肝龙胶囊对大鼠慢性酒精性肝损伤的防治作用研究

[摘要] 目的：研究肝龙胶囊对大鼠慢性酒精性肝损伤的防治作用及作用机制。方法：采用梯度浓度乙醇灌胃12周建立慢性酒精性肝损伤模型。检测大鼠血清中ALT，AST，TG，CHO，TNF-α水平和肝组织中GSH，SOD，MDA，ADH和Alb的水平，以及肝脏病理学检查，并对其损伤程度进行病理分级。结果：肝龙胶囊能降低肝损伤大鼠血清中ALT，AST，CHO，TG，TNF-α和肝组织中MDA的含量（ P

[关键词] 美洲大蠊；酒精性肝损伤；脂质过氧化；氧自由基；防治作用

近年来，酒精滥用和酒精依赖引起的疾病已成为当今世界日益严重的公共卫生问题[1]。在非病毒性肝病中，酒精性肝病（ALD）发病率占据首位[2]。随着全球酒精消费量的快速上升，酒精性脂肪肝（AFL）已是西方国家导致肝硬化的最主要病因，也是十大常见致死病因之一。在我国，ALD的发病率也呈逐年上升的趋势，酒精已成为我国继病毒性肝炎后导致肝损害的第二大病因[3]。肝龙胶囊是大理学院李树楠教授利用现代提取、分离技术从美洲大蠊（俗称蟑螂）中提取的一组有效物质，主要成分是粘氨糖，是治疗慢性乙型肝炎的国家二类新药（中药），对乙型肝炎有较好的治疗效果，而且毒副作用较小。但是，在治疗ALD方面未见研究报道。因此，本课题就肝龙胶囊对慢性酒精性肝损伤的防治作用进行了研究，进一步挖掘肝龙胶囊的药用价值，为ALD的防治提供一定的研究基础。

1 材料

1.1 动物 健康 SD 大鼠，60 只，雌雄各半，体重（200 ± 20） g，由昆明医学院动物实验中心提供，合格证号SCXK（滇）2005-0008。

1.2 试剂 肝龙胶囊（昆明赛诺制药有限公司，批号10110901）；硫普罗宁（河南省新谊药业股份有限公司，批号100403）；56%红星二锅头白酒（北京红星股份有限公司，批号20101102）；谷丙转氨酶（ALT）测试盒（批号20111103）、谷草转氨酶（AST）测试盒（批号20111101）、甘油三酯（TG）测试盒（批号20110824）、胆固醇（CHO）测试盒（批号20110803）、超氧化物歧化酶（SOD）测试盒（批号20111101）、丙二醛（MDA）测试盒（批号20111101）、考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒（批号20111103）、还原型谷胱甘肽（GSH） 测试盒（批号20111022）、乙醇脱氢酶（ADH）测试盒（批号20111104）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）测试盒（批号20111113）、白蛋白（Alb）测试盒（批号201111024），以上试剂盒均为南京建成生物工程研究所生产。

1.3 仪器 1.0型高速低温离心机（德国Heraeus），XW-80 A型漩涡混合器（上海精科实业有限公司）；MERRLERAE240型电子分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；JH-C-06-04型紫外分光光度计（上海青华科技仪器有限公司）；H.S21-4型数显恒温水浴锅（北京长安科学仪器厂）。

2 方法

2.1 造模与给药 将85只大鼠适应性喂养1周后，除正常组外，先用40%的白酒灌胃1周，以后每周将白酒的浓度提高5%进行灌胃，第4周后开始灌胃56%的白酒，前4周灌酒的剂量为10 mL·kg-1，4周后灌酒剂量为12 mL·kg-1，每天1次，共造模12周。造模至第8周末时，将大鼠随机分正常组、模型组、硫普罗宁组（120 mg·kg-1）、肝龙胶囊低、中、高剂量组（30，60，120 mg·kg-1）；每天给药1次，共给药治疗4周。

2.2 样本采集与指标检测 最后1 d灌胃给酒后，禁食不禁水12 h，各组动物称重，眼球取血，静置1 h后，分离血清，用于检测ALT，AST，TG，CHO，TNF-α水平。取肝脏左叶浸泡于10%福尔马林中固定24 h，进行 HE 染色，光镜下观察肝组织病理改变。剩余肝脏分别制备成10%肝脏匀浆用于检测MDA，GSH，ADH含量，及1%肝脏匀浆用于检测SOD和Alb水平。

2.3 统计学处理 采用SPSS 17.0 统计软件对数据进行处理，计量资料结果均以±s表示，多组间均数比较首先采用方差齐性检验后用单因素方差分析（One-Way ANVOA）进行统计学分析；等级资料用秩和检验，P

3 结果

3.1 各实验组动物一般状态观察 正常组大鼠精神充沛，活泼好动，毛发光泽，饮食及大便未见异常，体重明显增加；模型组大鼠均有不同程度的精神萎靡，活动减少，嗜睡现象较严重，毛发不整无光泽，食欲差，大便稀溏，体重增加缓慢。肝龙胶囊各剂量组大鼠精神状态和饮食、大便等情况均较模型组有不同程度的改善。

3.2 肝龙胶囊对慢性酒精性肝损伤大鼠体重的影响 实验过程中正常组大鼠体重增长较快；模型组大鼠体重增长相对缓慢；肝龙胶囊干预组大鼠体重有所增长，与模型组相比增加明显（P

3.3 肝龙胶囊对慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏和脾脏指数的影响 模型组的大鼠肝脏指数明显升高，与正常组比较有显著性差异（ P

3.4 肝龙胶囊对慢性酒精性肝损伤大鼠血清中转氨酶的影响 模型组大鼠血清中ALT，AST水平明显升高，与正常组比较有显著性差异（P

3.5 肝龙胶囊对慢性酒精性肝损伤大鼠血清血脂影响 模型组大鼠血清 TG 和 CHO 明显高于模型组（P

3.6 肝龙胶囊对慢性酒精性肝损伤大鼠抗脂质过氧化能力的影响 与模型组相比，肝龙胶囊3个剂量组能明显的降低组织中MDA的含量及升高组织中SOD和GSH的水平（P

3.7 肝龙胶囊对慢性酒精性肝损伤大鼠血清 TNF-α的影响 模型组大鼠血清 TNF-α的含量明显高于对照组（P

3.8 肝龙胶囊对慢性酒精性肝损伤大鼠肝组织ADH，Alb的影响 模型组大鼠ADH的活性与正常组相比有所降低，肝龙胶囊干预组大鼠ADH的活性有所升高，但与模型组相比没有显著性差异；而肝龙胶囊干预组大鼠Alb的含量则明显升高，见表7。

3.9 肝龙胶囊对慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏组织病理学的影响 正常组肝脏组织结构完整，肝小叶轮廓清晰，核圆而清晰。模型组大鼠肝小叶界限不清，肝细胞索紊乱，胞浆内出现弥漫性大小不等的脂肪空泡，可见灶状坏死和炎性细胞浸润，胞核模糊不清。各治疗组损伤有不同程度的减轻，以高剂量组较为明显，见图1。

3.10 肝龙胶囊对慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏脂肪变性的影响 模型组大鼠肝组织脂肪变性与正常组比较，有显著性差异（P

4 讨论

肝脏是体内代谢乙醇的主要场所，乙醇被机体吸收后，约90% 在肝脏内代谢。乙醇在肝脏经乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶脱氢氧化为乙醛和乙酸，再通过体循环而被人体代谢。此过程中肝细胞内产生较多的活性氧自由基（ROS），这些自由基具有极强氧化能力，会攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引起脂质过氧化，并产生脂质过氧化产物，进而造成肝细胞膜通透性增加和肝细胞内线粒体损伤，最终导致肝细胞功能和结构的损害[4]。

MDA 是氧自由基与生物膜多不饱和脂肪酸发生脂质过氧化的终产物，MDA含量可以间接的反映出机体细胞受自由基攻击的程度，而且 MDA 具有强交联性，可使胞浆、膜蛋白及某些酶交联成二聚体或更大的聚合物，使其本身丧失活性、结构改变，乃至整个细胞功能丧失[5]。SOD和GSH是机体内清除自由基的重要抗氧化酶，其活性高低是反应机体抗氧化能力的重要指标。GSH 在抵抗酒精所致的肝损伤中起关键作用，酒精的代谢产物乙醛可以减少GSH的浓度，引起脂质过氧化反应，增加自由基的毒性作用，促进细胞凋亡。GSH 含量的减少可能是酒精导致肝脏脂质过氧化增强的原因之一[6]。

长期饮酒时，酒精对肠道黏膜的损害，使肠道内毒素吸收增加导致 Kupffer 细胞功能处于高饱和状态，对内毒素吞噬降解功能低下，血液中内毒素含量上升，刺激单核细胞和血管内皮细胞过量分泌 IL-1，IL-6，IL-8，TNF-α等炎性因子，引起肝细胞炎症和坏死及纤维组织增生[7-8]。国内外研究表明，在ALD中肝脏 Kupffer 细胞和血窦内皮细胞过量分泌的TNF-α是引起肝细胞严重坏死的重要介质[9]。

实验结果显示，模型组大鼠血清ALT，AST 水平均显著高于正常组，提示ALD模型制备成功。肝龙胶囊各剂量组能够降低肝组织中MDA含量及升高SOD和GSH活性，提示肝龙胶囊通过提高SOD 和GSH的活性，从而提高体内依赖性抗氧化系统的能力而产生较好的肝脏保护作用。另外，肝龙胶囊还能显著降低大鼠血清中TNF-α的浓度，延缓或抑制酒精对肝脏造成的炎症反应，这些可能是肝龙胶囊对ALD防治作用的重要机制。而肝龙胶囊对升高酒精性肝损伤大鼠体内ADH的活性作用不明显，说明其对抗ALD的机制可能与提高机体内ADH的活性无关。

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Preventive effect of Ganlong capsule on chronic alcoholic hepatic injury in rats

ZHANG Xu-qiang1， WU Hong-bing2， PENG Li3， GONG Xiao-min1， LI Jiao4， PU Xiao-fei4， PENG Fang4*

（1. Department of Foundation， Baoshan College of Traditional Chinese Medicine， Baoshan 678000， China；

2.The Medical Team of China People′s Armed Police Force′s Detachment in Dehong， Dehong 678400 ， China；

3.Department of Anesthesiology， People's Hospital of Mangshi， Dehong 678400， China；

4. College of Pharmacy and Chemisry， Dali University， Dali 671000， China）

[Abstract] Objective： To study the preventive effect of Ganlong capsule on chronic alcoholic hepatic injury in rats and its mechanism. Method： The rat chronic hepatic injury model was induced by intragastrically administered with gradient alcohol， once a day for 12 weeks. Efforts were made to detect the content of ALT， AST， TG， CHO， TNF-α in rat serum and GSH， SOD， MDA， ADH， Alb in hepatic tissues were detected， conduct a hepatic pathological examination， and pathological injury grading for livers. Result： Ganlong capsule could reduce the content of ALT， AST， TG in blood serum， MDA in hepatic tissues （P

[Key words] Ganlong capsule； alcoholic liver disease； lipid peroxidation； oxygen free radicals； preventive effect

doi：10.4268/cjcmm20131332