灵芝扶正颗粒的毒理学研究

【前言】灵芝扶正颗粒的毒理学研究由文秘帮小编整理而成，但愿对你的学习工作带来帮助。(1.The State Key Laboratory of Safety Evaluation on New Drugs in Guangzhou, Guangzhou Pharmaceutical Industrial Research Institute, Guangzhou 510240, China; 2.Shenyang Wan-jia Bio-technology Research Institute，Shenyang 110015, China) [Abstract] Ob...

[摘要] 目的：观察大鼠和小鼠口服灵芝扶正颗粒的急性毒性和长期毒性作用，为临床试验设计人用安全剂量和主要观察指标提供参考。方法：以SPF级NIH小鼠进行最大给药量法的急性毒性试验；用SPF级SD大鼠进行长期毒性试验，192只大鼠按性别与体重随机分为低、中、高三个剂量组（灵芝扶正颗粒1.63、3.25、6.51 g/kg）和一个空白对照组，每日按1.5 ml/100 g灌胃给药一次，每周给药6 d，连续26周。结果：小鼠体重增长、摄食量与空白对照组相比较均无明显差异，试验过程中未见动物死亡，大体解剖也未发现组织器官出现体积、颜色、质地等病理改变。各组SD大鼠的外观体征、行为活动、粪便性状及摄食量等未见明显异常，体重正常增长，血液学和血液生化学检查未见与毒性作用相关的异常变化，病理剖检和组织检查均未见特征性的病理学改变。结论：小鼠口服灌胃灵芝扶正颗粒允许的最大耐受量为20 g/kg，未观察到灵芝扶正颗粒（1.63~6.51 g/kg）对SD大鼠有特征性毒性作用，也未观察到其延迟性毒性作用。

[关键词] 灵芝扶正颗粒；毒性研究；大鼠；小鼠

[中图分类号]R965.3 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）08（b）-013-03

Studies on toxicity of Ling-Zhi-Fu-Zheng Granules

LI Yun-feng1, YANG Wei1, AI Li2

(1.The State Key Laboratory of Safety Evaluation on New Drugs in Guangzhou, Guangzhou Pharmaceutical Industrial Research Institute, Guangzhou 510240, China; 2.Shenyang Wan-jia Bio-technology Research Institute，Shenyang 110015, China)

[Abstract] Objective: To study on toxicity of Ling-Zhi-Fu-Zheng Granules for oral administration in rats and mice. Methods: The acute toxicity of Ling-Zhi-Fu-Zheng Granules was studied in NIH mice with most tolerance dose method (MTD). 192 rats were randomized into low dosage group, moderate dosage group, high dosage group and control group to observe the chronic toxicity of Ling-Zhi-Fu-Zheng Granules, following 26 weeks continuum oral administration at a dosage of 1.5 ml per 100 g body weight per day in rats, general status, parameters of hematology, blood biochemistry and pathology-organize observation were measured to evaluate the toxicity. Results: Body weight and feedingstuff of mice had no evident difference comparing with control group at the dose of 20 g/kg, and died animals were not observed in the experiment; appearance, behavior, feces, body weight and feedingstuff of rats had no evident difference comparing with control group and, hematology, blood biochemistry and pathology-organize observation had also no evident abnormity changes in correlation with the drug. Conclusion: The MTD is 20 g/kg with single irrigation of Ling-Zhi-Fu-Zheng Granules in mice; the characteristic toxicity effect were not observed at a dosage of 6.51 g per1 kg body weight per day Ling-Zhi-Fu-Zheng Granules in rats.

[Key words] Ling-Zhi-Fu-Zheng Granules; Toxicity; Rats; Mice

灵芝扶正颗粒是沈阳市万嘉生物技术研究所研制的新药，拟用于恶性肿瘤的辅助治疗，根据新药审批办法有关规定[1,2]，进行小鼠急性毒性和大鼠长期毒性试验，为临床试验设计人用安全剂量和主要观察指标提供参考。

1 材料与方法

1.1实验材料

1.1.1药物灵芝扶正颗粒由沈阳市万嘉生物技术研究所提供，批号：061101，实验前用蒸馏水配成不同浓度的混悬液灌胃使用。

1.1.2 动物SPF级NIH小鼠60只，雌雄各半，体重(19.0±0.5) g；SPF级SD大鼠210只，雌雄各半，体重(162±8) g、(197±10) g；购自广东省医学实验动物中心，实验动物生产许可证号：SCXK（粤）2003-0002，实验动物质量合格证号分别为粤监证字2006A017、2006A015。动物实验环境设施合格证号为粤监证字2006C126，实验动物使用许可证号：SYXK（粤）2003-0003。

1.2 实验方法[3-5]

1.2.1 小鼠急性毒性试验取小鼠20只，雌雄各半，于实验前１天隔夜禁食不禁水，上下午各灌胃给药一次，体积为0.4 ml/10 g（最大体积），药物浓度为0.5 g/ml药液（最大浓度），观察14 d后进行病理学剖检。

1.2.2 大鼠长期毒性试验取大鼠192只，雌雄各半，按性别与体重随机分为空白对照组，灵芝扶正颗粒低、中、高剂量组（1.63、3.25、6.51 g/kg，为临床的39.4、78.8、157.6倍），每日按1.5 ml/100 g灌胃给药一次，连续26周。在给药13、26周时每组分别取12、24只大鼠（雌雄各半）进行血液学（红细胞、白细胞、血红蛋白、血小板、白细胞分类计数、网织红细胞数、凝血酶原时间）、血液生化学（天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、肌酸磷酸激酶、尿素氮、肌酐、总蛋白、清蛋白、血糖、总胆红素、总胆固醇、三酰甘油、Na+、K+、Cl-）、脏器称重并计算脏器系数（脑、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肾上腺、胸腺、、附睾、子宫、卵巢）及病理学检查，停药4周后余下的12只大鼠进行同样实验室检查。

2 结果

2.1 灵芝扶正颗粒小鼠急性毒性试验

药物浓度为0.5 g/ml药液（最大浓度），体积为0.4 ml/10 g（最大体积），部分小鼠在给药后出现自主活动减少，3 h后恢复正常；在14 d的观察期间，全部小鼠存活，且体重增长、摄食量与空白对照组相比较均无明显差异（表1、2）。存活小鼠病理剖检肉眼观察主要脏器，未见心、肝、脾、肺、肾等主要脏器组织明显异常。灵芝扶正颗粒灌胃给药，测得小鼠的最大耐受量为20 g/kg，接近临床用量的484倍。

2.2 灵芝扶正颗粒大鼠长期毒性试验

2.2.1 灵芝扶正颗粒对大鼠体重的影响大鼠在实验期间活动、饮食、体重与空白对照组比较无明显差异。

2.2.2 灵芝扶正颗粒对大鼠血液学的影响给药13周，雄性动物高、中剂量组中性白细胞明显高于空白对照组，淋巴细胞明显低于空白对照组；雌性动物中剂量组的平均血红蛋白浓度明显高于空白对照组，而在给药26周、停药4周时均未见相应的变化，也未见剂量相关性，属于正常范围内的波动性变化。给药13周，雌性动物高剂量组血小板数低于空白对照组；停药4周，雌性动物高剂量组血小板数高于空白对照组；这种变化未见时间相关性，也未见剂量相关性，属于正常范围内的波动性变化。停药4周，雌性动物高、中、低剂量组平均血红蛋白含量高于空白对照组，雌性动物低剂量组红细胞平均体积高于空白对照组；这些变化幅度不大，属于正常范围内的波动性变化（表3）。其余血液学指标均在正常值范围内，与对照组比较无差异。

与空白对照组比较，*P

2.2.3 灵芝扶正颗粒对大鼠血液生化学的影响给药13周，雌性动物高、中、低剂量组尿素氮明显低于空白对照组，雌性动物高、中剂量组钾离子浓度高于空白对照组；雌性动物中剂量组碱性磷酸酶、血糖、三酰甘油低于空白对照组；雄性动物高剂量组碱性磷酸酶低于空白对照组；雄性动物中剂量组丙氨酸氨基转移酶、尿素氮、肌酐、血糖明显高于空白对照组；给药26周，雌性动物高剂量组碱性磷酸酶高于空白对照组；停药4周，雌性动物高、低剂量组碱性磷酸酶低于空白对照组。这些变化未见时间相关性，也未见剂量相关性，属于正常范围内的波动性变化。给药13周，雄性动物中剂量组清蛋白、总蛋白、总胆红素、Cl-浓度明显低于空白对照组；给药26周，雌性动物中剂量组总胆红素低于空白对照组，雌性动物低剂量组肌酸激酶低于空白对照组；停药4周，雌性动物中剂量组总蛋白高于空白对照组（表4）。这些变化未见时间相关性，也未见剂量相关性，属于正常范围内的波动性变化。

2.2.4 灵芝扶正颗粒对大鼠脏器系数的影响连续灌胃给药13、26周时，每组分别股动脉放血处死12、24只大鼠（雌雄各半），剖检并仔细观察是否有肉眼可见病变后，迅速摘取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肾上腺、胸腺、脑、、附睾、子宫、卵巢等脏器称重并计算脏器系数（脏器系数=脏器湿重/动物体重×100）。结果显示，给药13周时，雌性大鼠高剂量组肝脏的脏器系数大于空白对照组；26周时，雄性大鼠高剂量组肝脏的脏器重量和脏器系数大于空白对照组；停药4周时，雄性大鼠高剂量组肝脏的脏器重量和脏器系数大于空白对照组。

2.2.5 组织学形态检查 各组织用10%中尔马林固定，常规石蜡制片，HE染色后进行光镜检查。空白对照组及各剂量组大鼠的脑、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肾上腺、胸腺、、附睾、子宫、卵巢等脏器的解剖位置、外形、大小、颜色、体积、质地、表面及切面均未见明显异常。

3 讨论

灵芝扶正颗粒是以名贵中药灵芝孢子为主的中药复方，拟用于恶性肿瘤的辅助治疗。灵芝扶正颗粒的急性毒性和大鼠长期毒性实验表明，小鼠以最大浓度、最大体积的灵芝扶正颗粒口服灌胃，一天2次，最大耐受量为20 g/kg；灵芝扶正颗粒（1.63~6.51 g/kg）连续灌胃给药26周，给药组的中性白细胞、血小板数、平均血红蛋白含量及尿素氮、碱性磷酸酶、清蛋白、总蛋白、总胆红素等指标与空白对照组比较有显著性差异，但这些变化未见时间相关性，也未见剂量相关性，属于正常范围内的波动性变化；大体剖检和组织学检查均未见特征性病理学改变，未观察到灵芝扶正颗粒对大鼠有特征性毒性作用，也未观察到其延迟性毒性作用，为灵芝扶正颗粒临床应用提供了毒理学依据。

[参考文献]

[1]国家食品药品监督管理局.药物非临床研究质量管理规范[S].2003-08-06.

[2]国家食品药品监督管理局.药品注册管理办法[S].2005-02-28.

[3]《中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则》课题研究组.中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则[S].2005.

[4]袁伯俊，王治乔.新药临床前安全性评价与实践[M].北京：军事医学科学出版社，1997.

[5]孙敬方．动物实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，2001.

（收稿日期：2008-06-30）

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