加味温胆汤对实验性冠心病痰浊血瘀证家兔模型血清IL—6水平的影响

[摘要] 目的 通过观察加味温胆汤对冠心病痰浊血瘀证动物模型血清IL—6水平的影响，以探讨其在冠心病发病中的作用机制。 方法 采用冠状动脉结扎术和高脂饲料喂养法，建立近似冠心病痰浊血瘀证动物模型，将家兔40只随机分成5组，每组8只，即空白组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组，中药低、中、高剂量组分别以加味温胆汤治疗14 d，采用ELISA法观察加味温胆汤对冠心病痰浊血瘀证动物血清IL—6水平的影响。 结果 中药高、中、低剂量组，与模型组相比，可改善家兔血液流变学变化，抑制血清IL—6水平。 结论 加味温胆汤能够改善家兔血液流变学变化，抑制血清IL—6水平，能够稳定冠状动脉粥样硬化斑块，对冠心病痰浊血瘀证起到一定的防治作用。

[关键词] 加味温胆汤；冠心病痰浊血瘀证；IL—6

[中图分类号] R541.4 [文献标识码] A [文章编号] 1673—9701（2012）24—0001—02

Effect of Wendan Decoction on serum IL—6 level of experimental coronary heart disease phlegm and blood stasis syndrome model in rabbits

ZHANG Lili LI Yan

Cardiovascular Division，Heilongjiang Academy of TCM，Haerbin 150036，China

[Abstract] Objective To observe Wendan Decoction infulence on serum IL—6 level of the coronary heart disease phlegm and blood stasis syndrome model in rabbits and to investigate its mechanism for coronary heart disease. Methods Replicated the animal models with the method of coronary artery ligation and high fat feeding. 40 rabbits were devided into 5 groups at random， the blank group and the other four groups with 8 rabbits each. Treat the rats of high dose traditional Chinese medicine group and low dose traditional Chinese medicine group with the treatment of Wendan Decoction about 14 days. At the same time， elise method was used to to observe the effect on the coronary heart disease Phlegm and blood stasis Syndrome Model in rabbits serum IL—6 level. Results The high dose traditional Chinese medicine group and low dose traditional Chinese medicine group comparison with model group，prescription of Wendan Decoction can improve the blood rheology of the rabbits model with coronary heart disease. It also can inhibit serum the level of serum IL—6. Conclusion The prescription of Wendan Decoction can improve the blood rheology of the rabbits model with coronary heart disease and inhibit serum the level of serum IL—6. To stabilize the coronary atherosclerotic plaque. Phlegm Blood Stasis Syndrome of coronary heart disease plays a role in prevention and treatment.

[Key words] Wendan Decoction； Coronary heart disease phlegm and blood stasis syndrome； IL—6

冠心病是指冠状动脉粥样硬化管腔狭窄，冠状动脉循环改变，心肌缺血、缺氧引起冠状动脉血流和心肌需求的不平衡的心脏疾患。其病因与高脂血症、高血压病和吸烟等因素有关。冠心病是一种严重的致残性和致死性疾病，近年来冠心病的发病率呈逐年上升的趋势，位于严重威胁人类健康的三大主要疾病之首，因此，对冠心病的防治具有十分重要的意义。近年来发现IL—6在动脉粥样硬化形成及冠心病心绞痛的发生发展中可能起着重要作用。本文通过检测冠心病动物模型血清IL—6含量，以探讨其在冠心病发病中的作用机制，旨在找出更加有效的治疗冠心病痰浊血瘀证的中药制剂，为中医治疗冠心病痰浊血瘀证提供有效的治疗药物，以减轻患者的痛苦。

1材料与方法

1.1 实验药物及试剂

加味温胆汤组成：半夏、陈皮、茯苓、甘草、胆星、竹茹、苍术、元胡、丹参、川芎、赤芍、牛膝、黄芪等药物经两次煎煮后，过滤、混合，分别浓缩成浓度为1∶1（2.4 g生药/mL）、2∶1（4.8 g生药/mL）、4∶1（9.6 g生药/mL）的水煎剂备用；IL—6试剂盒购自晶美生物工程有限公司。

1.2 动物模型制备及分组

将4～5月龄雄性家兔40只随机分成5组，每组8只，即空白组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组。空白组家兔以普通饲料喂养，其余4组家兔均以高脂饲料喂养，高脂饲料配方：胆固醇1%，蛋黄粉15%，猪油15%，基础饲料79%。在第35天施冠状动脉结扎术，予以30 mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，剪毛，常规消毒，开胸，暴露心脏于胸腔外，于冠状动脉左前降支完全结扎，心电图监测，以J点和T波显著改变评价结扎是否成功。结扎后关胸，缝合，连续3 d注射青霉素预防感染。造模成功后，中药低、中、高剂量组分别以一定浓度的中药灌胃，灌胃14 d，同时模型组每日以等容积的生理盐水灌胃。实验结束后处死动物。

1.3 血液流变学检测

治疗后进行血液流变学检测，检测指标：全血黏度高切变率（ηbH）、全血黏度低切变率（ηbL）、血浆黏度（ηp）、纤维蛋白原（Fib）。检测仪器：北京普利生LBY—N6B血流变仪。

1.4 血清IL—6检测

应用ELISA法检测各组动物的血清IL—6水平，简要步骤：从室温平衡20 min后的铝箔袋中取出所需板条，设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50 μL；待测样本孔先加待测样本10 μL，再加样本稀释液40 μL；随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100 μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60 min。弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1 min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。每孔加入底物A、B各50 μL，37℃避光孵育15 min。每孔加入终止液50 μL，15 min内在450 nm波长处测定各孔的OD值。

1.5 统计学方法

实验结果用均数±标准差（x±s）表示，多个样本均数比较用方差分析，组间比较采用t检验。P < 0.05为差异有统计学意义。全部数据统计分析应用SPSS 13.0软件进行。

2 结果

加味温胆汤治疗后血液流变学和IL—6变化。与空白组相比，各组家兔血液流变及血清IL—6水平明显升高（P < 0.05）；与模型组相比，中药高、中、低剂量组血液流变及血清IL—6水平明显受到抑制（P < 0.05）；中药高剂量组与中药低剂量组相比，血液流变及血清IL—6水平抑制更明显（P < 0.05）。

3 讨论

血液流变学指标的检测在冠心病的诊断和防治方面是一项重要的检测指标，包含血液黏度、血浆黏度和纤维蛋白原等几个主要指标；其中血液黏度是血液流变学的核心指标，它是血浆黏度、血细胞比容、红细胞聚集性、变形性等流变学指标的综合表现，主要作用是维持血流的正常运行。如果血液黏度增高，易发生血栓性疾病，主要是由于血流速度减慢，血液携氧减少能力减弱，导致二氧化碳潴留引起的。血浆黏度和纤维蛋白原在血流变检测中也具有重要的意义，尤其是纤维蛋白原的地位不容忽视，许多学者认为纤维蛋白原可作为反映血栓状态的重要指标，纤维蛋白原是大分子糖蛋白，可破坏血管内皮细胞，聚集在红细胞表面，增加红细胞的吸附力，减慢血液流动，增加黏附力，导致细胞变形和凝固，促进血栓形成。

本实验中全血黏度、血浆黏度、纤维蛋白原指标明显高于空白组，说明血液成分和血液流变学的改变是冠心病发病的重要因素，血液黏度增高，血流缓慢、组织供氧能力降低，自由基代谢紊乱，导致动脉内膜受损、纤维素坏死、血管壁粥样硬化以及血栓形成。与模型组相比，中药高、中、低剂量组血液流变明显受到抑制（P < 0.05），说明加味温胆汤对血液流变学各项指标均有一定程度的抑制作用，可以改善血液黏度增高、血流速度缓慢、组织供氧能力降低等问题，从而改善冠脉血管的功能，因此，改善血液流变性是冠状动脉供血、心肌供氧的重要保证。

炎症贯穿了冠心病的发生、发展过程的始终，是冠状动脉粥样硬化斑块不稳定的主要发病机制，血清IL—6参与了炎症反应的全过程，人们已对炎症标志物IL—6进行了深入研究，血清IL—6是重要的细胞因子之一，发现它在冠心病的发病过程中起了重要的作用。本实验中与空白组相比，各组家兔血清IL—6水平明显升高（P < 0.05），IL—6 水平与心血管事件的发生呈明显正相关，与模型组相比，中药高、中、低剂量组血清IL—6水平明显受到抑制（P < 0.05），说明加味温胆汤对冠心病家兔血清IL—6水平有一定的抑制作用，尤以中药高剂量组作用最为明显，由此可见通过对细胞因子的抑制作用，减轻炎症过程反应，对于减少心血管事件的发生具有重要的临床价值。

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（收稿日期：2012—06—07）