HPLC测定妇科止血灵片中川续断皂苷Ⅵ的含量

[摘要] 目的:建立高效液相法测定妇科止血灵片中川续断皂苷Ⅵ含量的方法。方法:采用Diamonsil-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱;流动相:乙腈-0.05%磷酸(28∶72);检测波长:212 nm;流速:1.0 ml/min。结果:川续断皂苷Ⅵ在0.001 2～0.011 0 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 2)。平均回收率为99.58%(RSD=0.94%)。结论:本方法简便、准确、重现性好,可用于妇科止血灵片中川续断皂苷Ⅵ的质量控制。

[关键词] 高效液相法;续断皂苷Ⅵ;妇科止血灵片;含量测定

[中图分类号] R927.2[文献标识码] B[文章编号] 1673-7210(2010)04(a)-080-02

Content determination of Dipsacus saponin Ⅵ in Fuke Zhixueling Tablets by hplc

JIA Shujuan1, HUANG Xueying2

(1.The Second Affiliated Hospital of Liaoning Traditional Chinese Medicine, Shenyang 110034, China; 2.Baifeng Pharmaceutical Co. Ltd. in Shenyang, Shenyang 110014, China)

[Abstract] Objective: To establish a method for the content determination of dipsacus saponin Ⅵ in Fuke Zhixueling Tablets by HPLC. Methods: The Diamonsil-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm) column was used. The mobile phases consisted of cetonitrile and 0.05%-phosphoric acid (28∶72), the flow rate was 1.0 ml/min and the detection wavelength was at 212 nm. Results: The linear ranges of dipsacus saponin Ⅵ was at 0.001 2-0.011 0 μg (r=0.999 2), the average recovery was 99.58% with a RSD of 0.94%. Conclusion: The method is fast, reliable, accurate and can be used in the quality control of dipsacus saponin Ⅵ in Fuke Zhixueling Tablets.

[Key words] HPLC; Dipsacus saponin Ⅵ; Fuke Zhixueling Tablets; Content determination

妇科止血灵片是由熟地黄、山药、地榆、续断等11味中药组成的中药复方制剂。具有补肾敛阴,固冲止血之功效,临床用于妇科功能性止血。该制剂原收载于部颁标准[WS2-B-0936-91]中,在标准中并未制订含量测定指标与测定方法,川续断皂苷Ⅵ是药品中续断的有效成分之一,本文参照《中国药典》2005年版一部川续断药材项下的含量测定方法,确定用高效液相色谱法测定样品中续断皂苷Ⅵ的含量,由于本品成分较多,通过优化,本文改进了色谱条件,经方法学考察,重现性、精密度、回收率、稳定性试验结果均良好,可以作为本产品的含量测定方法。

1 仪器与试剂

1.1仪器

岛津-10ATvP,浙江大学N2000色谱工作站;色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶[Diamonsil-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)]。

1.2 试药

川续断皂苷Ⅵ对照品(批号:103524-200809,中国药品生物制品检定所);乙腈为色谱纯;其他试剂均为分析纯;水为双重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Diamonsil-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:乙腈-0.05%磷酸(28∶72);检测波长:212 nm;流速:1.0 ml/min。柱温:30℃;进样量:20 μl;理论塔板数按川续断皂苷Ⅵ计不低于3 000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取川续断皂苷Ⅵ对照品15 mg,置于10 ml量瓶中,加甲醇溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,制成每毫升含川续断皂苷Ⅵ 1.5 mg的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取本品50片,研细,取约10 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇溶液25 ml,密塞,称定重量,超声处理(功率100 W,频率40 kHz)30 min,放冷,再称定重量,用甲醇溶液补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液5 ml,置10 ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。

2.4阴性对照品溶液

按处方量称取除川续断的药材,同制备工艺制成阴性样品,再按“2.3”项下方法制备溶液,摇匀,滤过,作为阴性对照溶液。

2.5 系统适用性试验

分别取川续断皂苷Ⅵ对照品溶液和供试品溶液,按上述色谱条件进行试验,考察系统适用性,见色谱图1。结果表明,阴性液无干扰。

2.6 线性关系考察

分别精密量取“2.2”项下川续断皂苷Ⅵ对照品溶液0.2、0.6、1.0、1.4、1.8 ml,分别置于5 ml量瓶中,加流动相至刻度,摇匀,即得。分别精密吸取20 μl,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定色谱峰面积,以对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,计算回归方程,结果表明川续断皂苷Ⅵ在0.001 2～0.011 0 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 2)。回归方程为Y=213 578X-31 413(r=0.999 2)。见图2。

2.7 精密度试验

精密吸取“2.3”项下供试品溶液20 μl,分别于0、2、4、6、8 h进样,记录色谱图。RSD=0.48%;结果表明该溶液在8 h内基本稳定。

2.8 重复性试验

取同一样品,分别制备6份供试品溶液,精密吸取20 μl,注入液相色谱仪,测定并计算含量结果。RSD=0.95%;结果表明本法重复性良好。

2.9 回收率试验

取已知准确含量(0.407 mg/粒)的妇科止血灵片样品6份,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇溶液25 ml,密塞,称定重量,超声处理(功率100 W,频率40 kHz)30 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液5 ml,置10 ml量瓶中,分别加入川续断皂苷Ⅵ对照品溶液(0.30 mg/ml)1 ml,加流动相稀释至刻度,摇匀,即得。各精密量取20 μl,注入液相色谱仪,平均回收率为99.58%,RSD=0.94%;结果表明本法回收率良好,符合测定要求。

2.10 样品测定

取妇科止血灵片样品3份,按“2.3”项下方法制备样品溶液,各精密吸取20 μl,注入液相色谱仪,测定,即得。计算得续断皂苷Ⅵ含量分别为0.407 mg/片,0.406 mg/片,0.408 mg/片。

3 讨论

3.1 提取溶剂的选择

以不同浓度的乙醇、甲醇为溶剂,采用超声的提取方法,测定同批样品,结果采用甲醇为溶剂,提取较完全。

3.2 提取方法及时间的选择

以甲醇为溶剂,分别超声10、20、30、40 min,测定同批样品,结果采用超声提取30 min为宜,提取较完全。

本研究制订的调经活血片中川续断皂苷Ⅵ的含量测定方法,简便易行、重现性好,为妇科止血灵质量标准的提高提供了可靠的依据,具有一定的参考价值。

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(收稿日期:2009-11-04)