文报道喂养不耐受在早产儿的发病率和以往研究结果相吻合[8-9]，相对而言喂养不耐受较常见于女性患儿，有些研究者认为这可能与性别影响肠道和下丘脑垂体肾上腺轴有关，但是具体机制不详。
喂养不耐受的发病因素很复杂，出生时低水平糖皮质激素有可能增加出生后第1周喂养不耐受的风险性，而这对皮质醇参与肠道酶的成熟和转运活性，出生前应用皮质醇对早产儿的肠道通透性和蠕动影响更大，如果过量可能引起更加严重的胃肠道并发症[5]。应激时内源性皮质醇有助于维持糖代谢平衡、抗炎症反应、维持肠道膜屏障和黏膜的血液灌注和分泌。此外，第1、7、14天，两组患儿氧化应激水平存在差异（8-OHdG），第1天相对较低，提示应激标志物的分布差异有利于鉴别和预测喂养不耐受的发生。迄今为止，有关喂养不耐受氧化应激预后的专门研究未见报道，少数作者发现高水平的氧化应激（应激）可预测坏死性结肠炎的发生。这些研究结果进一步提示了应激参与了早产儿喂养不耐受的发病过程[10-11]。
本研究试图从应激、脑肠功能轴角度探讨早产儿喂养不耐受的发病机制，尝试采用8-OHdG作为应激标志，观察其可否当作非创伤性诊断早产儿喂养不耐受的生物标志物。本文研究应用喂养不耐受定义和检测方法尚不完善，可能影响研究结论的精确性；喂养不耐受的症状和体征非特异性，而其判断是主观的；还有样本量较小、标本收集方法等因素的影响。所以，今后大样本、多生物标志物的研究有利于深入阐明应激和氧化/抗氧化体系的详细的分子作用及机制，进而判断其对早产儿或者其他人群喂养不耐受的预测价值。
综上所述，早产儿出生后前2周应激生物标志物（8-OHdG）的表达差异可以预测喂养不耐受的发生，这将有助于早期识别早产儿喂养不耐受。继续深入的研究有利于阐明早产儿喂养不耐受的发病机制，为防治早产儿喂养不耐受提供新的实验依据。
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（收稿日期：2014-03-06本文编辑：郭静娟）