固相微萃取-气相色谱法测定阿奇霉素中丙酮残留量

[摘要] 目的:建立以顶空-固相微萃取-气相色谱联用技术测定阿奇霉素中丙酮残留量的方法。方法:使用自制新型萃取头(苯-丙-硅共聚物),气-液平衡时间:25 min,萃取时间:20 min。色谱柱为不锈钢柱(内填充二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子小球,2 m×3 mm)。结果:丙酮测定结果的RSD为0.64%,在0.10～16.00 μg/g范围内呈良好的线性关系(r=0.994 7),回收率为98.7%～104%。结论:本方法快速、准确、重现性好,可用于阿奇霉素中丙酮残留量的测定。

[关键词] 顶空固相微萃取;新型萃取头;气相色谱;阿奇霉素;丙酮

[中图分类号] R927.2[文献标识码] B[文章编号] 1673-7210(2010)04(c)-077-02

Determination of residual acetone in Azithromycin by SPME-gas chromatography

FU Shuang1, SHEN Shuchang2, YUAN Cheng1

(1.Qiqihar Medical University, Qiqihar 161006, China; 2.Qiqihar University, Qiqihar 161006, China)

[Abstract] Objective: To establish a method for the content determination of acetone in Azithromycin by headspace-SPME-gas chromatography. Methods: Vapor-liquid equilibrium time was 25 min, and absorption time was 20 min. GC colum packed with divinyl-benzene-ethyl-vinyl benzene-based porous polymer ball (2 m ×3 mm). Results: The linear ranges of acetone was at0.10-16.00 μg/g (r=0.994 7), the average recovery was from 98.7% to 104%. Conclusion: The method is proved to be quick and accurate. SPME is a fast, economical and effective method.

[Key words] HS-SPME; New coating; Gas chromatography; Azithromycin; Acetone

阿奇霉素是新一代大环内酯类抗生素,在阿奇霉素生产中,使用有机溶剂丙酮使成品药中可能残留这种有机溶剂。《中国药典》2000年版规定阿奇霉素应做丙酮的残留量检查。药物中残留溶媒大多采用气相色谱法测定,阿奇霉素中有关丙酮的测定已有报道,而固相微萃取技术在阿奇霉素中有机溶剂残留量的检测尚无报道。本文利用顶空-固相微萃取-气相色谱法,使用自制萃取头,测定了阿奇霉素中丙酮残留量,结果表明本方法无毒、准确、可靠。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

GC-112A型气相色谱仪;氢火焰离子化检测器(上海分析仪器厂);石英纤维(100 μm武汉邮科所);5 ml微量注射器,不锈钢毛细管(内径:0.47 μm、0.72 μm);SPME装置(自制),15 ml具塞顶空瓶(安谱科学仪器公司);具有磁力搅拌的电热恒温水浴锅(自行组装)。

1.2 试剂

四氢呋喃、氯化钠、丙酮等均为分析纯。阿奇霉素(药店购买);标准溶液:丙酮 10 μg/ml。

2 方法与结果

2.1 SPME装置的研制

取石英纤维5 g,去掉表面的树脂。将合成的苯乙烯-丙烯酸丁酯-乙烯基三乙氧基硅氧烷聚合物,用四氢呋喃溶剂溶解,将黏稠液体涂渍到纤维表面上达到所需长度及厚度,干燥后,将石英纤维与细不锈钢管牢固结合,制成萃取头。将微量进样器内芯取出,去掉进入汽化室部分的不锈钢外套管,再将玻璃内不锈钢套管取出,在3.5 μl刻度处断开玻璃管,与不锈钢毛细管组成SPME装置。

2.2 色谱条件

色谱柱:不锈钢柱(内填充二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子小球,2 m×3 mm);柱温:100℃;进样口温度:140 ℃;氢火焰离子化检测器温度:140℃;载气:高纯N2(99.999%);流量:30 ml/min;H2流量:30 ml/min;空气流量:300 ml/min;放大器量程:1 010 ml/min。

2.3 线性关系考察

量取丙酮标准溶液各0.1、0.4、0.8、1.2、1.6 ml,置于15 ml顶空瓶中,加入1.0 g氯化钠和10 ml蒸馏水,盖紧瓶塞,密封好。顶空瓶于55℃恒温水浴中,在搅拌下将SPME萃取头插入顶空瓶中顶空萃取20 min。取出萃取头,立即插入气相色谱进样器中解吸2 min。分别测定标准溶液的色谱峰面积,以峰面积(A)对应的质量浓度(C)作图,得标准曲线,求得的回归方程:A=1.212 4C+0.539 9(r=0.994 7)。结果表明,丙酮质量浓度在0.10～16.00 μg/g范围内呈良好的线性关系。工作曲线见图1。

2.4 方法的检出限

以基线噪声的3倍所对应的待测物质的浓度作为方法的检出限,测得丙酮的最低检出限为0.10 μg/g。故已选定的色谱条件能够满足《中国药典》2005年版规定的阿奇霉素中丙酮限度为0.5 %的要求。

2.5 精密度试验

取同一样品(已知丙酮含量),按上述色谱条件分别测定5次(n=5),RSD为0.64%,结果表明本法精密度良好。见表1。

表 1 精密度试验

Tab.1 Precision test

2.6 回收率试验

取阿奇霉素样品(批号:20081001),共4份,再分别加入丙酮对照品适量,按“2.7”项下方法制备样品溶液,测丙酮的含量,平行测定3次,结果见表2。

表 2 回收率试验

Tab.2 Recovery test

2.7 样品含量测定

分别取某药厂生产的不同批号的阿奇霉素1 g(精确至0.0001),精密称定,加入15 ml顶空瓶中,再加入1.0 g氯化钠和磁力搅拌子,后加水至10 ml,以下操作同标准曲线制作,然后根据丙酮峰面积及相应的外标曲线,测得样品中丙酮的含量。样品中丙酮色谱图见图2。对某药厂生产的不同批号的阿奇霉素进行了丙酮残留量的测定,结果见表3。

3 讨论

3.1 气-液平衡萃取温度及气-液平衡时间与萃取时间的选择

在相同的平衡时间,比较45～70℃水浴温度对丙酮萃取效果的影响,温度在55℃时萃取效果最好;在一定的萃取温度条件下,比较5～40 min气-液平衡时间及萃取时间对萃取效果的影响,测得气-液平衡时间25 min,萃取时间20 min时丙酮的萃取量均达最大值。

3.2 盐析剂用量的选择

待测物在水中都有一定的溶解度,加入氯化钠可以降低丙酮的溶解度,使其在气相中所占的体积分数增加。以盐析剂量对萃取效果的影响分析,当待分析物中加入1.0 g氯化钠时萃取效果最好。

固相微萃取-气相色谱法测定阿奇霉素中的丙酮残留量及时、准确,并且可以避免苯等作溶剂对人体的伤害,这样对产品质量的提高和生产非常有利,所以该方法对药物中有机溶剂残留的检测具有重要的价值,新型萃取涂层研制也有待于进一步的完善。

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(收稿日期:2009-01-14)