益气温阳、活血利水法预防急性肺血栓栓塞的实验研究

摘要：目的：探讨益气温阳、活血利水法在预防急性肺血栓栓塞(APTE)的作用及其可行性。方法：48只健康新西兰大耳白兔，随机分力4组，每组12只，即空白对照组、栓塞对照组、益气温阳活血利水中药防治组(中药组)、华法林组。每只兔均经耳缘静脉取血，制成自体血栓栓子备用。4组均给予常规饲料喂养，中药组加益气温阳活血利水作用的中药灌胃，含生药0.8 g/kg，华法林组加华法林溶液胃，0.06 mg/kg，每日1次。空白对照组、栓塞对照组同时给等量生理盐水灌胃。1周后，分别经右股静脉注入自体血栓栓子，于栓塞后1 h，4 h采血测定动脉血气分析、一氧化氮(NO)、内皮素－1(ET－1)、血栓素B2(TXB2)，并于4 h后处死兔，进行肺病理学观察，结果：益气温阳、活血利水中药组栓塞后病理损伤明显轻于其他组，庄入栓子1 h，4 h后，中药组NO、血氧分压(PaO2)水平均高于栓塞对照组(P＜0.05)，ET－1，TXB2均低于栓塞对胆组(P＜0.05)，血二氧化碳分压(PaCO2)与栓塞对照组无统计学意义，中药组NO，PaO2高于华法林组，ET－1低于华法林组，PaCO2和TXB2与华法林组无统计学意义。结论：预防性应用益气温阳活血利水法可减轻APTE后肺缺血损伤，改善缺氧状态，调节血管内皮功能，抑制血小板分泌血栓素A2(TXA2)。此法在预防APTE方面具有可行性，有效性。

关键词：益气温阳活血利水法；急性肺血栓栓塞；内皮旁－1；一氧化氮；血栓素B2

中图分类号：R563.5 R285.5　文献标识码：A　文章编号：1672－1349(2007)09－0835－03

急性肺血栓栓塞(acute pulmonary thromboembohsm，APTE)是临床常见的危急重症，尽管近年来其诊治水平有所提高，但死亡率仍很高。国外有关文献报道APTE死亡率为23％～38％，其中90％在2 h内死亡。因而积极预防肺血栓栓塞有非常重要的意义。由于APTE大多发生于大手术创伤之后，顾虑抗凝预防性治疗会引起出血而受到限制。中医益气温阳、活血利水法在防治深静脉血栓形成取得了很好的疗效，并在肺血栓栓塞的预防中显示出一定的临床意义。本研究采用自体血栓回输的方法，通过动物实验观察益气温阳、活血利水法在预防APTE中的可行性。

1　材料与方法

1．1　材　料

1．1．1　实验动物：健康新西兰大耳白兔48只，雌雄各半，体重(2.5±0.3)kg，月龄(4±1)月，河北医科大学动物实验室提供。

1．1．2　实验药物：中药购于河北沧州药材公司，将生附子、黄芪、茯苓等中药浸泡1 h，文火煎2次混合，煎煮时间3 h以上；干地龙研沫，与前煎剂混匀，制成40％溶液(生药的浓度)，4℃左右冷藏备用；华法林，规格3 mg，由芬兰奥立安制药厂生产，批号1084667。

1．2　方　法

1．2．1　实验动物的准备：实验前，在严格消毒条件下，自兔耳缘静脉取血2mL，加入20U凝血酶后，于5mL注射器内，室温下静置过夜，形成牢固血栓，4℃左右冷藏备用，做好栓子与兔对应标记。实验时，动物称重后，经兔耳缘静脉缓慢注射20％乌拉坦(1 mg/kg)麻醉；固定于操作台上，行正中切口，分离和切开颈总动脉，留置导管采血；同时分离右股静脉，注入血栓栓子。

1．2．2　分组方法及处理：给兔标号，选取随机数字，随机分为4组：空白对照组、栓塞对照组、益气温阳活血利水中药防治组(中药组)和华法林组，每组12只兔。空白对照组、栓塞对照组给予常规兔饲料喂养；中药组在常规兔饲料喂养的基础上加用中药煎剂灌胃，生药含量0.8 g/kg(人体用药的等效剂量)，每日1次，华法林组在常规兔饲料喂养的基础上加用华法林0.06mg/kg(人体用药的等效剂量)，溶解于5 mL生理盐水中灌胃，每日1次。空白对照组、栓塞对照组同时给等量生理盐水灌胃。疗程均为1周。

1．2．3　肺血栓栓塞动物模型的建立：分组处理1周后，将术前制备的相对应的血栓栓子置于消毒平皿上，将其全部制成直径2 mm－4 mm，长5mm～7mm栓子若干，然后用10 mL注射器吸取血栓栓子和生理盐水3 mL，经右股静脉导管缓慢注入，随后注入生理盐水2 mL，确保栓子全部注入(每只均注入等量的2 mL耳缘静脉血制成的全部血栓)；空白对照组只注入等体积的生理盐水5 mL。

1．2．4　实验指标：分别于造模(注入栓子和/或生理盐水)后1h，4 h测定动脉血气分析、一氧化氮(NO)、内皮素－1(ET－1)、血栓素B2(TXB2)，并于4 h后立即处死兔，进行肺病理学观察。NO采用硝酸还原酶法测定，ET－1，TXB2采用ELISA法测定，均按试剂盒说明操作。

1．3　统计学处理：以SPSS11.0统计软件对实验数据进行统计学处理。计量资料以均数±标准差(x±s)表示，组间参数比较采用方差分析，两两比较采用q检验，P＜0.05为有统计学意义。

2　结　果

2．1　肺组织病理学改变

2．1．1　大体标本观察空白对照组肺脏表面光滑均一，呈淡粉红色；栓塞对照组和华法林组相似，可见肺组织充血、肿胀，表面可见点片状出血灶，呈双侧性分布，下肺野病变重于上肺野；中药组病理改变同栓塞对照组、华法林组，但程度较轻。

2．1．2　光镜下病理切片观察：空白对照组可见肺泡壁薄，肺泡膨胀好，肺泡与肺间质未见炎细胞浸润及出血；栓塞对照组和华法林组相似，可见肺泡周围有大量炎细胞浸润，肺泡及间质内可见有局灶性出血，肺动脉内可见注入的血栓凝块，血栓凝块周围有少量的纤维素血栓形成；中药组可见肺泡周围有少量炎细胞浸润，肺胞及间质内可见有局灶性出血，肺动脉内可见注入的血栓凝块，血栓凝块周围未见纤维索血栓形成。

2．2　观察组各指标变化。

3　讨　论

APTE与下肢深静脉血栓形成(DVT)是一个疾病的两个不同阶段，70％肺栓塞的血栓来自下肢深静脉，50％的DVT的病人发生了肺栓塞。本实验应用自体静脉血制成静脉血栓栓子，并经股静脉将其缓慢注入，较好地模拟人体肺血栓栓塞发生过程，从空白对照组和栓塞对照组实验结果分析，造模成功。

近年来研究表明APTE的病理生理学变化由解剖学上的肺血管床面积减少与神经、体液因素参与的两部分组成，其中神经体液因素是造成肺组织进一步损伤的主要原因。NO与ET－1是内皮细胞分泌的一对血管活性物质。APTE时，NO/ET失衡，ET升高，NO降低，导致肺支气管及血管收缩增强，引起肺动脉高压、肺通透性增加，加重肺水肿和缺血缺氧，进一步加重血管内皮与肺组织损伤，形成恶性循环。本研究表明APTEt时，栓塞对照组NO/ET失衡与以往研究结果一致；中药组和华法林组结果提示，益气温阳活血利水中药能调节APTE时NO/ET平衡，推测与保护肺血管内皮、提高组织的抗缺氧能力、防止缺血再灌注损伤有关，而预防性应用华法林不能减轻发生APTE的肺损伤。

TXA2是血小板聚集、释放和平滑肌收缩的有效诱导剂，由于TXA2生物半衰期短，难以测定，目前以测定TXB2来判定其浓度。本实验提示：AETE后TXA2迅速升高，这与文献[9，10]报道一致，升高的TXA2导致肺小动脉强烈收缩，并可能促进APTE后新血栓的形成，这可能是肺血栓栓塞后肺损伤进一步加重的原因之一。益气温阳活血利水中药防治组TXB2水平明显低于栓塞对照组(P＜0.05)，与华法林防治组相似，提示预防性应用益气温阳活血利水中药可能通过抑制血小板分泌TXA2而减轻APTE后肺损伤。

肺血栓栓塞常见于久卧、大手术后病人，表现为突发喘息、胸痛、咯血、咳嗽、水肿、发绀、出汗等。中医认为本病为久卧伤气，创伤之后阳气更虚，水湿内停，气血运行不畅，心肺闭阻而发病。益气温阳、活血利水法方药由附子、黄苠、茯苓、地龙等组成，具有振奋心阳、宣肺利水、补气活血功效。从血气分析结果与病理解剖来看，预防性应用益气温阳、活血利水法能改善AFFE后缺氧状态，减轻肺水肿。机制可能为其有效抗血小板聚集，抑制血小板分泌TXA2，减轻APTE后继发血栓形成；拮抗神经内分泌的激活，调节APTE时NO/ET平衡，减轻气血比例失调，从而改善症状。华发林可以预防血栓形成，但对已发生的APTE不具有肺的保护作用。本实验证实益气温阳活血利水法在预防肺血栓栓塞中具有可行性、有效性。