超微细粉小复方对冠脉结扎大鼠血清SOD、MDA的影响

摘 要：目的：观察具有益气活血通痹作用的中药超微细粉小复方对冠脉结扎大鼠血清SOD、MDA的影响。方法：通过冠脉结扎建立大鼠心肌缺血模型，63只大鼠随机分假手术组（Sham）、模型组（Model）、中粉组（Z）、超微细粉组（X）、煎剂组（J）、麝香保心丸组（SX）等7组，灌胃14天。观察心电图和血清SOD、MDA的变化。结果：益气活血通痹小复方能够降低心电图J点升高程度，升高SOD，降低MDA。结论：益气活血通痹小复方能够减轻心肌的缺血性损伤，可能与其调节血清SOD、MDA，减轻缺血后的氧化应激反应，从而发挥抗心肌缺血的作用有关。

关键词：超微细粉小复方；益气活血通痹；冠脉结扎；超氧化物歧化酶；丙二醛

中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2012)01-0118-03

Research of Effect of Small Micropowder Compound Recipe

on SOD，MDA in Rats with Myocardial Schemia

LOU Danfei1,WANG Rao2,CAO Min2,WANG Youhua2，ZHOU Duan2

(1.Shanghai Municiple Hospital of TCM,Shanghai 200071，China；

2.Longhua hospital affiliated to Shanghai Univercity of TCM,Shanghai 200032，China)

Abstract:Objective:To observe the effect of Yiqi Huoxue Tongbi small micropowder compound recipe on the Superoxide dismutase, Malonaldehyde in rats with myocardial schemia.Methods:63 SD rats were divided into 7 groups randomly：sham group, model group, thick powder group (C), mediate powder group (Z), micropowder group (X), decoction group (J) and Shexiang Baoxin Pills group(SX). Rats were fed 14 days,SOD and MDA contents in plasma were observed.Results:Yiqi Huoxue Tongbi compound recipe could obviously decrease J point raise, increase SOD level and decrease MDA level.Conclusion:Yiqi Huoxue Tongbi compound recipe has the effect of releasing myocardial schemia injury, maybe it is because of regulating the Serum SOD，MDA to antagonize myocardial schemia.

Key words:small micropowder compound recipe；Yiqi Huoxue Tongbi；coronary artery ligation；Superoxide dismutase；Malonaldehyde

冠心病是动脉粥样硬化病变使冠状动脉狭窄、闭塞，影响冠状循环血流，引起心肌缺血的一种心脏病。冠心病的发病率已跃居心脏病首位，严重危害人们的身心健康，防治冠心病已成为各国不容忽视的严峻课题。上海中医药大学附属龙华医院周端教授临床采用益气活血通痹法治疗冠心病心绞痛收到较好效果，此后根据益气活血通痹法自拟了小复方（生晒参、三七、麝香），并在前期实验研究中观察益气活血通痹小复方不同粒径制剂的体外溶出度情况[ 1-2 ]，提示：三七和人参及其复方制剂微粉中的三七皂苷R1和人参皂苷Rg1的体外溶出速度和溶出量不比常规机械粉碎的粉末有优势。 在不同目数的粉末中，中粉（65～100目）指标成分的溶出速度和累计溶出量较其他目数更好。本文在前期研究基础上,观察了益气活血通痹小复方对冠脉结扎大鼠的影响，以进一步探讨该方作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 SPF级SD大鼠，体重200～250g，共63只，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号：SCXK（沪）2003-0003。

1.1.2 实验药物 益气活血通痹小复方：由生晒参（上海万仕诚国药制品有限公司，吉林，批号：070115）1.5g，三七（上海万仕诚国药制品有限公司，云南，批号：070104）1.5g，麝香（中国阿坝洲医药公司总经销，四川，批号：200706280）1g组成，由上海超微科技有限公司用超微6L粉碎机粉碎成粗粉（24～65目/250～850μm）、中粉（65～100目/150～250μm），超微细粉（625目/20μm）。粗粉、中粉、超微细粉组，双蒸水溶解，制备成每毫升含37.7mg/mL的药液。煎剂组，上海中医药大学药学院制成，每毫升含生药量37.7mg/mL。

麝香保心丸（上海和黄药业有限公司，上海，批号：A070402）研磨成粉，双蒸水溶解，制备成每毫升含1.65mg/ml麝香保心丸的药液。所有药液均4℃保存备用。

1.1.3 主要仪器小动物呼吸机ALC-V8（上海奥尔柯特生物技术有限公司）；Powerlab8/30生理记录仪（AD Instrument，澳大利亚）；紫外分光光度计（UNIC，日本）。

1.1.4 主要试剂 戊巴比妥钠（中国医药集团上海化学试剂公司），配成3％水溶液。超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒（批号：20080226），丙二醛（malonaldehyde ，MDA）试剂盒（批号：20080227），购自南京建成生物工程有限公司。

1.2 造模方法

最后1天灌胃30min后，除假手术组外各组均行冠脉结扎。方法参考文献稍作改动[3-4]，具体步骤：用3％戊巴比妥钠（45mg/kg）行腹腔注射麻醉大鼠，麻醉满意后固定于鼠板上，用18号静脉留置针行气管插管，连接动物呼吸机行人工呼吸（呼吸比为1∶2，潮气量20～22mL/min）。四肢皮下连接心电图电极，记录II导联心电图。胸骨左侧剃毛，于剑突上1.0cm，旁开约0.5cm切开皮肤，逐层钝性分离皮下组织、肌肉，剪断第三根肋骨，用开睑器撑开胸腔，剥离心包膜暴露心脏，在动脉圆锥和左心耳之间，左心耳下方约1～2mm，用0/5号带线缝合针，进针深度控制在0.1cm左右，宽度为0.1～0.2cm之间结扎冠状动脉左前降支，结扎处放一长约0.5cm、直径为1.5mm软棉线，用丝线活结结扎。结扎后迅速清除胸腔内多余血液，观察心电图变化，以心电图J点明显抬高（>0.1mV）并稳定10min以上，心尖部心肌呈灰白色为模型制备成功标志。假手术组用同样大小的带线缝合针从左心耳下缘右侧进针，从肺动脉圆锥左侧出针，进针深度及宽度同上，但缝合针不打结。其余操作同上。

1.3 分组与给药

共分7组，每组大鼠9只。①假手术组（Sham）：生理盐水2mL/(只•日)；②模型组（Model）：生理盐水2mL/(只•日)； ③粗粉组（C）：粗粉136.8mg/(kg•d）2mL/(只•日)；④中粉组（Z）：中粉136.8mg/(kg•d）2mL/(只•日)；⑤超微细粉组（X）：超微细粉136.8mg/(kg•d）2mL/(只•日)；⑥煎剂组（J）：煎剂136.8mg/(kg•d）2mL/(只•日)；⑦麝香保心丸组（SX）：麝香保心丸12.3mg/(kg•d）2mL/(只•日)。每天灌胃，连续14天。

1.4 主要观测指标及测定方法

1.4.1大鼠肢体Ⅱ导联心电图PowerLab生物信息采集系统记录大鼠心电图II导联结扎前后J点位移变化（mV）。

1.4.2血生化指标冠状动脉结扎60min后，腹主动脉取血，5mL放入普通试管中，立即于4℃，3000r/min离心10min，分离上清，血清于-20℃保存，留待测血清SOD、MDA含量。

1.5 统计学处理

所有数据采用SPSS 16.0统计软件进行数据统计分析。所有资料均采用均数±标准差（±s）表示。符合正态分布的多组样本间比较采用oneway ANOVA检验；不符合正态分布的均数比较用非参数检验。所有检验均以P

2 实验结果

2.1 大鼠一般情况

实验大鼠共63只（每组9只），因手术意外死亡（结扎后严重心律失常或灌流过程中死亡）的有8只，死亡率约12.7%。其中假手术组无死亡，模型组1只，粗粉组2只，中粉组1只，超微细粉组1只，煎剂组1只，麝香保心丸组2只。

2.2 各组结扎前后J点位移变化

结扎前，各组心电图J点均无显著差异（P>0.05）。结扎后，模型组与假手术组比较J点显著抬高（P

2.3 血清SOD、MDA含量

结果可见：模型组血清SOD与假手术组比较，显著降低（P

模型组MDA含量与假手术组比较显著升高（P

3 讨 论

大鼠冠脉结扎致心肌缺血模型中，J点的位移值可视为心肌缺血模型成功的一个重要指标，J点上升或下降0.1mV 即可视为心肌缺血[5]。氧自由基生成及脂质过氧化物反应增强是心肌缺血损伤的主要机制之一，SOD是机体清除氧自由基的重要酶类，对机体的氧化与抗氧化平衡起着重要的作用。MDA的测定常常与SOD的测定相互配合，SOD活力的高低间接反映了机体清除氧自由基的能力，而MDA的高低又间接反应了机体细胞受自由基攻击的严重程度，两者结合分析反映了药物的抗氧化作用[6]。

上海中医药大学附属龙华医院周端教授在长期的临床实践中认识到，疾病发生的根本原因在于阴阳失调,，疗疾病的目的就是“谨察阴阳所在而调之，以平为期”。认为冠心病属中医胸痹范畴，证属本虚标实，“气虚血瘀”是冠心病发病的病理基础，故治疗以益气活血通痹为主要治法，生晒参、三七、麝香此三药是导师根据主要治则及多年临床经验优选出来的三味药，生晒参为君，大补元气，广益五脏，针对气虚的主要病机；三七为臣，活血通络，止血消瘀，消肿止痛，两药相合，气行则血行，血行则气实；麝香为佐，辛香走窜，开窍通络，宣痹止痛，引药直达病所。三者配伍，共奏益气活血，通痹止痛之功。三药药少精当，配伍合理，切中病机。

前期研究[1、2]提示：三七和人参及其复方制剂微粉中的三七皂苷R1和人参皂苷Rg1的体外溶出速度和溶出量不比常规机械粉碎的粉末有优势。在不同目数的粉末中，中粉（65～100目）指标成分的溶出速度和累计溶出量较其他目数更好。因此本实验保留了中粉组与超微细粉组作对照。本研究发现：益气活血通痹小复方能够降低心电图J点升高程度，减轻大鼠缺血损伤。而其作用机理可能与减轻缺血后的氧化应激反应（升高SOD、降低MDA）等有关，从多方面发挥其对心肌缺血性损伤的保护作用。中粉组、超微细粉组优于麝香保心丸组、粗粉组、煎剂组，但中粉组和超微细粉组比较无统计学差异。

参考文献

［1］ 周昕，谢瑞芳，周端，等.粉碎度对生晒参有效成分含量和溶出度的影响[J].上海中医药杂志，2008，42(11)：87-89.

[2]周昕，谢瑞芳，周端，等.三七微粉与普通粉中有效成分的含量和溶出度比较[J].上海中医药杂志,2009,43(10)：79-81.

[3]周文武，林玲，陈军，等．冠脉结扎法制做大鼠心肌缺血模型[J]．中国实验动物学,2004,12 (4)：226-230.

[4]Samsamshariat SA，Samsamshariat ZA，Movahed MR．A novel method for safe and accurate left anterior descending coronary artery ligation for research in rats[J]．Cardiovascular Revascularization Medicine,2005,(6):121-123.

[5] 陈奇．中药药理研究方法[M]．北京:人民卫生出版社,1996:441-442.

[6]Buja LM. Myocardial ischemia and reperfusion injury [J]．Cardiovasc Pathol，2005，14(4):170-175.