联萘酚在涂敷型淀粉衍生物手性固定相上拆分中的吸热保留及对映体洗脱顺序反转

摘要：在正相条件下，探讨了手性化合物联萘酚、联萘酚二醋酸酯、联萘酚二磺酸酯、二溴代联萘酚、氢化安息香以及萘普生在涂敷型淀粉衍生物手性固定相LuxAmylose2上的拆分，考察了流动相中极性醇添加剂的种类及含量、柱温等对手性拆分及对映体洗脱顺序的影响。氢化安息香获得理想的拆分，分离度可达1776；联萘酚二醋酸酯、联萘酚二磺酸酯和二溴代联萘酚得到基线或部分分离，分离度分别为、26和17；萘普生未得到拆分。联萘酚拆分中观察到溶剂诱导及温度诱导对映异构体洗脱顺序反转的现象，R联萘酚表现出少见的吸热保留特征。结合这些现象对手性识别机理进行了探讨。

关键词：液相色谱；淀粉；手性固定相；联萘酚；洗脱顺序；对映体分离

1引言

近年来，液相色谱手性拆分取得了较快的进展，然而人们还未能完全认知相关的手性识别机理。“试错法常被用于手性拆分色谱条件的优化，对映体拆分效果及洗脱顺序的预测仍很困难。在液相色谱手性拆分中，对给定的拆分体系（手性主体和拆分底物固定），人们观察到类对映异构体洗脱顺序反转的情况：第一类是柱温导致的洗脱顺序反转，基于Van′toff方程，Koppenh和ayer等预测了这种反转，由于液相色谱可操作的柱温范围较窄，观察到的佐证例子较少；第二类是流动相组成导致的洗脱顺序反转，流动相中修饰剂的种类及含量都可能导致对映异构体洗脱顺序反转，该类反转的报道多应用多糖类手性固定相；第三类是进样量导致的对映异构体洗脱顺序反转，目前仅观察到一例。对映异构体洗脱顺序反转的现象触及手性识别机理的核心，也是预测手性拆分过程洗脱顺序的关键。因此，研究洗脱顺序反转的本质原因具有重要意义[14]。

本研究对比了几种手性化合物在涂敷型淀粉衍生物手性固定相上的拆分，考察了色谱条件对手性拆分效果及对映体洗脱顺序的影响，观察到联萘酚在该手性固定相上洗脱顺序反转的现象，首次观察到因对映体吸热保留导致的洗脱顺序反转，进一步深入探讨了手性识别机理。2实验部分

21仪器与试剂

Agilent12高效液相色谱仪（美国Agilent公司），含高压二元泵、二极管阵列检测器、化学工作站；LuxAmylose2手性色谱柱（美国Phenomenex公司，2cm×6mmμm），涂敷淀粉三（氯2甲基苯基氨基甲酸酯）；正己烷、甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇（色谱纯，edia公司）；正戊醇（色谱纯，阿拉丁试剂公司）；冰醋酸（分析纯）；R和联萘酚（1），购自北京春甫应用技术研究中心；联萘酚二醋酸酯（2）、联萘酚二磺酸酯、二溴代联萘酚、RR和氢化安息香、和消旋萘普生（6），购自Acros公司；R联萘酚二醋酸酯为实验室自合成。化合物1～6结构如图1所示。

22实验方法

色谱拆分在正相条件下进行，流动相含正己烷和极性添加剂，使用前超声脱气。流速设为1mLmin，检测波长设为2、21和28nm，进样体积为1μL。除温度实验外，柱温设为℃。由基线的初始波动记录死时间。当采用新的色谱条件时，色谱柱至少平衡1h后进样。样品均溶解在甲醇中，浓度为gL。以不同比例的异构体混合物进样确定出峰顺序，其中联萘酚、联萘酚二醋酸酯溶液中R构型和构型，以及氢化安息香溶液中RR构型和构型的比例均为2∶1。

图1底物（1～6）结构图ig1tructuresofprobesolutes（1-6）

1联萘酚inaphthol）；2联萘酚二醋酸酯（inaphtholdiacetate）；联萘酚二磺酸酯（inaphtholdisulfonate）；二溴代联萘酚（ibromobinaphthol）；氢化安息香（ydrobenzoin）；6萘普生（Naproxen）。

结果与讨论

1流动相中极性添加剂对手性拆分的影响

LuxAmylose2手性色谱柱含淀粉三（氯2甲基苯基氨基甲酸酯）。当采用正己烷异丙醇为流动相时，联萘酚（1）峰拖尾严重，仅有微弱拆分。乙醇作为极性添加剂时，峰形略微改善。采用正己烷异丙醇醋酸为流动相时，联萘酚峰形明显改善，拆分良好，异丙醇含量对手性拆分的影响不显著。

对联萘酚二醋酸酯（2），乙醇作为极性添加剂时峰形良好，可获得基线分离，添加醋酸峰形无明显改善。醇的种类（乙醇、异丙醇、正丙醇、正丁醇及正戊醇）对联萘酚二醋酸酯拆分的影响较小，且构型总是出峰在前。对联萘酚二磺酸酯和二溴代联萘酚，流动相中异丙醇含量提高到2%时仍难以洗脱，使用乙醇且添加少量醋酸有利于其洗脱，当以正己烷乙醇醋酸（77∶22∶VV）为流动相时，联萘酚二磺酸酯在min内洗脱，可获得基线分离；二溴代联萘酚可获得部分分离。