荧光PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义

乙型肝炎是一种由乙肝病毒(HBV)感染引起的传染病。我国属HBV感染高流行区，我国是乙肝携带者高于人群的10%。急性乙肝中有20%会转为慢性，进而可能发展为肝硬化和肝癌，因此准确迅速诊断对乙肝的治疗和预后显得极为重要。荧光定量PCR技术把PCR、杂交及光谱技术相融合，达到了对原始模板量定量的目的。HBV-DNA是乙肝病毒的遗传物质，HBV-DNA(PCR)是从血清中检测HBV存在的灵敏而直接的方法。进一步证实HBV-DNA检测在乙型肝炎早期诊断、传染性识别、病毒复制水平判断以及抗病毒药物的选择、治疗效果以及监测的临床价值。以285份血清标本分别用酶免法检测乙肝两对半和荧光定量PCR法检测HBV-DNA，进行对比分析。

资料与方法

血清标本均取自2010年1月～2010年5月门诊及住院患者，选择其中285例临床资料完整病例进行方法的灵敏性、实用性及临床应用价值的探讨，并通过综合分析，对乙型肝炎血清标记物进行评价。

血清标本的采集：采用灭菌的一次性真空塑料管，清晨空腹抽取静脉血5ml，离心分离血清，-20℃冻存备用，集中检测。

试剂与方法：①测定方法：血清HBV-DNA测定采用FQ-PCR，实验仪器Lightcycler20，检测方法严格按照试剂盒说明书操作。②HBV免疫血清标志物用ELISA法检测。采用酶标仪进行结果判断，检测方法严格按照试剂盒说明书操作。

结 果

用ELISA法分别对285例血清进行HBV两对半检测并依据检测结果进行分组。见表1。

讨 论

血清HBV标志物(HBVM)的检测给临床诊断乙肝病毒感染提供了较便捷的诊断依据。在临床应用过程中发现由于病情的发展过程的结局的多样性，尤其是肝功正常而体内确实有病毒复制者的治疗中，定量PCR检测HBVDNA为HBV感染及其疗效的判定提供了一项重要指标。诊断乙型肝炎及了解病毒复制状态的检测指标主要包括两部分：病毒DNA的表达物及其抗体应答系统；ELISA方法一直是临床诊断HBV感染的传统手段，它实际就是检测病毒DNA的表达物及应答系统，直接探测PCR过程中荧光信号的变化，结果特异、准确。

第1组(俗称大三阳)125例患者血清的HBV-DNA阳性率100%，血清的HBV-DNA平均含量753×108copy/ml，两者的结果是相互关联的，两者具有相似的流行病学意义，同时也反映了HBV-DNA PCR定量检测结果阳性率更高，更能直接体现HBV的复制过程。

第2组模式中128例血清的HBV-DNA阳性率524%，血清的HBV-DNA平均含量958×107copy/ml，从中可看出随着HBeAg(阳性)转变为HBeAg(阴性)，抗-HBe(阳性)的出现HBV-DNA的阳性率大为减低，但HBV-DNA的平均含量与第1组差异有统计学意义(P＜005)，反映出HBV-DNA较ELISA这一模式特异性更强，敏感性更高，更能直接反映HBV-DNA复制水平。

第3组模式中32例血清的HBV-DNA阳性率518%，血清的HBV-DNA平均含量774×107copy/ml，说明HBeAg(阴性)与血清HBV-DNA含量的变化并不一致，因此不能仅为ELISA法测定血清HBeAg(阴性)就确定HBV在体内无复制现象，而要用敏感性较高的PCR检测HBV-DNA含量水平，才能更确切地判断HBV复制状况，更好的服务于临床。

乙型肝炎病毒(HBV)感染人体是一个连续动态的过程，用ELISA法检测免疫标志物(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc)可在一定程度上反映病毒是否处于复制状态，但是不可避免地具有一定的局限性，而PCR法检测HBV-DNA含量水平能直接体现HBV复制过程，敏感性更强，特异性更高。探讨血清HBV-DNA与免疫标志物的相关性、符合性和补充性，从而进一步证实HBV-DNA检测在乙型肝炎早期诊断、传染性识别、病毒复制水平判断以及抗病毒药物的选择、治疗效果以及监测的临床价值。