白菜型冬油菜根腐病的室内药剂筛选和药效试验

摘要：采用7种药剂对引起白菜型冬油菜根腐病的半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌进行了室内药剂筛选和毒力测定，结果表明，苯甲・丙环唑、十三吗啉、苯醚甲环唑、恶霉灵4种药剂对半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌的EC50均较小，毒力较强，对半裸镰刀菌的EC50分别为0.15、15.67、22.61、67.45 μg/mL，对尖孢镰刀菌的EC50 分别为2.11、11.78、8.56、62.41 μg/mL。采用7种药剂对冬油菜种子拌种，进行了室内药效试验，结果表明，苯甲・丙环唑、苯醚甲环唑、十三吗啉、恶霉灵4种供试药剂对半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌的防效显著高于其他3种药剂，平均防效达60%。

关键词：白菜型冬油菜；根腐病；药剂筛选；毒力测定；药效试验

中图分类号：S 634.3文献标识码：A文章编号：10095500(2014)03003106

基金项目：农业部公益性行业科研专项（20090300204）资助

冬油菜为甘肃省主要油料作物之一，栽培面积占全省油料作物的14.9%，产量占13.3%\[1\]。随着冬油菜栽培面积的扩大，冬油菜根腐病也普遍发生，李荣峰等\[2\]报道，5月中下旬调查其田间发病率严重时达6.4%。冬油菜根腐病典型症状是在靠近地面处出现褐色病斑，病斑略微凹陷，植株生长不良，生长缓慢，根茎部膨大，易拔段。冬油菜根腐病的发生严重影响了冬油菜的品质和产量。目前，在农业生产和园林栽培中，化学防治方法是防治多种植物根腐病的重要手段\[3-9\]。因此，筛选新型、高效、低毒的杀菌剂，来防治冬油菜根腐病，显得非常有必要。为此，试验针对半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌两种病原菌，采用7种药剂进行室内毒力测定和药效试验，筛选对2种病原菌抑制效果好的药剂，旨在为冬油菜生产实践中根腐病的防治提供一定的参考依据。

1材料和方法

1.1供试材料

供试油菜陇油9号品种，由甘肃农业大学农学院提供；采用PDA培养基和WA培养基\[10\]；半裸镰刀菌（Fusarium semitectum）、尖孢镰刀菌（F.oxysprorum）病原菌均分离自兰州市秦王川开发区白菜型冬油菜根腐病根组织，由甘肃农业大学病原实验室保存备用；供试药剂25%嘧菌酯悬浮剂购自河北省农药化工有限公司、99%恶霉灵可湿性粉剂购自山东省烟台鑫润精细化工有限公司、86%十三吗啉油剂购自浙江世佳科技有限公司、77%硫酸铜钙可湿性粉剂购自江苏龙灯化学有限公司、85%波尔・甲霜灵可湿性粉剂购自江苏龙灯化学有限公司、30%苯甲・丙环唑乳油购自浙江世佳科技有限公司、25%苯醚甲环唑乳油购自华北制药集团爱诺有限公司。

1.2试验方法

1.2.1药剂对病原菌菌丝生长的影响参照文献\[11\]方法，将7种供试药剂按推荐浓度，设5个浓度梯度，分别为：25%嘧菌酯悬浮剂200、100、50、25、12.5 μg/mL；99%恶霉灵250、125、62.5、31.25、15.625 μg/mL；86%十三吗啉油剂107.5、53.75、25.875、13.438、6.718 μg/mL；77%硫酸铜钙可湿性粉剂2 310、1 155、577.5、288.75、144.375 μg/mL；85%波尔・甲霜灵可湿性粉剂1 360、680、340、170、85 μg/mL；25%苯醚甲环唑乳油125、62.5、31.25、15.625、7.813 μg/mL；30%苯甲・丙环唑乳油60、30、15、7.5、3.75 μg/mL。取1 mL预先配制好的母液加到灭菌冷却至50 ℃的49 mL PDA 培养基中，摇匀，倒入3个灭菌培养皿中制成设计所需浓度的含毒平板，然后用6 mm 打孔器在预先培养好的病菌菌落边缘打取菌饼，并置于不同药剂浓度的PDA平板上，菌丝面朝下，每皿1个菌饼，以无菌水作对照。最后将培养基置于25 ℃培养箱中培养，3 d后用十字交叉法统计菌落直径（cm），算出菌落生长直径（对照菌落直径-0.6），并计算药剂抑菌率。

抑菌率（%）=\[（菌落直径-0.6）-（处理菌落直径-0.6）\]/（对照菌落直径-0.6）×100%

将药剂浓度转化为对数值（x），为横坐标，再将抑菌率转化为机率值（y），为纵坐标，求出线性毒力回归方程y=a+bx，然后根据回归方程求出各药剂的EC50和浓度对数与几率值之间相关系数r。

1.2.2种子处理在无菌操作下，取适量的供试陇油9号种子，经75%的酒精表面消毒1 min，无菌水冲洗3次后，自然晾干，后用供试药剂相应质量浓度的药液对晾干的冬油菜种子进行拌种，药种比1∶30，拌种好的种子晾干备用。

1.2.3室内药效试验参考文献\[12\]的方法，在预先培养好的供试病菌菌落边缘用6 mm打孔器打取菌饼后置于配制好的WA（水琼脂）培养基中央，25 ℃恒温培养箱中培养5 d，将拌种好的冬油菜种子均匀排列在WA培养基菌落边缘，每皿 20粒种子，置于25 ℃恒温培养箱中培养 10 d，统计幼苗的发病率。每种药剂浓度设3次重复，以不拌种的冬油菜种子为对照。

发病率（%）=发病幼苗数 种子总数×100%

防效（%）= 对照发病率-处理发病率 对照发病率×100%

2结果与分析

2.17种杀菌剂对半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌菌丝生长的影响

7种供试杀菌剂对半裸镰刀菌均有不同程度的抑制，且随着浓度的增大，抑制效果也随之增强。其中，苯甲・丙环唑抑制作用最好，在3.75～60 μg/mL时，抑制率达70.61%～85.45%；十三吗啉、苯醚甲环唑、恶霉灵、波尔・甲霜灵抑菌效果次之，分别为29.54%～83.77%、25.37%～84.15%、23.08%～80.26%、11.95%～83.41%；硫酸铜钙和嘧菌酯的效果最差，抑制率分别为5.53%～56.22%、39.55%～48.00%。

7种供试杀菌剂对尖孢镰刀菌的抑制作用，以苯甲・丙环唑和苯醚甲环唑最强，抑制率为63.86%～97.65%和50.50～88.72%；其次为十三吗啉、恶霉灵、波尔・甲霜灵，抑制率分别为44.27%～74.36%、28.36%～67.16%、12.17%～65.67%；嘧菌酯和硫酸铜钙最差，硫酸铜钙在浓度为144.375、288.75 μg/mL时对尖孢镰刀菌没有抑制作用（表1）。

表17种杀菌剂对半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌的抑制效果

Table 1Inhibition effects of 7 fungicides on Fusarium semitectum and F.oxysprorum

药剂 浓度/μg・mL-1 半裸镰刀菌菌落生长直径/cm 抑菌率/%尖孢镰刀菌菌落生长直径/cm 抑菌率/%

25 %嘧菌酯 200 2.09 48.00a1.21 59.30a

100 2.27 43.53b1.50 49.75b

50 2.3 42.78b1.78 40.37c

25 2.32 42.29b1.96 34.17d

12.5 2.43 39.55c2.18 26.97e

CK 4.02 -2.98 -

99%恶霉灵 250 0.77 80.26a0.98 67.16a

125 1.38 64.62b1.22 59.20b

62.5 2.20 43.59c1.50 49.75c

31.25 2.60 33.33d1.85 37.81d

15.625 3.00 23.08e2.13 28.36e

CK 3.90 -2.98 -

续表1

药剂 浓度/μg・mL-1 半裸镰刀菌菌落生长直径/cm 抑菌率/%尖孢镰刀菌菌落生长直径/cm 抑菌率/%

86%十三吗啉 107.5 0.67 83.77a0.75 74.36a

53.75 0.82 80.15b0.94 67.86b

26.875 1.22 70.46c1.21 58.63c

13.438 2.41 41.65d1.44 50.77d

6.719 2.91 29.54e1.63 44.27e

CK 4.13 -2.92 -

77%硫酸铜钙 2310 1.90 56.22a1.76 41.21a

1155 3.21 26.27b2.43 18.60b

577.5 3.39 21.89c2.82 5.19c

288.75 3.88 10.60d3.14 -5.36d

144.375 4.10 5.53e3.46 -16.11e

CK 4.34 -2.98 -

85%波尔・甲霜灵 1360 0.68 83.41a1.02 65.67a

680 1.09 73.41b1.13 62.17b

340 3.13 23.66c1.58 46.83c

170 3.51 14.39d2.10 29.67d

85 3.61 11.95e2.62 12.17e

CK 4.10 -2.98 -

25%苯醚甲环唑 125 0.65 84.15a0.31 88.72a

62.5 1.51 63.17b0.63 77.07b

31.25 1.75 57.32c0.80 70.88c

15.625 2.06 49.76d1.14 58.51d

7.813 3.06 25.37e1.36 50.50e

CK 4.10 -2.75 -

30%苯甲・丙环唑 60 0.64 85.45a0.07 97.65a

30 0.80 81.82b0.16 94.63b

15 1.00 77.27c0.32 89.26c

7.5 1.13 74.32d0.67 77.49d

3.75 1.29 70.61e1.08 63.86e

CK 4.40 -2.98 -

注：同列数据后不同小写字母表示差异显著（P

2.27种杀菌剂对半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌的毒力比较

7种杀菌剂对半裸镰刀菌的EC50大小顺序为硫酸铜钙>波尔・甲霜灵>嘧菌酯>恶霉灵>苯醚甲环唑>十三吗啉>苯甲・丙环唑。其中，苯甲・丙环唑的EC50最小，为0.15 μg/mL，毒力最强；十三吗啉、苯醚甲环唑、恶霉灵EC50次之，分别为15.67、22.61、62.41 μg/mL；波尔・甲霜灵、嘧菌酯和硫酸铜钙的抑菌活性最弱，EC50达到了2 293.24 μg/mL。各药剂浓度与抑菌率之间的相关系数r>0.90，表明二者呈正相关关系（表2）。

7种杀菌剂对尖孢镰刀菌的抑制作用，除了硫酸铜钙浓度为288.75、144.375 μg/mL与抑菌率之间不成正相关，不能得到毒力回归方程外，其他各个药剂浓度与其对应抑菌率之间均成正相关关系，r>0.90。苯甲・丙环唑、苯醚甲环唑、十三吗啉的毒力最强，EC50分别为2.11、8.56、11.78 μg/mL；恶霉灵次之，为62.41 μg/mL；嘧菌酯和波尔・甲霜灵的毒力最弱，EC50最大，分别为100.70、490.80 μg/mL（表2）。

研究分析，苯甲・丙环唑、十三吗啉、苯醚甲环唑、恶霉灵4种药剂对半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌的EC50均较小，毒力最强。嘧菌酯、苯醚甲环唑、恶霉灵、波尔・甲霜灵、十三吗啉，每一药剂对2种镰刀菌的EC50差异不大，嘧菌酯在7倍以内，苯醚甲环唑在3倍以内，恶霉灵，波尔・甲霜灵，十三吗啉在1.5倍以内，说明此5种药剂对半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌的毒力差异不大。

表27种杀菌剂对半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌的毒力比较

Table 2Toxicity comparison of 7 fungicides to Fusarium semitectum and F.oxysprorum

药剂 半裸镰刀菌毒力回归方程

y=ax+b 相关系数/r EC50

/μg・mL-1尖孢镰刀菌

毒力回归方程

y=ax+b 相关系数/r EC50

/μg・mL-1

25%嘧菌酯 y=0.152 0x+4.571 1 0.936 1 663.30y=0.697 0x+3.603 9 0.997 5 100.70

99%恶霉灵 y=1.322 8x+2.604 1 0.989 9 64.75y=0.909 8x+3.291 9 0.977 7 62.41

86%十三吗啉 y=1.302 3x+3.443 7 0.959 0 15.67y=0.678 7x+4.272 9 0.987 7 11.78

77%硫酸铜钙 y=1.369 4x+0.398 2 0.977 6 2293.24- - -

85%波尔・甲霜灵 y=2.041 3x-0.422 4 0.948 4 453.26y=1.310 6x+1.473 3 0.972 2 490.80

25%苯醚甲环唑 y=1.219 7x+3.348 1 0.966 3 22.61y=0.971 3x+4.094 2 0.988 5 8.56

30%苯甲・丙环唑 y=0.383 9x+5.321 5 0.978 9 0.15y=1.454 1x+4.527 2 0.994 4 2.11

2.37种杀菌剂对冬油菜根腐病菌的室内药效试验

苯甲・丙环唑、苯醚甲环唑、十三吗啉、恶霉灵4种药剂对半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌的防效显著高于其他3种药剂，发病率分别比对照降低了81.82%和75.48%、79.54%和66.04%、77.27%和56.61%、72.72%和67.93%。硫酸铜钙的防效最差、分别为27.30%和37.58%。各种药剂对半裸镰刀菌的防效优于尖孢镰刀菌（表3）。

表37种杀菌剂对冬油菜根腐病菌的室内防效

Table 3Control effects of 7 fungicides on Fusarium semitectum and F.oxysprorum

药剂 半裸镰刀菌平均发病率/% 平均防效/%尖孢镰刀菌平均发病率/% 平均防效/%

30%苯甲・丙环唑 13.33±1.67e 81.90±1.90a21.66±4.41e 75.27±2.50a

25%苯醚甲环唑 15.00±2.89e 79.37±4.41a30.00±2.88e 66.12±2.76abc

86%十三吗啉 16.67±1.67e 77.30±0.63a38.33±4.21de 62.43±2.83bc

99%恶霉灵 20.00±0.00e 72.70±2.03a28.33±1.67cd 67.97±2.26ab

25%嘧菌酯 36.67±4.41d 50.17±5.20b40.00±0.00c 54.68±1.51d

85%波尔・甲霜灵 45.00±2.91c 38.73±2.82c50.00±0.00b 43.35±1.88de

77%硫酸铜钙 53.33±1.67b 27.30±0.63d55.00±5.00b 37.58±1.09e

对照 73.33±2.41a -88.33±1.67a -

3讨论与结论

李荣峰等\[2\]研究得出，甘肃省白菜型冬油菜根腐病是由半裸镰刀菌、链格孢（Alternaria alternate）、尖孢镰刀菌、黑根霉（Rhizopus nigricans）和青霉菌（Penicillium sp.）等引起。试验针对半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌两种病原菌，采用7种药剂进行室内毒力测定和皿内药效试验。毒力测定结果表明，苯甲・丙环唑、十三吗啉、苯醚甲环唑、恶霉灵4种药剂对半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌的EC50均较小，毒力较强，可以用于实践。嘧菌酯、苯醚甲环唑、恶霉灵、波尔・甲霜灵、十三吗啉，此5种药剂对两种镰刀菌的EC50差异不大，说明2种镰刀菌对这5种药剂的敏感性相似，在实践防治此两种镰刀菌病害时，可互相借鉴施药方案\[13\]。室内药效试验结果表明，苯甲・丙环唑、苯醚甲环唑、十三吗啉、恶霉灵4种药剂对半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌的防效显著优于其他3种药剂，与室内毒力测定的结果基本一致。

硫酸铜钙为144.375和288.75 μg/mL时，对尖孢镰刀菌有促进生长的作用，此结果与赵春莉等\[14\]报道的结论有差异，其原因需进一步研究。嘧菌酯为25、50、100 μg/mL时，浓度处理间对半裸镰刀菌的抑制率没有显著差异，这与潘月敏等\[15\]报道的当嘧菌酯浓度在1～200 μg/mL时，各浓度处理间抑制效果无明显差异的结论相一致。嘧菌酯为甲氧基丙烯酸酯类药剂，是线粒体呼吸抑制剂，试验中，其对2种镰刀菌的敏感性较差，是因为在离体条件下，其无法抑制病原菌的旁路代谢途径的缘故\[13\]，室内药效试验表现较室内毒力测定时好，其防效适中，与苯甲・丙环唑、十三吗啉、苯醚甲环唑、恶霉灵4种药剂的防效相差不是很大。恶霉灵\[16\]为内吸性好、低毒、无公害杀菌剂和植物生长调节剂，在离体条件下没有体现出其对植物的生长调节作用，在大田中会体现出更加好的防治效果。单一杀菌剂使用容易使病菌产生抗药性，有报道称，苯醚甲环唑与多菌灵复配\[14\]，恶霉灵与多菌灵复配\[17\]，对镰刀菌抑制效果有明显的增效作用。因此，在今后的田间防治中，应该使用不同作用机理的杀菌剂进行复配防治，达到高效、环保、经济的理想效果。半裸镰刀菌和尖孢镰刀菌都是土壤习居菌\[18-19\]，能长期存活于土壤中，它们可侵染许多经济作物和牧草，如蚕豆\[12\]、苜蓿\[20\]、沙打旺等\[21\]，试验只是进行了各种药剂对离体条件下2种镰刀菌菌丝生长的抑制效果和室内药效试验，田间防治效果还有待于进一步探讨。

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Fungicides screening and efficacy test for root

rot of winter rapeseed

FAN Xiangmei,XU Bingliang,LIANG Qiaolan

（College of Pratacultural Science，Gansu Agricultural University / Key Laboratory of Grassland

Ecosystem,Ministry of Education，Lanzhou 730070，China）

Abstract：Fungicides screening and toxicity measurement of 7 fungicides against Fusarium semitectum and F.Oxysprorum which caused root rot of winter rapeseed (Brassica campestris) were studied in laboratory.The results showed that Difenoconazole + Propiconazoleether,Tridemorph,Difenoconazole and Hymexazol had strong inhibition effects on Fusarium semitectum and F.oxysprorum,and the EC50 to F.semitectumwere 0.15,15.67,22.61 and 67.45 μg/mL,and 2.11、11.78,8.56 and 62.41 μg/mL to F.oxysprorum respectively.The results of efficacy after seed dressingwith 7 fungicides indicated that Difenoconazole + Propiconazoleether,Tridemorph,Difenoconazole and Hymexazol had high control effects,and their average control rate was above 60%.

Key words：winter rapeseed;root rot;fungicides screening;toxicity measurement;efficacy test