HPLC法测定红穿破石中大黄素的含量

【摘要】 目的 建立红穿破石中大黄素含量的高效液相色谱测定方法。方法 选用eclipse xdb-c18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),以甲醇-0.1%磷酸溶液(75∶25)为流动相,检测波长为285 nm。结果 大黄素在0.0063～0.063 μg范围内呈良好的线性关系(r＝0.999 9),平均回收率为102.0%,rsd＝1.58%(n＝6)。结论 本法简便,准确,可用于红穿破石中大黄素的含量测定。

【关键词】 红穿破石；大黄素；高效液相色谱法

abstract：objective to establish a hplc method for determining emodin in radix et caulis ventilaginis leiocarpae. methods stationary phase was agilent eclipse xdb-c18 (4.6 mm×150 mm, 5 μm), mobile phase was methanol-0.1%phosphoric (75∶25), detection wavelength was 285 nm, flow rate was 1.0 ml/min and column temperature was 30 ℃. results there was good linearity in the range of 0.006 3～0.063 μg for emodin (r＝0.999 9). the average recovery of emodin was 102.0% with rsd＝1.58%. conclusion this method is rapid and accurate. it can be applied to control the quality of radix et caulis ventilaginis leiocarpae.

key words：radix et caulis ventilaginis leiocarpae；emodin；hplc

红穿破石为鼠李科植物翼核果ventilago leiocarpa benth.的干燥根和老茎,主产于广西等地[1],具有清热利湿、利尿通淋的作用,特别是对消石具有特殊功效,民间常用于尿路感染、急慢性肾炎、肾结石的治疗,现已有多个制药厂家把它作为治疗结石症的重要组方。王氏等[2]报道,从广西产红穿破石根和茎中分离到大黄素、大黄素甲醚、1,2,4,8-四羟基-3-甲基蒽醌、翼核果醌-ⅰ、翼核果素,其中大黄素为该植物的主要化学成分。有关红穿破石的主成分含量测定尚未见报道。本试验采用hplc法对红穿破石中大黄素进行含量测定,为药材生产和质量标准提供科学依据。

1 仪器与试药

美国agilent1100系列高效液相色谱仪(包括四元泵,自动进样器,脱气机,紫外可见检测器,柱温箱和agilent1100化学工作站),bug40型超声波清洗器(上海必能信有限公司)。

大黄素对照品(批号110756-200110,含量测定用)由中国药品生物制品检定所提供,纯度在98%以上；红穿破石由广西玉林制药有限责任公司提供,来源于广西各地,经广西玉林制药有限责任公司中药鉴定室专家鉴定。水为重蒸馏水,甲醇为色谱纯,其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

agilent eclipse xdb-c18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(75∶25)；流速：1.0 ml/min；检测波长：285 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μl。理论板数按大黄素计算应不低于3 000。在此色谱条件下,红穿破石样品能够达到基线分离(见图1)。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取大黄素对照品适量,加甲醇制成每1 ml含大黄素6.3 μg的溶液,作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取红穿破石粉末适量,取0.4 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50 ml,称定重量,超声30 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,滤液用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液,作为供试品溶液。

2.4 线性关系的考察

分别精密吸取大黄素对照品溶液(6.3 μg/ml)1、2、4、6、8、10 ml,置于10 ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,各进样10 μl,连续进样2次,测定峰面积。以对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程：y＝4 172.28a＋0.46,r＝0.999 9,结果表明,大黄素在0.006 3～0.063 μg范围内呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

取大黄素对照品溶液,各重复进样6次,测定峰面积,结果大黄素峰面积值为265.8、268.5、265.8、268.3、267.9、267.7,rsd＝0.4%。表明具有较好的精密度。

2.6 重现性试验

取同一批的样品6份,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,测定大黄素峰面积,结果为222.2、223.9、222.0、225.2、223.7、222.6,rsd＝0.5%。表明该法重现性良好。

2.7 稳定性试验

取同一供试品溶液,分别于配制后0、4、8、12 h,依法测定峰面积,结果rsd＝0.25%,表明样品溶液在12 h内基本稳定。

2.8 加样回收率试验

取已知大黄素含量的红穿破石粉末约0.2 g,平行称取6份,分别精密称定,各加入一定量的大黄素对照品,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,在所确定的hplc条件下进行测定。按上述色谱条件测定峰面积,计算回收率。结果大黄素的平均加样回收率为102.0%,rsd＝1.58%,说明该方法准确可靠。见表1。表1 大黄素回收率测定结果（略）

2.9 样品测定

取红穿破石样品,按“2.3”项下方法操作,在上述色谱条件下进行含量测定。结果见表2。表2 样品含量测定结果(略)

3 讨论

大黄素标准品在紫外分光光度计扫描下,最大吸收波长为225、285、435 nm,在选定的流动相下,其中波长为285 nm时,大黄素的峰最高,附近没有杂质峰,基线平稳。故选定285 nm为检测波长。本试验首次采用hplc法对广西产道地药材红穿破石的主成分大黄素进行含量测定。大黄素具有抗炎、抑菌、利尿、利胆等药理作用,这进一步证实民间常用于尿路感染、急慢性肾炎、肾结石的治疗是有一定道理的。本试验仅考察广西等10个地区的红穿破石,且不同产地的红穿破石的大黄素含量差异较大,桂林产的红穿破石的大黄素含量最高,同一株植物根的含量最大,约为茎的2倍。这些差异可能是由药材的产地、生长环境、采收期不同等原因造成。

【参考文献】

[1] 广西壮族自治区卫生厅.广西中药材标准[s].南宁：广西科学技术出版社,1990.53－54.

[2] 王血芬,卢文杰,陈家源,等.翼核果化学成分的研究[j].药学学报, 1993,28(2)：122－125.

[3] 王 虎,陈华庭,徐楚鸿.肾衰丸中大黄素的含量测定[j].中国医院药学杂志,2005,25(9)：833－835.