气相色谱法测定磺胺二甲嘧啶有机溶剂残留量

【摘要】目的:建立磺胺二甲嘧啶合成中所用丙酮有机溶剂残留量测定方法。方法:采用毛细管气相色谱法,溶液直接进样,氢火焰离子化检测器(FID),以二甲基亚砜为溶剂,色谱柱为Supelcowax-10(30m×0.32mm×0.5μm),进样口温度160℃,检测器温度250℃,柱温 120℃,载气为氮气。结果:在该色谱条件下丙酮与二甲基亚砜能达到完全分离,测得丙酮线性试验所得回收方程相关系数在0.9968%,加样回收率分别为98.5%-102.8% , RSD

【关键词】磺胺二甲嘧啶;气相色谱法;残留有机溶剂

【Abstract】Objective: To develop a GC method for determination of acetone in sulfadimidine.Method: Using Supelcowax-10 capillary column (30m×0.32mm×0.5μm),FID detector, the samples were dissolved in dimethyl sulphoxide, and sampling directly. The initial temperature was 120℃ ,the injection port and detector temperature were 160℃ and 250℃ respectively, using Nitrogen gas as carrier gas. Result: In these chromatographic conditions acetone and dimethyl sulphoxide were completely separated. The correlated coefficient of calibration curve of acetone in equation was 0.9968%.The recoveries were between 95.8% and 102.8%, RSD

【Keywords】 Sulfadimidine; GC; Residual organin solvens

【中图分类号】R927.2 【文献标识码】B 【文章编号】1006-1959(2009)08-0239-02

磺胺二甲嘧啶化学名为N-(4,6-二甲基-2-嘧啶基)-4-氨基苯磺酰胺。磺胺二甲嘧啶是一种广谱抗菌药,它对多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌具有体外抗菌活性。本品在结构上类似于对氨基苯甲酸 (PABA),可与PABA竞争性作用于细菌体内的二氢叶酸合成酶,从而阻止PABA作为原料合成细菌所需的叶酸,减少了具有代谢活性的四氢叶酸的量。而后者则是细菌合成嘌呤、胸腺嘧啶核苷和脱氧核糖核酸(DNA)的必需物质,因此抑制了细菌的生长繁殖。由于磺胺二甲嘧啶在合成中使用了丙酮,根据(ICH)指导原则[1]、美国药典29版(USP29)[2]及中国药典2005版[3]的规定,原料药在合成中,所用过的有机溶剂都应对其最终产物进行残留溶剂的检测,故对丙酮加以检测和控制。本实验采用溶液直接进样毛细管气相色谱法对丙酮进行检测。结果表明,方法简便、重现性好、检测准确可靠。

1 实验部分

1.1 仪器与试药:岛津GC-17A气相色谱系统,磺胺二甲嘧啶(佛山市南海北沙制药有限公司批号:210610001、210610002、210610003),丙酮、二甲基亚砜均为分析纯。

1.2 色谱条件:色谱柱:Supelcowax-10(30m×0.32mm×0.5μm);检测器:氢火焰离子化检测器(FID),进样口温度160℃,检测器温度250℃,柱温 120℃,溶液直接进样,分流比5:1,进样量为1μl,外标法定量。

1.3 溶液配制:标准品贮备液:取丙酮适量,加水制成每ml含有丙酮0.25mg的溶液。供试品贮备液:取供试品250mg,精密称定,置25ml容量瓶中,用二甲基亚砜溶解并稀释至刻度。供试品溶液:取5.0ml供试品贮备液,置空瓶中,加1.0ml水,混匀。标准品溶液:吸取标准贮备液1.0ml,置空瓶中,加水5.0ml,混匀。

2 结果

2.1 系统适用性:吸取1.0ml的标准储备液到空瓶中,

加5.0ml的供试品贮备液,混匀。按上述色谱条件进样测定,各组分间分离度均大于1.5,丙酮的理论板数大于5000,符合药典的一般要求,见附图1。

2.2 线性关系考察:精密量取标准贮备液0.5,0.8,1.0,1.2,1.5ml至空瓶中,分别加水5.5,5.2,5.0,4.8,4.5ml,摇匀,即得到系列标准溶液1-5。进样测定,以各溶液浓度(C)为横坐标,相应峰面积(A)为纵坐标,进行线性回归,得丙酮的线性方程分别为 Y=5283.5X+1275.4,(r=0.9968), 表明丙酮在2.08～6.25μg/ml范围内线性关系良好。结果见表1,图2。

2.3 精密度试验:取标准品溶液1份,进样5次,结果(见表2)丙酮峰面积的RSD= 0.9%(n=5)。

2.4 回收率试验:精密称取同一批已处理未检查出残留量的磺胺二甲嘧啶样品50mg共3份分别置空瓶中,分别精密吸取标准贮备液0.8,1.0, 1.2ml于样品中,再分别加二甲基亚砜 5.2,5.0,4.8ml,摇匀。按上述色谱条件进样测定,计算回收率结果见表3。

2.5 检测限测定:以信噪比2∶1( S/N=2)计算,N=0.21mv(见图3),S=A/CV,丙酮的最低检测限为1.0×10-10g,根据人用药品注册技术要求协调会(简称ICH)对药品中限制使用溶剂残留限量规定为丙酮≤0.5%,表明本方法的检测灵敏度符合要求。

2.6 样品测定:精密量取标准品溶液和供试品溶液各1μl,按上述色谱条件进样,按外标法以峰面积计算各样品中有机残留量,结果(见表4及图4、5、6)表明:三批样品均符合人体用药有机残留标准之规定。

3 讨论与小结

3.1 因实验要求较低的检测限且均为含碳化合物故采用灵敏度较高的氢火焰检测器。因本实验室条件未有顶空进样器,故采用溶液直接进样法进行测定。

3.2 由此色谱条件方法下经检验二甲基亚砜并没有对丙酮有影响的杂质,(见图7、8)。

3.3 由于二甲基亚砜对磺胺二甲嘧啶有较好的溶解能力且对其无影响,因此,本法选用二甲基亚砜作溶剂。由于二甲基亚砜的沸点较高,柱温低于120℃时出峰较迟,且出前延峰,柱温太高不利于低沸物的分离。所建立的丙酮残留量的GC检查方法,经方法学检验是准确可靠的,可用于磺胺二甲嘧啶中丙酮残留量的检查。

参考文献

[1] 周海钧主译.药品注册的国际技术要求质量部分(ICH).北京:人民卫生出版社.2000.82-89

[2] 美国药典29版(USP29).2006,附录方法467

[3] 中国药典(2005年版二部). 2005,附录Ⅷ P

作者单位:510520 广东食品药品职业学院