小儿咳喘灵颗粒质量标准的研究

摘要：目的 在原小儿咳喘灵冲剂质量标准基础上建立新的质量标准控制方法。方法 在麻黄鉴别的试验方法上增加过滤；采用TLC法增加对小儿咳喘灵颗粒处方中金银花的定性鉴别；增加板蓝根有效成分氨基酸的茚三酮显色反应；增加用HPLC法测定小儿咳喘灵颗粒处方中主要成分麻黄碱的含量。结果 定性鉴别TLC法小儿咳喘灵颗粒斑点明显，阴性空白无干扰；茚三酮显色反应明显；HPLC法测定麻黄碱的含量线性范围为0.4992μg/ml～4.992μg/ml（r=0.99996），平均回收率为98.48%，RSD =1.15%（n=5）。结论 定性定量方法专属性强，重现性好，易于操作，可用于小儿咳喘灵颗粒的质量控制。

关键词：小儿咳喘灵颗粒；质量标准；TLC；麻黄碱；HPLC

小儿咳喘灵颗粒是在张仲景《伤寒论》麻杏石甘汤基础上采用科学的提取方法精制而成，收载于部颁标准中药成方制剂第四册，标准编号WS3-B-0688-91编号。该品种由麻黄、金银花、板蓝根、苦杏仁、甘草、石膏、瓜蒌七味药材组成，具有宣肺、清热，止咳、祛痰、平喘。用于上呼吸道感染，气管炎、肺炎，咳嗽等[5]。

原质量标准中仅有甘草皂苷的泡沫鉴别反应和麻黄的生物碱定性鉴别，无板蓝根、金银花鉴别，也无含量的测定[1]。企业申报已有国家标准的中成药中药注册9类，为提高质量标准，更有效的控制产品的质量，通过多次科学的方法试验研究，采用TLC法增加对小儿咳喘灵颗粒处方中金银花定性鉴别；增加板蓝根有效成分氨基酸的茚三酮显色反应。另针对处方中主药麻黄，特增加用HPLC法测定麻黄碱的含量，该定量方法专属性强，重现性好，易于操作，可用于小儿咳喘灵颗粒的质量控制。

1仪器与试药

1.1仪器 高效液相色谱仪：日本岛津LC-10ATvp，岛津SPD-10Avp紫外检测器，N2010色谱工作站；硅胶剂H薄层板由天津天河医疗有限公司提供。

1.2对照品 盐酸麻黄碱对照品（批号：171241-200303）供含量测定用，由中国药品生物制品检定所提供；

1.3样品 由江苏神华药业有限公司生产。

1.4试剂 甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2定性鉴别

2.1麻黄的鉴别 取本品10g，加水20ml使溶解，滤过，取滤液加氨试液使成碱性，再加氯仿15ml，振摇提取，分取氯仿液，置二支试管中，一管加氨制氯化铜试液与二硫化碳各5滴，振摇，静置，氯仿层显棕黄色；另一管为空白，以氯仿5滴代替二硫化碳5滴，振摇后氯仿层无色或显微黄色。

2.2甘草皂苷泡沫反应的鉴别 取本品10g，加水10ml，强力振摇1min，产生持久性泡沫，10min内不消失。

2.3板蓝根的鉴别 取本品0.3g，加水10ml使溶解，滤过，取滤液1ml，加茚三酮试液0.5ml，置水浴加热数分钟，溶液显蓝紫色。

2.4金银花的鉴别

2.4.1对照品溶液的制备 取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

2.4.2供试品溶液的制备 取本品粉末0.8g，加甲醇5ml，放置12h，滤过，滤液作为供试品溶液。

2.4.3阴性对照溶液为甲醇溶剂。

2.4.4薄层层析 照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10～20μl、对照品溶液10μl、阴性对照溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，以醋酸丁酯-甲酸-水（7：2.5：2.5）的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在于对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的荧光斑点。

3含量测定

3.1检测波长的选择 选择盐酸麻黄碱的最大吸收波长254nm作为检测波长。

3.2色谱条件 色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：甲醇-水（1：1）为流动相；检测波长为254nm；柱温25℃。在此色谱条件下，盐酸麻黄碱的理论板数达到3000以上，与其他化合物的峰达到基本分离。

3.3对照品溶液的制备 精密称取盐酸麻黄碱对照品12.5mg，置100ml容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置25ml容量瓶中，加入高碘酸溶液（0.2510）1ml，0.25mol/L氢氧化钠溶液2.5ml，摇匀，放置30min，用0.5mol/L的盐酸溶液调至pH至7，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

3.4供试品溶液的制备 取本品，研细，取约3g，精密称定，置蒸馏瓶中，加5mol/L的氢氧化钠溶液120ml，摇匀，加氯化钠7.5g，超声处理10min，蒸馏，用预先盛有0.5mol/L的盐酸溶液5ml的100ml量瓶收集蒸馏液近95ml，加水至刻度，摇匀。精密量取10ml，置25ml容量瓶中，依据对照品溶液的制备项下的方法，自"加入高碘酸溶液"起，至"加甲醇至刻度"，依法操作，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

小儿咳喘灵颗粒HPLC图，盐酸麻黄碱对照品，供试品图（略）。

3.5系统适应性试验[2，3] 分别吸取盐酸麻黄碱对照品溶液和供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。在此条件下，盐酸麻黄碱峰与其他组分峰基本分离，分离度R1.5；保留时间19min，理论板数以盐酸麻黄碱峰计不低于3000。

3.6线性试验 精密称定盐酸麻黄碱对照品12.48mg，置100ml容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取1ml、2ml、5ml、8ml、10ml，置100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置25ml容量瓶中，加入高碘酸溶液（0.2510）1ml、0.25mol/L氢氧化钠溶液2.5ml，摇匀，放置30min，用0.5mol/L的盐酸溶液调至pH至7，加甲醇至刻度，摇匀。

分别精密量取5个不同浓度的对照品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以进样浓度X（μg/ml）对平均峰面积Y进行回归处理，得到回归方程，见表1。

3.7精密度试验[3] 精密吸取浓度为2.496μg/ml的盐酸麻黄碱对照溶液20μl，重复进样5次，测得盐酸麻黄碱峰面积积分值，见表2。

3.8稳定性试验 取小儿咳喘灵颗粒3g，精密称定，分别用"供试品溶液的制备"相同方法制得供试品溶液，精密吸取20μl，每间隔1h进一针，检测供试品溶液中盐酸麻黄碱的含量，连续考察5h，见表3。

3.9重复性试验 取小儿咳喘灵颗粒3g，共5份，精密称定，分别用"供试品溶液的制备"相同方法制得供试品溶液，精密吸取20μl，分别检测供试品溶液中盐酸麻黄碱的含量，见表4。

3.10加样回收率试验 供试品溶液 取重复性试验批号样品小儿咳喘灵颗粒3g，共5份，精密称定，分别置于蒸馏瓶中。另精密称取盐酸麻黄碱对照品12.35mg，置100ml蒸馏瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，制得对照储备液，精密量取2ml，置蒸馏瓶中（浓度为247.0μg/ml），用"供试品溶液的制备"相同方法制得供试品溶液。

精密吸取对照储备液2ml，置100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置25ml容量瓶中，加入高碘酸溶液（0.2510）1ml、0.25mol/L氢氧化钠溶液2.5ml，摇匀，放置30min，用0.5mol/L的盐酸溶液调至pH至7，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

分别吸取盐酸麻黄碱对照品溶液和供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，见表5。

加样回收率（100%）=■×100%

结果表明：本方法加样回收率较好。

3.11样品测定 取本品样品5批，精密称取内容物，分别用"供试品溶液的制备"相同方法制得供试品溶液。

精密称取盐酸麻黄碱对照品约，按对照品溶液的制备项下的方法制得对照品溶液。精密吸取盐酸麻黄碱对照品溶液和以上供试品溶液各20μl注入色谱仪。按外标法计算含量，见表6。

4讨论

4.1对小儿咳喘灵冲剂[鉴别] 进行修订，原质量标准中"取本品10g，加水20ml使溶解，加氨试液使成碱性"，修订为"取本品10g，加水20ml使溶解，滤过，取滤液加氨试液使成碱性…"因处方中加入糊精，《中国药典》2010年版二部对糊精性状的描述为"本品在沸水中易溶"，进行[鉴别]试验时，因冷水中未溶解的糊精对试验产生干扰，故做上述修订。

4.2增加板蓝根有效成分氨基酸的茚三酮显色反应[4]；采用TLC法增加对小儿咳喘灵颗粒处方中金银花进行定性鉴别；依据《中国药典》2010年版一部收载金银花的定性鉴别，经过多次试验证明，该定性鉴别灵敏度高，专属性强。

4.3现执行部颁标准中无含量测定，无法对处方中规定应有的有效成分进行控制，现因该品种由麻黄、金银花、板蓝根、苦杏仁、甘草、石膏、瓜蒌七味药材组成.处方中麻黄为主药，其功能主治为发汗散寒，利水消肿。特增加用HPLC法测定小儿咳喘灵颗粒处方中主药麻黄的主要成分麻黄碱的含量，该定量方法专属性强，易于操作，可用于小儿咳喘灵颗粒的质量控制。

参考文献：

[1]中国药典委员会.中华人民共和国药典（2010版一部）[M].北京：化学工业出版社，2005：224.

[2]熊慧林，郑茂鑫.HPLC法测定咳喘胶囊中麻黄碱的含量[J].中国药事，2006，20（12）：749-750.

[3]金凤珠.清热止咳糖浆中盐酸麻黄碱含量的测定[J].时珍国医国药，2000，11（12）：1070.

[4]卫生部标准[S].中药成方制剂第四册，标准编号WS3-B-0688-91.

[5]药用植物学与生药学[S].第四版，2003：229-232.编辑/申磊