内皮素-1在大鼠羊水栓塞发病机制中的实验研究

摘 要 目的:探讨羊水栓塞的发病机制。方法：孕晚期Wistar大鼠30只，胎龄20天,根据注入液体不同，随机分为3组:对照组（生理盐水组）10只、羊水组10只、胎粪组10只。建立羊水栓塞动物模型，观察60分钟后处死动物。如动物在观察过程中死亡，立即剪开大鼠胸腔，取肺组织固定10%甲醛中.石蜡切片行免疫组化观察内皮素-1的表达。结果 实验组（羊水组和胎粪组）肺泡壁间质及泡浆内见免疫组化呈阳性、强阳性表达，对照组呈弱阳性。结论：内皮素-1参与了羊水栓塞的发生发展，是羊水栓塞发病的重要原因之一。

关键词 羊水栓塞 内皮素-1 过敏

我们给孕晚期大鼠输入不同性质羊水建立羊水栓塞动物模型， 取肺组织进行内皮素-1免疫组化观察，探讨ET-1在AFE中的作用机制，现将结果报告如下。

资料与方法

分组：健康妊娠晚期Wistar大鼠30只,胎龄20天,体重445～545ｇ。根据注入液体不同，随机分为三组:对照组（生理盐水组）10只、羊水组10只、胎粪组10只。

羊水收集方法：术前禁食12小时,随意饮水，按0.35mg/100g腹腔注入10%水合氯醛麻醉，仰卧固定于鼠板上，备皮75%酒精局部消毒，腹正中线切口3cm,暴露子宫，行子宫次切术，关腹。用注射器抽取羊膜腔内羊水。

制备胎粪液：切开胎鼠腹壁，取下胎鼠大肠，轻轻挤出胎粪到羊水中，与原羊水配成1%浓度的胎粪液。

制备动物模型：分离右股静脉，抽出羊水从股静脉注入剂量为0.25ｍｌ/100ｇ，将制备好的胎粪液注入胎粪组，剂量同上。 正常对照组方法同上，但注入体内的是同等剂量的生理盐水。观察60分钟后处死动物。如动物在观察过程中死亡，立即剪开大鼠胸腔，取肺组织固定10%甲醛中。

试剂：内皮素-1免疫组化试剂盒。

检测方法：①石蜡切片4μm。②脱蜡:二甲苯(Ⅰ)30分钟二甲苯(Ⅱ)30分钟100%乙醇(Ⅰ) 5min100%乙醇(Ⅱ)5分钟95%乙醇(Ⅰ)5分钟95%乙醇(Ⅱ)5分钟80%乙醇5分钟蒸馏水洗。③抗原修复:0.01M枸缘酸盐缓冲液加热修复100℃5分钟，PBS冲洗。④3%H2O2阻断30分钟，。PBS冲洗5分钟X3次。血清覆盖30分钟。⑤加一抗(兔抗鼠多克隆ET-1抗体)，1∶100稀释，4℃过夜。PBS冲洗5分钟X3次。⑥二抗30分。PBS冲洗5分钟X3次。⑦三抗20分。PBS冲洗。⑧DAB发色（显微镜镜下控制），Marry's苏木精复染。⑨脱水封片: 80%乙醇5分钟95%乙醇(Ⅰ)5分钟95%乙醇(Ⅱ)5分钟100%乙醇(Ⅰ) 5分钟100%乙醇(Ⅱ)5分钟二甲苯(Ⅰ)30分钟二甲苯(Ⅱ)30分钟中性树胶封片。

结果在显微镜下观察。根据着色强度不同分为：（-）为未着色，（+）弱阳性，（++）阳性，（+++）强阳性。

结 果

病理学检查 ：肺血管腔内可见角化上皮有形成分。

各组肺组织内皮素-1的表达免疫组化结果：实验组（羊水组和胎粪组）肺泡壁间质及泡浆内见免疫组化呈阳性、强阳性表达，对照组呈弱阳性（见表）。

讨 论

羊水栓塞发病率低，病情进展迅速，死亡率高，给疾病的发病机制的研究带来困难。因此建立相应的动物模型能为深人研究疾病提供载体。本实验采用自身胎鼠的羊水、胎粪制作模型，客观真实的模拟羊水栓塞的过程，符合临床发病规律。

胎粪组与羊水组中ET-1的表达增强，说明ET-1参与了AFE的发生发展，是AFE发生的重要原因之一。可能的机制为浑浊的羊水栓子进入母体血循环，在肺循环血流的冲击下，损伤血管内皮细胞，引起ET-1释放。ET-1对肺组织有直接毒性作用，使肺组织损伤加重。ET-1具有直接的致心律失常的作用，使冠脉、肺动脉收缩，肺动脉高压，组织缺血缺氧。缺氧是ET-1合成的强烈刺激因素 ，缺血缺氧可使ET-1的合成与释放增加。ET-1能增加肿瘤坏死因子（TNF-α），白介素-6（ IL-6）、白介素-8（IL-8）等炎症介质的合成和释放，增加毛细血管通透性，激活凝血系统。 IL-8和TNF-α等又能使ET-1表达增加，从而形成网络效应，致使ET-1大量释放。ET-1刺激血小板活化因子（PAF）、白三烯、组织胺及氧自由基的生成与释放，参与Ⅰ型变态反应，引起过敏性体克，羊水栓塞的发生。

包虫病人将获财政救助

（记者钱峰）卫生部疾病预防控制局日前组织起草了《包虫病外科治疗救助项目技术方案（征求意见稿）》和《包虫病外科治疗救助项目管理方案（征求意见稿）》，以科学、规范地开展包虫病外科手术治疗工作，减轻包虫病患者的痛苦。

《包虫病外科治疗救助项目管理方案（征求意见稿）》提出由国家财政安排专项经费，在包虫病防治项目地区对符合外科治疗条件的包虫病患者提供外科医疗救助。救助标准由省级卫生、财政部门制定，中央财政2007年按每人6000元的标准安排补助，不足部分由地方财政负担。申请外科治疗救助的患者，应具备符合《包虫病外科治疗救助项目技术方案》中药物治疗无效或药物使用禁忌，或泡型包虫病病人；有手术指征；包虫病项目县的户籍居民；生活贫困，经济收入低于当地乡（镇）平均收入水平等条件。(李兵)