银杏叶及野生榛蘑中硒的分布研究

摘要：探讨了银杏（Ginkgo biloba）叶及野生榛蘑（Armillaria mellea）中不同溶解态硒的含量分布。比较了2种植物在热水、0.1 mol/L 的醋酸溶液、盐酸溶液、EDTA溶液以及氯化镁溶液中硒的浸出率。结果表明，浸提能力的大小不仅取决于浸提的方法，而且还受到浸提溶剂的极性以及浸提时间等因素影响。

关键词：分子荧光法；银杏（Ginkgo biloba）叶；榛蘑（Armillaria mellea）；硒

中图分类号：0657 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）18-4494-03

近年来，银杏（Ginkgo biloba）被报道具有多种功能成分，其功效分析一直是国内外研究热点。野生榛蘑（Armillaria mellea）可作调味品或配菜用，其菌丝体富含蜜环菌香豆素和麦角甾醇等化合物，榛蘑发酵制剂对胆囊炎和肝炎疗效显著[1，2]。硒是一种准金属元素，属于第ⅥA族元素，地壳中硒的丰度仅为0.05～0.09 μg/g。近年来，硒在治疗癌症、心血管病、糖尿病等疾病的功效引起了人们的重视[3-5]。硒存在的形态不同，其化学结构及理化性质也不同。硒在植物中主要以无机硒[3]以及有机硒形态存在[4]，其中有机硒包括硒蛋白、硒代半氨酸、硒代胱氨酸、硒多糖等，其结构性质的差异是造成硒在不同溶剂中溶解度不同的主要原因[6-8]。本试验通过分析不同溶剂对银杏叶及野生榛蘑的浸提效果，分析硒的溶解情况，为人体补硒提供借鉴和参考。

1 材料与方法

1.1 材料

银杏叶采自辽宁大学崇山校区（沈阳），野生榛蘑采自长白山。

光谱纯硒（Ⅳ）粉购于国家环保总局标准样品研究所，2，3-二氨基萘购于Acros Organics公司，优级纯盐酸和硝酸购于沈阳化学试剂厂，去离子水由实验室自制。

1.2 仪器

Cary Eclipse荧光分光光度计（美国VARIAN公司）；ESJ120-4电子天平（沈阳龙腾电子称量仪器有限公司）；红外快速干燥箱（沈阳市皇姑区长江五金机电厂）；SHZ-2000型双配套循环水式多用真空泵（河南省巩义市英峪予华仪器厂）；SYZ-B型石英亚沸高纯水蒸馏器（江苏金坛市宏华仪器厂）。

1.3 方法

1.3.1 硒标准储备液的配制 精确称取100.0 mg光谱纯硒粉，溶于少量硝酸中，加2 mL高氯酸，置沸水浴中加热3.5 h，冷却后加入8.4 mL盐酸，再沸水浴2 min，以0.1 mol/L盐酸稀释至1 L，此储备液Se（IV）浓度为100 μg/mL。

1.3.2 硒标准工作溶液的配制 将Se（Ⅳ）储备液用0.1 mol/L盐酸稀释，配制0.05 μg/mL硒溶液，于-4 ℃保存。

1.3.3 2，3-二氨基萘溶液的配制 称取100 mg 2，3-二氨基萘于带盖锥形瓶中，加入100 mL 0.1 mol/L盐酸，待溶解后振摇15 min。加20 mL环己烷，继续振摇，分液，收集下层溶液于棕色瓶中，然后加高度约为1 cm的环己烷覆盖表面，于-4 ℃保存。整个操作避光配制。

1.3.4 硒的工作曲线 准确吸取硒标准使用液 0.0、0.2、1.0、2.0、4.0 mL，加水至5 mL，再分别加入20 mL EDTA混合液，用6 mol/L盐酸调pH值至1.5～2.0。以下步骤在暗室进行：加入3 mL 2， 3-二氨基萘试剂，混匀，沸水浴5 min，取出立即流水冷却，然后加3 mL环己烷，振摇4 min，将全部溶液移入分液漏斗，待分层后弃去水层，有机相转入比色皿中，小心勿混入水滴，于λex=376 nm，λem=520 nm处测定苤硒脑的荧光强度。

1.3.5 样品测定 称取银杏叶粉末样品及榛蘑粉末样品各1 g，设3份平行，向其加入不同的浸提剂，分别于沸水浴中浸提不同时间，然后将浸提液抽滤，并参照1.3.4法测定硒含量，计算硒浸出率。

1.3.6 银杏叶和山榛蘑中硒的测定 分别准确称取1.000 0 g银杏叶粉和山榛蘑粉样品于磨口锥形瓶中，加10 mL浓硫酸，样品湿润后，再加20 mL混合酸（硝酸∶高氯酸=2∶1，V/V）放置过夜。次日于砂浴上逐渐加热，当激烈反应发生后（溶液变无色），继续加热至产生白烟，溶液逐渐变成淡黄色，消解反应完全，离心，取上清液，移入100 mL容量瓶中，加入0.1 mol/L HCl溶液定容。准确移取4.0 mL混合酸于磨口锥形瓶中，并加入20 mL EDTA混合液，用氨水溶液（浓氨水∶纯水=1∶1，V/V）调至淡红橙色。同时设一组空白对照，并参照1.3.4法测定，求出F值。

1.3.7 银杏叶多糖和山榛蘑多糖中硒的测定 采用水煮醇沉方法制备银杏叶多糖和野生榛蘑多糖[2]，分别准确称取0.100 0 g银杏叶多糖和野生榛蘑多糖，置入聚四氟乙烯消化罐中，加入3 mL硝酸溶液，升温180 ℃，消化4 h，冷却后，将消解液定容至50 mL，采用电感耦合等离子体-质谱测定多糖中硒的含量。

2 结果与讨论

2.1 标准曲线结果

荧光强度与硒含量在0～0.083 3 μg/mL之间呈良好线性关系，标准曲线回归方程为：y=2 024.9x+7.129 5，R2=0.999 1。

2.2 银杏叶和山榛蘑中硒的测定

银杏叶和山榛蘑中硒含量的测定结果见表1。从表1可知，银杏叶和野生榛蘑中硒的含量分别为0.771 μg/g和2.856 μg/g。

2.3 不同提取液对银杏叶中硒的提取效果分析

分别以热水、0.1 mol/L盐酸溶液、醋酸溶液、EDTA溶液和氯化镁溶液作为浸提剂，研究不同浸提剂、浸提时间对溶解态硒浸提效果的影响，银杏叶浸提结果见图2。由图2可知，硒的溶出量随着浸提时间增加而增加，但在醋酸溶液中例外；EDTA溶液的浸出量普遍偏低；氯化镁溶液浸泡24 h后的量随着时间增加而增大。

2.4 不同提取液对山榛蘑中硒的提取效果分析

以热水、0.1 mol/L的盐酸溶液、醋酸溶液、EDTA溶液和氯化镁溶液作为浸提剂，山榛蘑中溶解态硒浸提结果见图3。结果表明，野生榛蘑水溶态硒和交换态硒均随着浸提时间增加而增加，同样，EDTA浸出的络合态硒量较小。

2.5 银杏叶多糖和山榛蘑多糖中硒的测定

银杏叶多糖和山榛蘑多糖中硒的含量分别为0.998 6 ng/g（n=4）和0.488 2 ng/g（n=4）。

2.6 银杏叶和榛蘑中硒的浸提率

以热水、0.1 mol/L 盐酸溶液、醋酸溶液、EDTA溶液和氯化镁溶液作为浸提剂，银杏叶中硒的浸提结果见表2。从表2可知，除了醋酸溶液外，其他浸提剂随着浸提时间增加，硒浸出率增大，但各种浸提剂条件下的硒浸出率均低于50%。结果表明热水浸泡是一种简便的补硒方法。

山榛蘑中硒的浸提结果见表3。从表3可知，在同样浸提条件下，山榛蘑中硒的浸出率较低。

3 结论

研究结果表明，在相同浸提条件下，0.1 mol/L盐酸溶液及0.1 mol/L醋酸溶液对硒的浸提率高，且大部分浸提剂对硒的浸提效果都与浸提时间成正比，但由于醋酸溶液易挥发，随着时间的增加，其浸提效果却与之相反。浸提剂浸提能力大小的顺序为：0.1 mol/L醋酸溶液>0.1 mol/L盐酸溶液>0.1 mol/L氯化镁溶液>热水>0.1 mol/L EDTA溶液。浸提能力大小的时间顺序为：24 h>12 h>8 h（醋酸溶液除外）。从热水的浸提结果可知，在加热条件下，部分Se可从植物体中浸提出来，其水溶态硒含量高，表明热水浸提榛蘑和银杏叶是人类天然补硒的好途径。

参考文献：

[1] 许爱华，陈华圣，夏叶玲，等.银杏外种皮多糖对荷瘤小鼠免疫功能的影响[J].中药新药与临床药理，1996，7（3）：22-24.

[2] 张渝阳，王晓宁，周 蕾，等. 山榛蘑中多糖的提取与测定[J]. 辽宁大学学报（自然科学版）， 2006，33（4）：331-333.

[3] YANG K L， JIANG S J. Determination of selenium compounds in urine samples by liquid chromatography-inductively coupled plasma mass spectrometry with an ultrasonic nebulize [J]. Anal Chim Acta，1995，307（1）：109-115.

[4] GAMMELGAARD B， JONS O. Determination of selenite and selenate in human urine by ion chromatography and inductively coupled plasma mass spectrometry[J]. Analytical Atomic Spectrometry， 2000，15（8）：945-949.

[5] HUANG K X， LIU Q， XU H B. Antioxidation of selenoproteins and discovery of 21st nature amino acid[J]. Chinese Journal of Inorganic Chemistry，2008，24（8）：1213-1218.

[6] SPALLHOLZ J E， PALACE V P， REID T W. Methioninase and selenomethionine but not Se-methylselenocysteine generate methylselenol and superoxide in an vitro chemiluminescent assay： implications for the nutritional carcinostatic activity of selenoamino acids[J]. Biochemical Pharmacology，2004，67（3）：547-554.

[7] LIU H N， WEN L X， TAN H. Research progress on pharmacological activity of selenium polysaccharide[J]. China Pharmaceuticals，2010，19（5）：1-3.

[8] FAN C D， JIANG J， YIN X， et al. Purification of selenium-containing allophycocyanin from selenium-enriched spirulina platensis and its hepatoprotective effect against t-BOOH-induced apoptosis[J]. Food Chemistry，2012，134（1）：253-261.