RP-HPLC法测定人血浆中头孢拉定的浓度

[摘要] 目的：建立测定血浆中头孢拉定浓度的高效液相色谱法。方法：色谱柱为DiamonsilTM C18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.05 mol/L KH2PO4-乙腈（85∶15）；柱温：35℃；流速：1.0 ml/min；检测波长：262 nm；进样量：20 μl。结果：头孢拉定在0.5~40.0 μg/ml范围内有良好的线性关系，r=0.999 9；血浆中药物最低检测浓度为0.25 μg/ml（S/N=3）；提取回收率为75%；血浆中三种浓度回收率分别为(106.0±6.3)%、(103.0±4.6)%、(97.5±1.2)%，日内、日间RSD分别为4.9%、2.6%、1.0%及7.9%、3.2%、1.9%。结论：本法操作简单、快捷、专属性强，方法灵敏度和准确度均较高，适用于头孢拉定血药浓度及生物利用度的测定。

[关键词] 头孢拉定；高效液相色谱；血药浓度

[中图分类号]R917 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）02（a）-030-02

头孢拉定是第一代头孢菌素类抗生素，是目前临床上用来治疗呼吸道、泌尿道和皮肤软组织等轻、中度感染的常用药物之一。 目前头孢拉定在国内应用广泛，对头孢拉定的研究很多。头孢拉定在组织体液中分布良好，它在心肌、子宫、肺、前列腺和骨组织中皆可获有效浓度。其中脑组织中药物浓度仅为同期血药浓度的5%~10%，脑脊液中浓度更低。血浆蛋白结合率为6%~10%。口服0.5 g后6 h累积排出给药量的90%以上。头孢拉定在体内很少代谢，丙磺舒可减少本品经肾排泄。口服本品后吸收迅速，空腹口服0.5 g，于给药1 h后可达血药峰浓度（Cmax=11~18mg/L），血消除半衰期(t1/2)约为1 h。本文建立了测定血浆中头孢拉定浓度的高效液相色谱法。本法操作简单、快捷、专属性强，方法灵敏度和准确度均较高，适用于头孢拉定血药浓度及生物利用度的测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色普仪：LC-9A泵（日本岛津公司）、SPD-6AV型紫外可见检测器（日本日立公司）、N3000色谱工作站（浙江大学）；XW-80型涡旋混合器（上海手术器械厂）；TGL-16G型离心沉淀器（上海安亨科学仪器厂）。

1.2 试药与试剂

头孢拉定对照品（含量：99.8%，湖南百草制药有限公司），头孢氨苄对照品（含量：99.8%，湖南百草制药有限公司），乙腈（天津市康科德科技有限公司），甲醇（天津市康科德科技有限公司），磷酸（天津市大茂化学试剂厂），高氯酸（天津市大茂化学试剂厂），空白血浆（总医院）。乙腈、甲醇为色谱纯，其余均为分析纯，水为重蒸水。

2 方法与结果

2.1 血浆样品的处理

取空白血浆500 μl，加入50 μg/ml的头孢氨苄50 μl，涡旋混合1 min，加入10%的高氯酸溶液100 μl作为沉淀剂，涡旋混合1 min，离心（10 000 r/min）3 min，取上清液20 μl进样。

2.2 色谱条件

Diamonsil ODS C18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm，迪马公司产品）；流动相：0.05 mol/L KH2PO4缓冲盐-乙腈（85∶15，pH=3.7）；流速：1.0 μl/min；进样量：20 μl；柱温：35℃；检测波长：262 nm。空白样品添加头孢拉定对照品的色谱图图1表明，头孢拉定色谱峰tR为9.5 min。

2.3 标准溶液的配制

精密称取头孢拉定对照品125.00 mg置于250 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，即得0.50 μg/ml的标准储备液。精密吸取标准储备液一定量，稀释定容至7个50 ml量瓶中，配成浓度为5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、400.0 μg/ml标准溶液。

2.4 标准曲线的制备

取空白血浆500 μl，加入头孢拉定标准系列溶液50 μl，配制成相当于头孢拉定血浆浓度为 0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、40.0 μg/ml的血浆样品，按“2.1”项下依法操作并进行色谱分析。以头孢拉定与内标物的峰面积比值为横坐标（X），头孢拉定浓度（Y）为纵坐标进行线性回归，得标准回归曲线方程Y=0.057 41+4.838X，r=0.999 9（n=5），线性范围为0.5~40.0 μg/ml。最低检测限为0.25 μg/ml（S/N=3）。

2.5 回收率试验

取空白血浆配制浓度为0.5、5.0、32.0 mg/ml头孢拉定血浆样品，按“2.1”项下的方法操作。结果见表1。

2.6 精密度考察

取空白血浆500 μl，配制浓度为0.5、5.0、32.0 μg/ml头孢拉定血浆样品，按“2.1”项下方法操作，同一天内重复测定5次，同批血样连续测定数日，结果见表2。

2.7 提取回收率试验

取标准血浆配制浓度为0.5、5.0、32.0 μg/ml的头孢拉定血浆样品，进样得头孢拉定峰面积A1，配制相同浓度的头孢拉定对照品，进样得头孢拉定峰面积A2，提取回收率=（A1/A2）×100%，三种样品平均提取回收率为75%。

2.8 样品的测定

精密吸取头孢拉定样品血浆500 μl，按“2.1”项下方法操作，计算血浆样品中头孢拉定含量。经测定20份样品结果显示：血药浓度均分布在0.50~40.0 μg/ml范围内，但差异较大。

3 讨论

本文采用头孢氨苄做内标，在方法的建立过程中，考察了不同流动相配比和pH值对峰形和分离度的影响，pH值对峰形影响较大。当pH在3.7附近时，峰形较好，无拖尾现象出现。流动相中乙腈比例对头孢氨苄的保留时间和与内标头孢拉定的分离度影响较大，乙腈的量增大会使头孢拉定出峰提前，保留时间大大减少。因此最终选择0.05 mol/L KH2PO4缓冲盐-乙腈= 85∶15，pH=3.7为流动相 。

本法操作简单、快捷、专属性强，方法灵敏度和准确度均较高，适用于头孢拉定血药浓度及生物利用度的测定。样品测定结果显示，服用头孢拉定个体差异较大，应建立个体化给药方案。

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（收稿日期：2007-10-29）

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