RP-HPLC法测定苦参素在大鼠胃肠中的吸收动力学

[摘要] 目的：研究苦参素在大鼠胃肠的吸收动力学特征。方法：采用大鼠在体胃肠吸收模型，以HPLC法测定胃肠灌注液中药物的含量。结果：苦参素在胃、十二指肠、空肠、回肠和结肠中的吸收百分率分别为（3１.０2±10.08)%、(21.13±2.71)%、(28.22±6.09)%、(35.66±9.01)%和(33.12±13.22)%。结论：苦参素在胃和小肠上段中吸收良好，制剂研究应考虑其吸收特征。

[关键词] 苦参素；在体胃肠吸收；吸收动力学；高效液相色谱法

[中图分类号]R969.1 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）08（b）-011-02

Study on the absorption kinetics of marine in rats′ stomachs and intestines by HPLC

XU Wei, SHA Mei, ZHANG Shu-ling

(Department of Pharmacy, Fujian College of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350108, China)

[Abstract] Objective: To study the absorption kinetics of marine in rats′ stomachs and intestines. Methods: The drug concentration by in situ perfusion in rats were determined by HPLC. Results: The absorption percentages of marine in stomach, duodenum, jejunum, ileum and colon were （3１.０2±10.08)%，(21.13±2.71)%，(28.22±6.09)%，(35.66±9.01)% and(33.12±13.22)%, respectively. Conclusion: Marine is well absorbed in stomach and small intestine. The absorption characters of marine would be considered in the preparation research.

[Key words] Marine; In situ perfusion; Absorption kinetics; HPLC

苦参素（Marine，MA）是从豆科植物苦豆子中提取出来的生物碱[1]，具有抗感染、抑菌、抗病毒和抗肿瘤的作用。临床用于治疗乙型病毒性肝炎[2]，还可用于抗肿瘤、抗心律失常以及肿瘤放疗、化疗而引起的白细胞低下及其他原因引起的白细胞减少等[3]。现采用大鼠在体循环灌流的方法，对苦参素在胃肠道的吸收部位和吸收动力学进行研究，为剂型设计提供生物药剂学依据。

1 仪器、试药与动物

高效液相色谱仪（LC-10A vp泵、SPD-10A检测器、CBM-101工作站，日本岛津）；HL-2型恒流泵(上海青浦沪西仪器厂)；苦参素（宁夏紫荆花药业，批号：060916）；苦参素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0780-200004）；SD大鼠（体重250~300 g，福建医科大学动物中心提供）；甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液的配制

2.1.1 人工胃液的配制 按《中国药典》2005版二部附录配制含胃蛋白酶的人工胃液。

2.1.2 Krebs-Ringer（K-R）缓冲液的配制每1 000 ml内含NaCl 7.8 g、KCl 0.35 g、CaCl2 0.37 g、MgCl2 0.22 g、NaH2PO4 0.22 g、葡萄糖1.4 g、NaHCO3 1.37 g，用H3PO4或NaOH调节pH至7.4。

2.1.3 MA胃试液的配制精密配制约50mg/L的MA的0.1 mol/L盐酸溶液，作为胃试液。

2.1.4 MA肠试液的配制精密配制约50 mg/L的MA的pH7.4 K-R缓冲液溶液，作为肠试液。

2.1.5 MA标准液的配制分别用0.1 mol/L盐酸溶液和pH7.4的K-R缓冲液作为溶剂，精密配制约50 mg/L的MA的标准溶液，分别作为在体胃、肠实验的MA对照液。

2.2 循环液中苦参素的含量测定

2.2.1 色谱条件SHIMADZU ODS C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.1 mol/L NaH2PO4溶液（25∶75）；流速1.0 ml/min；波长210 nm。

2.2.2 方法学考察分别取空白循环液、苦参素对照液及供试液进样，在“2.2.1”项色谱条件下测定。结果显示，苦参素对照液的Rf=8.36 min，供试液的主峰保留时间与对照液一致，空白液在此条件下无干扰。

2.2.3 胃肠灌注液中苦参素的测定分别精密称取苦参素约50 mg，置50 ml量瓶中，加入工胃液、K-R缓冲液适量，超声溶解定容，制成含苦参素的一系列标准溶液，进样20 μl，以峰面积对浓度进行线性回归。苦参素在人工胃液的回归方程为：Y=7.685×104 C -7.229×103(r=0.999 91)，线性范围为15.07~301.40 μg/ml。苦参素在K-R缓冲液的回归方程为：Y=5.236×104 C +5.379×103(r=0.999 9)，线性范围为6.12~244.80 μg/ml。

2.3 在体吸收实验[4]

2.3.1 在体胃吸收实验 选实验前禁食一夜(自由饮水)，体重200 g左右的SD大鼠，腹腔注射戊巴比妥钠(40 mg/kg)，麻醉后固定。切开腹部，暴露胃，在贲门、幽门两处各切一小口，结扎贲门，用人工胃液将胃洗净。吸取胃灌注液4 ml并注射到胃内，结扎幽门。将胃放回腹腔，用红外灯保持体温37℃左右。胃灌注液中药物浓度为初始浓度。2、4、6、8 h后取出胃，将胃内药液转移至10 ml量瓶，用人工胃液少量多次地洗涤胃内部，洗液一并转入上述量瓶，最后用人工胃液定容，摇匀。将此量瓶中药物浓度作为终浓度，根据药物初始药量和终末药量之差(初始浓度×初始体积－终浓度×终体积)与时间的比值计算其每小时吸收率。

2.3.2 在体肠吸收实验选实验前禁食一夜(自由饮水)，体重200 g左右的SD大鼠，腹腔注射戊巴比妥钠(40 mg/kg)，麻醉后固定。沿腹中线打开腹腔(约2.5 cm)，于实验肠段两端各切一小口，在上端小口处插入直径为0.3 cm的玻璃管，并用线扎紧。用注射器将37℃的生理盐水缓缓注入肠管，洗去肠管内容物至净。然后在实验肠管下端小口处插入玻璃管，并用线扎紧。将肠管两端的玻璃管与蠕动泵的胶管连接，形成回路，开动蠕动泵。肠灌注K-R缓冲液以5 ml/min流速循环10 min后，将流速调节为2.5 ml/min，立即自灌注液锥形瓶中取样1 ml，同时向锥形瓶中补加空白回流液1 ml，其后每隔15 min亦按同法取样并补加，循环2 h后，中止实验。样品以10 000 转/min离心5 min，取上清液20 μl用HPLC法同时测定苦参素的浓度，根据Fick方程原理对药物浓度改变进行拟合，求药物的吸收参数。

进一步按以下方法取各小肠段进行结扎：十二指肠自幽门下3 cm处开始，空肠离幽门30 cm开始，回肠距离盲肠20 cm处开始，结肠从盲肠后段开始，各段均取10 cm左右。按上述实验方法取样并测定苦参素的浓度。

2.4 结果

以苦参素的胃灌注液进行在体胃吸收实验，以肠灌注液进行在体肠吸收实验，分别得到苦参素在大鼠胃、小肠和结肠2、4、6、8 h的吸收率，结果见表1。苦参素在大鼠各肠段(10 cm)十二指肠、空肠、回肠和结肠的吸收情况，结果参数见表2。

表1 苦参素在大鼠胃、小肠和结肠不同时间的吸收率(x±s，n=5)（%）

由以上实验可知，苦参素在十二指肠、空肠、回肠和结肠的吸收速率常数分别为（0.103±０．０３２）、（0.158±０．０３１）、（0.215±０．０７４）、（0.168±０．０６６） /h。2 h内胃、十二指肠、空肠、回肠和结肠中药物的吸收百分率分别为（３１.０2±１０．０８）%、（21.13±２．７１）%、（28.22±６．０９）%、（35.66±９．０１）%和（33.12±１３．２２）%，而8 h时胃中有（73.82±１９．２７）%的药物被吸收。

3 讨论

表1、2数据显示，药物在胃及小肠（回盲瓣以上，主要是空肠和回肠）有良好的吸收，可以认为苦参素具有广泛的吸收窗，有利于将其设计成口服制剂。

但文献表明苦参素可能在小肠下段（主要是结肠和直肠）被代谢成药理活性和治疗作用有很大差异的苦参碱[5,6]。如苦参素需要制成口服制剂，为使苦参素口服制剂有较为良好的吸收，提高生物利用度，降低不良反应，应考虑提高其在胃、小肠上段的吸收。

[参考文献]

[1]刘斌,李金亮,元英进.苦豆子种子中生物碱的分离及lehmannine的结构确定[J].中草药，2001,32(4):293-296.

[2]陈小松,王国俊,蔡雄,等.氧化苦参碱对乙型肝炎病毒转基因小鼠乙肝抗原表达的影响[J].第二军医大学学报,1999,20(10):746.

[3]李常青.氧化苦参碱治疗肝病的研究进展[J].热带医学杂志,2003,3(2):243-245.

[4]崔升淼,赵春顺,何仲贵,等.吲达帕胺大鼠在体胃、小肠的吸收动力学研究[J].沈阳药科大学学报,2002,19(3)：161.

[5]王素军,王广基,李晓天,等.HPLC-MS法测定Beagle犬血浆中氧化苦参碱及其药代动力学[J].中国临床药理学与治疗学,2004,9(7):751-754.

[6]宋永良,董青莲,陈海燕,等.3H-氧化苦参碱在小鼠及大鼠体内的代谢[J].中国医学科学院学报,1986,8(4):261-265.

（收稿日期：2008-03-13）

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