对于甘油三酯试剂盒检验及试剂配方的讨论

[摘要] 目的：比较市场上甘油三酯试剂盒的差异、检验结果的准确度及配方差异。方法：抽取市场上5个不同厂家生产的甘油三酯试剂盒(均为GOD-PAP法)，检测其试剂空白吸光度、线性范围及准确度。结果：其试剂空白吸光度、线性及准确度都在一个比较稳定的范围内，但是部分试剂盒的准确度及线性存在一定差异。结论：甘油三酯试剂盒的不稳定性主要与其配方组成及贮藏条件有关。

[关键词] 甘油三酯；体外诊断试剂

[中图分类号]R446.11+2 [文献标识码]B [文章编号]1673-7210（2008）09（c）-084-02

甘油三酯(triglyceride, TG)是长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，参考范围为4.5 mmol/L(400 mg/dl)时，即可诊断为高甘油三酯血症。

TG升高可见于以下疾病：家庭性混合型高脂血症、糖尿病、糖原累积症、甲状腺功能不足、肾病综合征、妊娠、急性胰岛炎(高危状态)；TG降低见于以下疾病：甲状腺功能亢进、肾上腺皮质功能减退、肝功能严重低下。

现在医院普遍采用体外诊断试剂盒来检测病人血清中的甘油三酯浓度，为比较市场上甘油三酯试剂盒检验结果的准确度及配方差异，笔者进行了如下研究：

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

半自动生化分析仪(SECOMAM公司生产，型号BASIC)；电热恒温度水浴锅；紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司，型号TU-1901)。甘油三酯试剂盒(5个不同厂家生产，均为GOD-PAP法，依次编号为1~5号)，各试剂盒说明书中主要配方见表1；多项液体生化质控血清(四川省迈克科技责任有限公司生产，批号0807041)；21项液体生化质控品(中生北控生物科技股份有限公司生产的，批号070871)。

*双试剂中试剂1成分

LPL：脂蛋白脂肪酶；GK：甘油用甘油激酶；GPO：磷酸甘油氧化酶；POD：过氧化物酶；4-AAP：4-氨基比林；ATP：三磷酸腺苷

1.2 方法

1.2.1 实验原理用高效的微生物脂蛋白脂肪酶(LPL)使血清中的TG水解成甘油与脂肪酸，将生成的甘油用甘油激酶(GK)及三磷酸腺苷(ATP)磷酸化，以磷酸甘油氧化酶(GPO)氧化3-磷酸甘油(G-3-P)，然后以过氧化物酶(POD)、4-氨基比林(4-AAP)与4-氯酚(三者合称PAP)显色，测定所生成的H2O2，故本法简称GPO-PAP法。

1.2.2 实验方法①选择5个不同厂家的甘油三酯试剂盒，分别按说明书要求及企业标准进行试验。其中半自动生化分析仪进样量为0.8 ml。说明书规定进样量小于0.8 ml的，按说明书规定等比例放大进行试验。②以蒸馏水调零，用紫外分光光度计测定其试剂空白吸光度。③测定其线性范围，计算回归系数r值。④用试剂盒测定同一质控品，比较其准确度差异。

2 结果

2.1 试剂空白吸光度

测定结果见表2。

2.2线性范围

测定结果见表3。

2.3 准确度

准确度的测定使用四川省迈克科技责任有限公司生产的多项液体生化质控血清，靶值为1.37 mmol/L。可接受范围为1.03~1.71 mmol/L。准确度计算公式：

1号试剂盒使用中生北控生物科技股份有限公司生产的21项液体生化质控品进行复测，靶值为：1.34 mmol/L，（靶值±2SD）范围为：1.07~1.61 mmol/L。检测结果为：1.06 mmol/L，不准确度：-23%。

3 讨论

GOD-PAP法作为一种常规使用的甘油三酯的检测方法，其试剂空白吸光度、线性及准确度均在一个比较稳定的范围内，但是部分试剂盒的准确度存在一定差异。

其中，1、4、5号试剂盒为双试剂，2和3号试剂盒为单一试剂。通常意义上，双试剂法是为了消除血清中的游离甘油(FG)的干扰，将LPL和4-AAP组成试剂2，其余部分组成试剂1。因无LPL，TG不能水解，FG在GK和GPO的作用下反应，生成H2O2，因为体系中不含4-AAP，Trinder反应不能完成，不显色；加入试剂2后，TG反应生成红色苯醌亚胺。

但本次试验所用的双试剂法的试剂盒，均未把LPL和4-AAP单独组成试剂2(表1)，其中，1号和4号试剂盒是把所有工具酶混合作为试剂2，5号试盒是将4-AAP和POD作为试剂2，二者均不能达到双试剂法消除游离甘油干扰的目的。

GOD-PAP法试剂盒的主要有效成分中，各种工具酶占了很大比例。各种工具酶的单位活力比、反应最适pH、温度及热稳定性等均有一定差异。表1按各试剂盒的说明书列出了其主要成分的浓度(双试剂为混合后浓度)。可以看到，单一试剂的工具酶活力比双试剂工具酶的浓度大得多，尤其是LPL和GK，最大差距达到167倍。与其他试剂盒比较，1号试剂盒的工具酶活力最低，这也是其不合格的一个重要因素。

贮藏条件对甘油三酯试剂盒的影响很大，长时间放置在高于贮藏条件规定的温度下，会导致试剂中工具酶活力下降。其中1号和4号试剂盒把所有的工具酶混合作为试剂2，在贮藏时有利于保持工具酶的活性。检测本地区1号试剂盒同厂家不同批号的甘油三酯试剂盒，同样存在线性范围和准确度的偏移；但使用原厂重新送样同批号试剂盒复检，则能达到标准规定的要求，说明造成酶活力降低、准确度偏移的原因，很可能来自于运输途中贮藏条件的不规范。

试验温度对检验结果也有很大影响，说明书规定的37℃必须严格控制，时间太短或太长，温度过高或过低都会造成检验结果的不准确。试验温度偏低时，检测值普遍偏低；而线性范围和准确度偏移较大的1号试剂盒，如果延长反应时间(通常为10 min)，平行操作，延长至孵育20 min后再检测，准确度项检测值无明显差异，线性范围的r值可增加到0.994 6。

[参考文献]

[1]叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验手册[M].第3版.南京:东南大学出版社,2006.479-483.

(收稿日期：2008-02-23)

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