恩施硒茶\锌对D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化作用的实验研究

【摘要】 目的：观察恩施硒茶、锌对D-半乳糖到衰老小大鼠抗氧作用。方法：将昆明种小鼠随机分为正常对照组（NC）、衰老缺锌组（AZD）、衰老缺锌硒茶组（AZDSeT）、、衰老补锌硒茶组（AZSSeT），测定各组缺锌和补锌对小鼠血清、肝脏、脑组织锌含量的影响及硒茶、锌对血清中MDA、T-AOC、SOD及全血中GSH-PX的影响。结果：衰老模型组与正常对照组比较，血清、肝、脑组织MDA含量均显著高于正常对照组（P

【关键词】 硒茶锌；D-半乳糖；抗氧化

THE ANTI- OXIDATIVE ACTIVITIES OF SELENIUM AND ZINC MICE INDUCED WITH D-GALACTOSE

XU JIAN-an

(Medical School of HuBei Institute for Nationalities，Enshi 445000，China)

【Abstract】Objective: To observe selenium tea, Enshi and zinc on D-galactose to the antioxidant effect of aging small rats. Methods: The mice were randomly divided into control group (NC), the aging of zinc deficiency group (AZD), selenium deficiency of aging tea group (AZDSeT),, old zinc selenium tea group (AZSSeT), lack of determination in each group Zinc and zinc supplementation on serum, liver and brain of zinc and selenium content of tea and zinc in serum MDA, T-AOC, SOD and GSH-PX in blood influence. Results: The aging model group compared with the control group, serum, liver and brain MDA levels were significantly higher than the control group (P

【Key words】Selenium tea; Zinc; D-galactose; Anti-oxidative

恩施硒茶富含微量元素硒，是抗氧化酶谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的重要成份，对体内自由基及过氧化脂质清除起重要作用。有关微量元素锌的抗氧化报道较多，本文着重讨论硒茶中的硒与锌联合对D-半乳糖致衰老小鼠的抗氧化作用，并将二者联合作用与单独的锌及单独的硒茶进行比较，从而为保健食品和医疗领域的应用提供依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1硒茶

硒茶(Selenium tea)购自湖北恩施芭蕉茶厂（用氢化物发生原子吸收光谱法测定Se的含量为2.84μg/g），将其用15倍量热水浸泡30min后，用温火保持微沸30min，搅拌，过滤。茶渣再经两次如上处理，合并滤液，浓缩，配成一定浓度水煎液冷藏备用[1]。采用双道束原子荧光光谱法测定水煎液中硒的含量为0.321mg/L（型号：AFS-2201型，北京冶光仪器公司生产）。

1.1.2动物

动物为昆明种小鼠40只，体重（30±5）g，由华中科技大学同济医学院（原同济医科大学）实验动物中心提供，雌雄各半。

1.1.3 主要试剂

D-半乳糖（D-Gal）由上海伯奥生物科技有限公司提供；ZnSO4.7H2O;超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒、丙二醛（MDA）测定试剂盒、总抗氧化能力（T-AOC）测定试剂盒、谷胱甘肽―过氧化物酶（GSH-PX）测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。

1.2实验方法

1.2.1动物分组与实验方法

将上述小鼠随机分成4组，即正常对照组（NC）、衰老缺锌组（AZD）、衰老缺锌硒茶组（AZDSeT）、、衰老补锌硒茶组（AZSSeT）每组10只。按上述分组，各衰老组每天腹腔注射D-半乳糖（D-Gal）（150mg/・-・d-）,正常对照组给予等剂量生理盐水[2]，连续42d。按上述分组，各组给予设定的配方饲料，即正常对照组、衰老模型组、衰老硒茶组给予适锌饲料，衰老缺锌组、衰老缺锌硒茶组给予缺锌饲料，衰老补锌组、衰老补锌硒茶组给予补锌饲料各喂养42d。其中缺锌饲料中含锌1.61mg/kg，适锌饲料含锌50mg/kg，补锌饲料含锌100mg/kg，各饲料除锌外，其他成份同标准饲料，喂养中避免各组饲料锌的交叉污染。按上述分组，衰老缺锌硒茶组、衰老硒茶组及衰老补锌硒茶组用硒茶提取物以0.3g/kg-.d-的剂量灌胃，其余各组以0.3ml/d的蒸馏水灌胃。42d后，眼眶采血，制备全血（肝素钠抗凝）及血清，全血用于测定GSH-PX活性，血清测定MDA、T-AOC及SOD。处死小鼠，取脑及肝制成匀浆，低温3000r/min离心15min，取上清液测定相关指标，用Follin酚法测定蛋白质含量（样品低温保存，酶活性在48h内测定）。

1.2.2测定指标及方法

MDA、T-AOC、SOD、GSH-PX，测定均按试剂盒说明书操作。采用黄嘌呤氧化酶法检测SOD；硫代巴比妥酸比色法测定MDA；用氧化还原法检测T-AOC，即抗氧化物质能使Fe3+还原成Fe2+,以520nm吸光度即A520nm表示T-AOC；用二硫代二硝基苯甲酸法（即DTNB显色法）检测GSH-PX活性；用火焰原子吸收分光光度法测定血清及组织中锌含量。

1.3数据处理

实验数据以均数±标准差(x±S)表示，统计方法为方差分析，数据分析采用SPSS10.0统计软件包处理。

2结果

2.1缺锌和补锌对小鼠血清、肝脏、脑组织锌含量的影响

Table 1 Effects of Zinc deficiency(ZD) and Zinc supplenment(ZS) on Zinc contents in serum、liver and cerebrum of mice(x±S,n=10)

NC=normal control group;AZD=aging+zinc deficiency group; AZDSeT=aging+zinc deficiency+selenium tea group;AZSSeT=aging+zinc supplement+selenium tea group.:p

喂养缺锌饲料的实验组（衰老缺锌组、衰老缺锌硒茶组）血清、肝、脑组织中锌含量低于正常对照组（P

2.2硒茶、锌对血清中MDA、T-AOC、SOD及全血中GSH-PX的影响

Table 2 Effects of Selenium tea and Zinc on MDA、T-AOC、SOD in Serumand GSH-PX in blood of aging mice(x±S,n=10)

衰老模型组与正常对照组比较：可显著提高血清中MDA含量，同时降低T-AOC、SOD含量及全血GSH-PX活性。衰老缺锌组与衰老模型组比较，可显著提高血清MDA含量，同时降低T-AOC、GSH-PX及SOD活性。与衰老模型组比较，衰老硒茶组、衰老补锌组、衰老缺锌硒茶组均可降低血清MDA含量，同时提高T-AOC、SOD、GSH-PX活性。衰老补锌硒茶组分别与衰老模型组、衰老补锌组、衰老缺锌硒茶组、衰老硒茶组相比较，可降低血清中MDA的含量，同时升高T-AOC、SOD、GSH-PX活性。

衰老模型组与正常对照组比较，可提高脑组织中MDA含量，降低T-AOC及GSH-PX含量，差异有极显著性意义。与衰老模型组相比较，衰老缺锌组可提高MDA含量，降低T-AOC及GSH-PX含量，差异有极显著性意义。衰老补锌组与衰老缺锌组相比较，可降低MDA含量，提高T-AOC及GSH-PX含量，差异有极显著性意义。衰老缺锌硒茶组、衰老硒茶组分别与衰老模型组比较，可降低MDA含量，提高GSH-PX活性，差异有极显著性意义。衰老补锌硒茶组分别与衰老模型组、衰老补锌组、衰老缺锌硒茶组、衰老硒茶组比较，在降低脑组织MDA含量，提高T-AOC及GSH-PX活性方面差异有极显著性意义。

3讨论

在本实验中，衰老模型组与正常对照组比较，血清、肝、脑组织MDA含量均显著高于正常对照组；血清中T-AOC、SOD及全血中GSH-PX，肝组织中T-AOC、SOD；脑组织中T-AOC、GSH-PX均低于正常对照组，差异有显著性意义，表明衰老型建立是成功的。

自由基是一种强烈的氧化剂，它与多不饱和脂肪酸作用，生成脂质过氧化物，最终降解为丙二醛（MDA）代谢物。自由基及MDA通过多种途径造成细胞膜及亚细胞器膜结构破坏，导致损伤[3-5]。机体有一套完整的抗氧化防御体系，能防止自由基链式反应的氧化损伤。这种抗氧化物有酶类（如SOD、GSH-PX等）和非酶类（如维生素E、维生素C、金属硫蛋白等）。T-AOC代表体内酶性和非酶性抗氧化物的总体水平，各抗氧化物之间有相互联系，协同保护作用，所以T-AOC的测定尤为重要，目前关于T-AOC的报道还不多。

目前关于锌的抗氧化作用研究较多。本实验中，衰老缺锌组与衰老模型组比较，由于缺锌可使血清及脑中MDA含量升高，可降低血清、肝、脑组织中T-AOC、SOD及GSH-PX含量，差异有显著性意义，说明缺锌可使氧化损伤进一步加重。与衰老缺锌组比较，衰老补锌组血清、肝、脑组织中MDA含量降低；全血及脑组织中GSH-PX，血清、肝、脑组织中T-AOC及血清SOD含量升高，差异有显著性意义，说明补锌可增强机体抗氧化作用，这与前人报道相一致。

本实验中衰老硒茶组与衰老模型组相比较，衰老硒茶组可显著降低血清、肝、脑组织中MDA含量，提高血清中SOD、T-AOC，全血及脑中GSH-PX活性。与衰老缺锌组相比较可提高肝及脑组织中T-AOC活力，差异有显著性意义，说明硒茶具有较强的抗氧化作用。在本实验中，与衰老模型组比较，衰老补锌硒茶可显著降低血清、肝、脑组织中MDA含量，提高血清、肝、脑组织中T-AOC活性，提高全血及脑组织中GSH-PX含量及血清SOD活性，差异有显著性意义。衰老补锌硒茶组分别与衰老补锌组及衰老硒茶组比较，衰老补锌硒茶组可降低血清、肝、脑组织中MDA含量，提高血清、肝、脑组织中T-AOC活性，提高全血及脑组织中GSH-PX含量及血清SOD活性，差异有显著性意义。说明硒茶中的硒与较强的抗氧化作用，其抗氧能力强于单独的锌及单独的硒茶，这为饮硒茶同时可服用含锌口服液提供了实验依据。

衰老补锌组、衰老硒茶组、衰老补锌硒茶组分别与衰老模型组比较，肝脏SOD含量没有升高，反而进一步降低，差异有显著性意义。这可能是因为自由基产生过多，抗氧化酶如SOD活性降低所致。也有研究表明锌预处理CHO细胞后对SOD活性无显著影响。另外血清和肝中的SOD可能并非同源，这与体内抗氧化酶增龄变化十分复杂有关，因此锌、硒茶与抗氧化酶活性变化的关系仍然需要进一步研究。

参考文献

[1]杨建雄，刘静，李发荣，等.连翘叶茶抗氧化抗衰老作用的实验研究[J].营养学报，2004，26（1）：65-67.

[2]M,Maulik gchi D,et al.Myocardial protection by protykin,a novel extract of trans-resveratrol and emodin[J].Free Radic R Res,2000,32:135-144.

[3]Iimuro M,Kaneku M,Matsumoto Y,et al.Effects ofan endothelin receptor antagonist TAK-044 on myocardial energy metabolism in ischemia/reperfused rat hearts[J].J Cardiovasc Pharm,2000,35:403-409.

[4]袁成福，谭志鑫，许建安.恩施硒茶对小鼠低氧/复氧损伤的保护作用及氯胺酮对这种保护作用的调节[J].中国应用生理学杂志，2003，19（4）：317-318.

[5]沈建新，姚愈忠，陈培熹.褪黑激素对D-半乳糖处理小鼠学习记忆和脑组织超氧化歧化酶活力的影响[J] .动物学报，1998，44：61-66.

作者简介：许建安（1958-），女，湖北恩施人，实验师，本科，主要从事生物化学实验教学及科研工作。